理化因子对银杏组织培养中黄酮类化合物产生影响的研究

【摘要】： 本文以银杏幼叶诱导出的愈伤组织为材料, 进行继代培养,并选出松软的细胞团进行液体培养；考察不同的物理、化学和生物因子对愈伤组织中黄酮类化合物含量的影响。不同浓度的La3+对银杏愈伤组织生长具有显著影响，分别加入10-4g/L、10-3g/L、10-2g/L、10-1g/L镧离子的培养基上愈伤组织生长速度均优于对照，其中10-4g/L的浓度最佳, 继代培养和液体培养的结果也是一致的，但黄酮类化合物含量却随着镧离子浓度的提高而降低。考虑到当生物处于逆境时，Ca2+浓度升高，以及黄酮类化合物产生中的某些酶需要Ca2+的参与, 所以在培养基中改变了Ca2+的浓度, 但培养基中Ca2+的浓度与黄酮类化合物含量的关系仍需进一步证实。而在基本培养基中去掉Ca2+进行继代培养半年,再加入不同浓度的La3+, 发现加入La3+的培养基中长出的愈伤组织中黄酮类化合物含量均低于对照, 而La3+浓度的高低对黄酮类化合物含量的影响很小。本实验还发现随着继代培养次数的增多, 愈伤组织中黄酮类化合物含量也会减少。 利用低温对愈伤组织进行处理(每天放入4~6℃下30mins), 其黄酮类化合物含量比对照没有明显提高；然后将同一愈伤组织进行继代培养出的细胞团放入4~6℃下处理30分钟,然后放置常温下每30mins测定黄酮类化合物含量一次, 发现30mins后测定的结果比低温处理后立刻测定的结果低, 而以后的结果没有什么变化; 低温处理30mins后黄酮类化合物含量就比对照高, 而此后继续进行低温处理,黄酮类化合物含量不会发生太大变化，这说明低温刺激黄酮类化合物产生持续的时间很短。在液体培养测定细胞生长曲线时发现培养的前10天为延滞期, 从第11天到第15天为指数增长期。所以选择第10天和第15天作为液体培养的测定时间。在加入Cu2+后发现细胞生长受到轻微抑制,而且浓度越高抑制作用越强。加入黄酮类化合物产生的前体物(0.05g/L的苯丙氨酸和0.2g/L的乙酸钠)后, Cu2+对细胞生长的抑制作用会被缓解., 而且黄酮类化合物含量比对照增加1倍到2倍； 考虑两种相反的作用，浓度为10-4mol/L 的Cu2+是比较合适的，可以认为Cu2+是一种良好的非生物诱导子。而水杨酸的加入可以提高悬浮细胞中黄酮类化合物含量，其机制需进一步证实。