收藏本站
《河南大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

抗ErbB2/CD16三价双特异性抗体的抗肿瘤作用

陆寒  
【摘要】: 背景 双特异性抗体(bispecific antibody, BsAb)是一类具有双亲嗜性的组合抗体,具有结合两种不同特异性抗原的功能。本室构建的抗ErbB2/CD16三价BsAb具有同时与肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原以及与效应细胞表面的触发分子结合的特性,该抗体为三价,它以双价的单链抗体(scFv)形式与肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原ErbB2高亲和力结合,以单价的Fab形式与效应细胞的表面分子CD16低亲和力结合。这种三价的BsAb在直接介导效应细胞对肿瘤细胞杀伤活性的基础上,增强了效应细胞的靶向杀伤作用,并避免了因与效应细胞高亲和力结合造成的效应细胞广泛激活引起的副作用,具有良好的抗肿瘤临床应用前景。本研究对三价BsAb进行表达纯化,并对其抗原结合活性、体内外杀伤ErbB2过表达肿瘤细胞的功能进行了初步研究。 目的 研究和探讨抗ErbB2/CD16三价BsAb体内、外介导效应细胞的抗肿瘤活性。 方法 采用基因工程技术构建的抗ErbB2/CD16三价BsAb为His标签蛋白,通过IPTG诱导表达。该BsAb可在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,对包涵体进行变、复性处理获得目的蛋白。为进一步比较此BsAb与其亲本抗体生物活性的差异,我们应用悬浮培养系统扩增了稳定表达抗人CD16 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(CG5细胞)和稳定表达抗人ErbB2 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(HG2细胞),通过夹心ELISA法实时检测了250 ml悬浮培养系统中工程细胞在培养2、4、6、7天时培养上清中融合蛋白的含量,使用rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析柱纯化融合蛋白。 FACS检测抗ErbB2/CD16三价BsAb与高表达ErbB2的SKBR3细胞及表达CD16的外周血单个核细胞的结合活性,并分析此结合活性是否受人IgG和血清存在的影响。LDH释放法检测此三价BsAb介导效应细胞对三种靶细胞的杀伤作用。倒置显微镜观察此三价BsAb介导的动态杀瘤作用。动物模型分析抗ErbB2/CD16三价BsAb在体内的抗肿瘤活性,并与其亲本抗体抗ErbB2 scFv-Fc比较抗瘤活性。 结果 获得浓度为1mg/ml抗ErbB2/CD16三价BsAb及浓度为2mg/ml亲本抗体抗ErbB2 scFv-Fc融合蛋白和抗CD16 scFv-Fc融合蛋白。 FACS检测显示抗ErbB2/CD16三价BsAb能够与高表达ErbB2的SKBR3细胞及表达CD16的人外周血单个核细胞结合,并且这种结合活性不受到人IgG和血清存在的影响。此BsAb能够有效地介导效应细胞对SKBR3细胞的ADCC作用,尤其是在较低效靶比的情况下这种作用更为明显。与其两种亲本抗体相比,三价BsAb的杀瘤活性更加显著。BsAb能有效地介导效应细胞对SKBR3细胞的杀伤作用,而对MCF-7细胞和COS-7细胞无明显的杀伤作用,说明这种抗瘤作用与细胞表面ErbB2分子的密度有关。 三次动物体内实验显示,抗ErbB2/CD16三价BsAb在ErbB2高表达的肿瘤动物模型中能有效地介导LAK细胞对SKOV3细胞的杀伤,证明了其良好的抗瘤活性。三价BsAb的抑瘤活性显著优于抗ErbB2 scFv-Fc组和荷瘤对照组(P 0.01),并且无明显的毒副作用。 结论 体内、外实验显示抗ErbB2/CD16三价BsAb有良好的抗肿瘤活性,说明了三价BsAb对于ErbB2高表达肿瘤的治疗和术后微小残留灶、转移灶的清除,具有明显的临床应用价值。
【学位授予单位】:河南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R730.5

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 周爱萍,冯奉仪;乳腺癌靶向治疗:Herceptin的研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);2000年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 楼敏;皇甫玉珊;;双特异性抗体的制备和应用[J];引进国外医药技术与设备;1995年02期
2 崔斐;罗荣城;陈锦章;陈斌;黄宇贤;;紫杉醇联合Herceptin或表阿霉素治疗Her-2/neu阳性乳腺癌患者的临床疗效[J];第一军医大学学报;2005年12期
3 朱伟,朱迅;双特异性抗体与肿瘤生物治疗[J];国外医学(肿瘤学分册);1995年04期
4 楼敏;双特异性抗体在肿瘤免疫治疗中的应用[J];国外医学(肿瘤学分册);1997年04期
5 张辛燕,李小平;双特异性抗体治疗恶性肿瘤的研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);2002年03期
6 杨淑华,牛瑞芳;双特异性单克隆抗体在乳腺癌免疫治疗中的研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);2005年06期
7 莫庆玉;赵静;;HER-2阳性乳腺癌患者应用赫赛汀联合化疗的护理体会[J];贵州医药;2012年08期
8 叶和珍;李香利;薛丽娜;;赫赛汀靶向治疗HER-2过度表达乳腺癌的效果及护理[J];海峡药学;2012年05期
9 任青;阮仙英;陈先玲;王雯易;;赫赛汀在治疗HER-2高表达乳腺癌中的护理[J];护理实践与研究;2011年23期
10 罗荣城,季晨阳,李爱民,尤长宣,张军一,石敏,缪景霞,宋海珠;Herceptin治疗Her-2过度表达的转移性乳腺癌7例报告[J];解放军医学杂志;2002年10期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 罗荣城;李爱民;张军一;尤长宣;廖旺军;季晨阳;缪景霞;;Herceptin治疗Her-2过度表达的转移性乳腺癌初步报告[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 解志刚;基因工程抗HER2/neu ×抗CD16双特异性抗体的构建、表达及其功能的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
2 向泽敏;热休克蛋白65-HER2多表位融合蛋白的构建及其生物学功能研究[D];吉林大学;2006年
3 张洁清;WWOX基因在卵巢癌浸润转移机制的研究[D];广西医科大学;2007年
4 尹娜;FcαR在中性粒细胞的亚细胞定位和FcαR剪接体表达分析&依赖于FcαR的双特异性分子在自身免疫疾病治疗中的初步探索[D];中国协和医科大学;2007年
5 杨华锋;悬浮芯片联合高效液相色谱检测乳腺癌血清标志物的研究[D];南方医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 赵瑞;抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性单链抗体BHL-1的生物活性研究[D];西北农林科技大学;2003年
2 刘岩雪;荧光原位杂交技术检测乳腺癌Her-2/neu基因扩增的方法学研究[D];天津医科大学;2005年
3 谭科;Herceptin与Doxorubicin序贯应用对乳腺癌细胞的杀伤效应[D];第一军医大学;2006年
4 傅蓉;利用人源性噬菌体抗体库筛选HER2抗体[D];沈阳药科大学;2006年
5 俞新爽;乳腺癌患者细胞免疫指标与危险预后因素的相关性分析及临床意义[D];山东大学;2007年
6 白燕峰;双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER2基因状态和17号染色体的分析[D];浙江大学;2010年
7 陈旭坚;血清肿瘤标志物CEA、CA125、CA15-3对Herceptin联合TAX治疗Her-2过表达晚期乳腺癌的疗效预测[D];南方医科大学;2010年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 解志刚;基因工程双特异性抗体构建模式及其在肿瘤诊治中的应用[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2001年03期
2 张玉勤;;双特异性抗体—杀伤癌细胞的新式武器[J];国外医学情报;1996年23期
3 张辛燕,李小平;双特异性抗体治疗恶性肿瘤的研究进展[J];国外医学.肿瘤学分册;2002年03期
4 朱慧芬,王晓林,张悦,沈关心,熊伟;抗CD3-抗B细胞白血病独特型双特异性抗体的制备及细胞毒性[J];细胞与分子免疫学杂志;1998年01期
5 楼敏;皇甫玉珊;;双特异性抗体的制备和应用[J];引进国外医药技术与设备;1995年02期
6 陈小东;双特异性抗体在肺癌免疫治疗中的应用[J];国外医学.呼吸系统分册;1996年03期
7 刘敏;王露楠;李金明;;双特异性抗体靶向治疗及动物模型的设计[J];生命的化学;2008年03期
8 李康,杨冬华;双特异性抗体及其在肿瘤诊治上的研究进展[J];医学分子生物学杂志;2005年03期
9 金永柱;双特异性抗体的应用[J];国外医学.寄生虫病分册;2001年03期
10 肖琅,杨春红,刘迎午,朱争艳,吴鸿燕,杜建民;双特异性抗体治疗小细胞肺癌的实验研究[J];实用癌症杂志;2002年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王洁;沈洪昇;王彬;;2-氧-2-苯氧基-4H-螺{萘[2,3-e][1,4,2]氧氮杂膦烷-5,10-二酮对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒实验研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
2 余海;廖小宜;周志俞;卢勇;;人颊癌细胞在胶原凝胶中生长和浸润特性初步研究[A];海南省口腔医学会第二次学术会议论文汇编[C];2000年
3 陈向荣;;粘附法筛选胃癌细胞亚株及鉴定[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
4 刘琦;吴波;姜少军;孟奎;石群立;施正良;;全反式维甲酸对卵巢上皮性癌荷瘤鼠干预后肿瘤细胞的超微结构变化[A];江苏省抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第四次肿瘤学术研讨会暨无锡市妇产科年会论文汇编[C];2005年
5 卜宁;孙秉中;;Exosomes对L1210肿瘤细胞攻击的免疫保护作用研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
6 王卉;杨国仁;宋现让;赵书强;王兴武;赵伟;于金明;;[11C]PD153035表皮生长因子受体在不同表达水平肿瘤细胞的初步研究[A];首届全国分子核医学暨分子影像学学术交流会资料汇编[C];2006年
7 魏群;陈萍;王以;曹江;;eIF3s4 cDNA的克隆与表达载体的构建[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年
8 高丰光;Germain J.P.Fernando;刘文军;;Th细胞在记忆性CTL介导的肿瘤保护中作用的研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
9 龙塔;潘耀谦;佘锐萍;董发明;王天奇;杨玉荣;刘志军;;血管内皮生长因子在牛流行性白血病肿瘤组织的表达及其意义[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年
10 李朋军;夏潮涌;;肿瘤细胞DNA干系倍体分析及其临床应用[A];第十一届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘向;德开发出预测癌症复发新方法[N];新华每日电讯;2005年
2 李凯;化疗也艺术[N];健康报;2006年
3 本报记者 马爱平;纳米药物会成为治癌“导弹”吗?[N];科技日报;2007年
4 本版编辑夏洪平 编译 复旦大学附属中山医院肺科 张新;肺癌细胞有“致命弱点”[N];健康报;2008年
5 王兵;硒为何被人们称为“抗癌之王”[N];保健时报;2006年
6 李斌吴晶晶 点评人 中科院生物物理研究所研究员 梁伟;“精确制导”打击癌细胞[N];人民日报;2007年
7 黑龙江省大庆市第一医院 张新平衣晓峰 整理;基底细胞癌为何转移少[N];健康报;2008年
8 记者 张冬素;“策反”肿瘤细胞“卫兵”[N];浙江日报;2005年
9 郑颖璠 方彤;CT抗原和肝癌[N];健康报;2007年
10 夏博 译;肿瘤转移前早有准备[N];健康报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 解志刚;基因工程抗HER2/neu ×抗CD16双特异性抗体的构建、表达及其功能的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
2 胡品良;ErbB2与其自身抑制因子的作用位点及其相互作用机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
3 陈立勇;ErbB2入核机制研究初探[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
4 张娜;血小板促进肿瘤细胞转移的相关机制研究[D];北京协和医学院;2009年
5 高玲;STAT3及ErbB2 RNA干涉结合放疗治疗脑胶质瘤的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
6 焦阳;基质金属蛋白酶-2通过分解纤连蛋白促进整合素αvβ3-介导的肿瘤细胞的黏附与迁移[D];东北师范大学;2012年
7 吴昊;肿瘤微环境因子乳酸在肿瘤细胞适应葡萄糖缺乏中的作用及其机理[D];浙江大学;2012年
8 韩根成;抗病毒及抗膜补体调节蛋白双特异性抗体的制备及效应研究[D];第三军医大学;2002年
9 杨云山;IL-2基因修饰的肿瘤细胞来源的Exosomes的抗肿瘤作用及相关机制研究[D];浙江大学;2005年
10 沈国栋;针对ErbB2受体的工程抗体及细胞内抗体的抗乳腺癌和卵巢癌的作用及其机制[D];安徽医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陆寒;抗ErbB2/CD16三价双特异性抗体的抗肿瘤作用[D];河南大学;2008年
2 吴英鹰;erbB2癌基因mRNA在头颈部恶性肿瘤组织中的表达研究[D];广西医科大学;2004年
3 韩晓燕;NOX家族蛋白在射线杀死肿瘤细胞中的作用[D];兰州大学;2012年
4 万剑;肿瘤细胞计算机辅助诊断系统的研究[D];华中科技大学;2004年
5 黄启超;IFN-α2a-NGR的肿瘤细胞敏感性研究[D];第四军医大学;2010年
6 杨丽娟;E-cadherin对肿瘤细胞转移进入血液循环后存活的影响及机理研究[D];北京协和医学院;2010年
7 孟文霞;抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用[D];河北医科大学;2002年
8 刘爱华;缺氧上调肿瘤细胞PlexinB1基因表达的实验研究[D];华中科技大学;2010年
9 王元;原卟啉Ⅸ对S180和L1210肿瘤细胞DNA损伤及机制初探[D];陕西师范大学;2010年
10 程倩;pp32/PHAPI调控肿瘤细胞迁移的作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026