收藏本站
《河南大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

柚皮素及聚乙二醇增强乙肝DNA疫苗免疫效果的研究

芦丽淦  
【摘要】: 背景 乙肝是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)引起的严重危害人类健康的传染性疾病之一。我国HBsAg携带者超过1.2亿,其中慢性乙型肝炎携带者约三千万,每年约有100—150万人死于急慢性HBV感染。对这类患者目前尚缺乏有效的治疗方法,常导致患者病情迁延不愈,部分患者发展为肝硬化甚至肝癌,给社会和家庭带来极为沉重的负担。目前对于慢性乙型肝炎患者,主要还是通过抗病毒、免疫调节、改善肝功能和和抗肝纤维化等手段进行综合治疗,效果并不理想。因此接种乙肝疫苗是预防和控制乙肝病毒传播的重要措施。然而目前的乙肝疫苗还存在着以下几个问题:第一,现有疫苗不能打破乙肝患者或乙肝病毒携带者机体的免疫耐受并清除病毒;第二,对可能逃避现有疫苗保护作用的HBsAg变异株的存在还有争议;第三,在进行乙肝全程免疫的人群中,约有5%~10%的人不产生保护性抗体或抗体水平很低。 近年来发展的乙肝DNA疫苗则有望解决这些问题。DNA疫苗同时具有类似减毒活疫苗的优点和灭活疫苗或亚单位疫苗的安全性,具有预防和治疗疾病的双重作用,近些年得到了快速而广泛的发展。然而就目前而言,其总的免疫效果仍不尽人意。比如,DNA疫苗在小动物实验中免疫效果较好,在大动物的实验中却效果欠佳;再者,尽管DNA疫苗在动物实验中能起到很好的免疫保护作用,但在临床试验中却不能保护受试者抵抗病原体的攻击。因此增强DNA疫苗的免疫效果是目前亟待解决的一个科学难题,而开发新型佐剂和缓释剂使之能够激发更强的细胞免疫是两种有效的手段。柚皮素具有抗菌、消炎、抗癌、解痉和利胆等作用。最近有研究报道柚皮素对急性免疫性肝损伤具有保护作用。目前对于柚皮素是否增强乙肝核酸疫苗免疫效果的研究报道很少。因此本论文首先就柚皮素能否作为乙肝核酸疫苗的一种新型佐剂开展了深入的研究,探讨了其增强乙肝核酸疫苗的免疫机制。 另外,研究证实肽或蛋白质的聚乙二醇化,能够延缓其半衰期,增加其水溶性和稳定性。目前对于聚乙二醇能否对质粒DNA进行包裹并具有延缓作用仍然没有深入的研究。因此本论文的第二部分工作选择聚乙二醇作为发送系统对HBV DNA疫苗免疫效果开展系统的研究。 目的 本研究利用柚皮素作为佐剂,通过检测抗体水平,T细胞增殖的效果及体内细胞毒T淋巴细胞反应来评价其对乙肝DNA疫苗的影响,并通过细胞因子的检测,进一步阐明柚皮素增强乙肝DNA疫苗免疫效果的作用机理。同时研究聚乙二醇作为载体发送系统是否能够增强HBV DNA疫苗的细胞免疫和体液免疫效果。 方法 利用分子生物学技术构建含有HBV pre-S2和S基因的真核表达载体pVAX-S2,经测序确定载体构建成功后,用脂质体瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测293T细胞确定转染成功并表达S2基因后,我们将HBV DNA疫苗(pVAX-S2)单独或不同浓度的柚皮素联合HBV DNA疫苗(pVAX-S2),PEG/pVAX-S2免疫C57BL/6小鼠,在最后一次免疫14天时检测抗-HBs IgG、T淋巴细胞增殖、细胞因子表达及体内细胞毒T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标。 结果 成功构建含有HBV pre-S2和S基因的真核表达载体pVAX-S2。与仅免疫pVAX-S2比,不同浓度的柚皮素联合HBV DNA疫苗(pVAX-S2),PEG/ pVAX-S2能够增加免疫小鼠抗-HBs IgG水平;混合免疫组的T淋巴细胞体外经乙肝表面抗原(HBsAg)刺激后,T淋巴细胞增殖数量显著高于对照组;另外,混合免疫组CD4+ T淋巴细胞中IL-4和IFN-γ以及CD8+ T淋巴细胞中IFN-γ的表达显著高于对照组。更重要的是,混和免疫组HBsAg特异性CTL显著高于对照组。 结论 研究结果显示,柚皮素不但增强乙肝DNA疫苗的体液免疫反应,而且增强细胞免疫反应。尤为重要的是,从治疗角度上来讲,1%柚皮素与DNA疫苗共同免疫组激发机体在CD4+或CD8+ T细胞中IFN-γ的产生,这将有利于慢性感染者体内病毒的清除和控制。研究中还发现,柚皮素增强了促炎症性因子IL-12的表达,下调了T淋巴细胞中抗炎症因子IL-35和TGF-β的表达,启动了TGF-β的下游信号分子Smad家族。因此,柚皮素可以给机体提供一个抑制性因素少的微环境,从而更有利于诱发外源抗原产生更强大的免疫反应。此外,柚皮素很容易与DNA疫苗混合并免疫动物,而且柚皮素作为中药制剂对动物几乎没有任何明显的不良反应。总之这些研究证实柚皮素不但增强了乙肝疫苗的细胞介导的免疫反应,增强了治疗作用,而且也进一步探索了其作用机制,这将为以后在应用生产实践中打下坚实的基础。同时发现PEG作为载体发送系统不仅能够增强机体的体液和细胞免疫反应,而且显著增强了体内CTL的杀伤活性,为进一步研究HBV DNA奠定了基础。
【学位授予单位】:河南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴晓玲,曾维政,蒋明德,王丕龙,邓桂英,秦建平;红景天甙对肝纤维化大鼠Samds基因表达的影响[J];第四军医大学学报;2005年10期
2 李河民;梁争论;;发挥肝炎疫苗的免疫作用 控制乙型肝炎的流行[J];高科技与产业化;2006年Z1期
3 何学令;杨光;尹海林;张雪梅;;聚乙二醇化重组人白细胞介素-6大鼠皮下注射的药代动力学研究[J];四川大学学报(医学版);2009年01期
4 胡永祥,牛津梁,张文博,高林;聚乙二醇修饰药物技术的研究进展[J];中国生化药物杂志;2004年06期
5 赵媛;赵伟;姚文兵;赵艳玲;高向东;;聚乙二醇化重组复合干扰素对小鼠免疫功能的影响研究[J];中国生化药物杂志;2007年03期
6 胡振林,孙树汉;DNA的免疫激活作用——Ⅱ应用基础研究进展[J];中国生物工程杂志;2002年03期
7 吴超,邹全明;新型疫苗佐剂的研究进展[J];中国生物工程杂志;2005年08期
8 杜小刚;康有敏;王肖;王军朋;赵干;王宾;;免疫共刺激分子OX40L对乙型肝炎核酸疫苗的免疫佐剂作用[J];微生物学报;2009年03期
9 吴晓玲;曾维政;王丕龙;;TGFβ-Smad信号转导通路与肝纤维化[J];世界华人消化杂志;2003年10期
10 吴晓玲,曾维政,王丕龙;中药干预肝纤维化的分子机制[J];世界华人消化杂志;2004年12期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 林红;张国梁;;中药软肝饮对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响[J];浙江中医药大学学报;2008年02期
2 彭丽萍;赵大鹏;戚凤春;汪春义;张雪梅;贾媛;匡科伟;陈云波;宋泽民;赵晓红;徐建国;;甲型流感病毒DNA疫苗双表达载体的构建及表达[J];吉林大学学报(医学版);2008年01期
3 李志钢;杨晋翔;谢春光;段渠;张伟;王再谟;;中药肝心宁对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响[J];成都中医药大学学报;2009年02期
4 崔凤梅;刘艳丽;何凤翔;孙亚娟;范美惠;李隆庆;;乙型肝炎病毒感染高危人群乙型肝炎疫苗复种意识的调查[J];重庆医学;2012年02期
5 宋雪芳;曾滢;朱凤才;;乙型肝炎疫苗的研究应用进展[J];传染病信息;2008年03期
6 李会影;李瑞丽;;红景天药理作用机制研究进展[J];长春中医药大学学报;2006年02期
7 黄燕;谭德明;彭敏源;;慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化[J];中国感染控制杂志;2009年06期
8 蒋蓓琦;陈庆华;;Depot作为妇科用药缓控释剂型开发和临床应用进展[J];世界临床药物;2007年04期
9 郭玲玲;邢爽;李明;熊国林;谢玲;赵燕芳;黄岩山;王玉姣;罗庆良;;重组人粒细胞集落刺激因子融合蛋白对急性放射病小鼠的治疗作用[J];国际药学研究杂志;2011年04期
10 崔媛;李艳辉;段潜;;多孔纳米二氧化硅球的制备及其对胰岛素的担载和释放行为[J];硅酸盐学报;2013年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 陈晓莉;彭洁;乔逸;王胜春;;五灵胶囊有效成分对TGF-β1诱导HSC-T6表达Ras/ERK、TGF-β/Smad信号通路蛋白的影响[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 钱益平;白藜芦醇、咖啡酸苯乙酯、羟基化查耳酮及其类似物抗氧化和促氧化的机制和构效关系研究[D];兰州大学;2010年
2 许道军;弗氏佐剂和Al(OH)_3佐剂对小鼠脾脏Tregs及CD4~+T细胞相关基因的影响研究[D];湖南农业大学;2010年
3 郭敏;化浊解毒中药血清及补骨脂素对肝星状细胞生物活性的影响[D];河北医科大学;2011年
4 周玉娟;合浦珠母贝TGFβ信号通路相关基因的克隆及功能研究[D];清华大学;2010年
5 任敦强;HMGB1诱导免疫损伤致肺纤维化的细胞分子机制及天龙总黄酮的干预作用[D];广州医学院;2011年
6 杨丰利;南宁市郊奶牛乳腺炎相关研究及其对繁殖性能的影响[D];广西大学;2011年
7 代昭;烷基壳聚糖纳米微球的制备及其药物负载性能研究[D];天津大学;2003年
8 李继海;梅花鹿茸活性成分提取分离、功能评价及功能食品研究[D];中国农业大学;2005年
9 吴晓玲;红景天甙对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad信号通路的影响[D];重庆医科大学;2005年
10 杨楠;色素上皮细胞衍生因子的实验研究[D];吉林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙钢;归脾汤加味治疗肝癌TACE术后气血两虚型患者的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 梁建鹤;阳极氧化法制备TiO_2纳米管阵列及其性质研究[D];福建师范大学;2010年
3 刘连连;卵巢癌患者TGF-β1和Smad4的血清水平及Smad4在卵巢组织的表达[D];吉林大学;2011年
4 陈欢;JAK/STAT和PI3K/AKT信号通路在TGF-β1介导的大鼠肾脏小管上皮细胞转分化中的作用[D];河北医科大学;2011年
5 郭益冰;红景天苷及其类似物的合成和初步生物活性研究[D];南通大学;2010年
6 王吉玮;口蹄疫干粉制剂对动物鼻黏膜免疫效果研究[D];中国农业科学院;2011年
7 吴芙蓉;橙皮苷抗大鼠肝纤维化作用及对TGF-β/Smad信号通路的影响[D];安徽医科大学;2011年
8 邱蕊;PEG修饰ω-干扰素与尿酸氧化酶的制备、纯化、结构分析与生物活性的研究[D];福建农林大学;2011年
9 张华;红景天甙对大鼠肝组织TGF-β_1/Smads信号通路的作用[D];重庆医科大学;2011年
10 余坚;壳聚糖纳米包裹强化IL-2与Tp92核酸疫苗联合免疫的免疫保护性实验研究[D];南华大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 石远凯;刘鹏;杨晟;韩晓红;何小慧;艾斌;秦燕;李博;黄鼎智;张长弓;孙燕;;注射用聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子I期临床耐受性试验[J];癌症;2006年04期
2 石远凯,孙燕;造血生长因子在肿瘤化疗中应用的研究进展[J];癌症进展;2003年Z1期
3 梁志清,徐新宝,何振平;反义Smad4对大鼠纤维化肝脏金属蛋白酶及其抑制剂的调节[J];重庆医学;2004年05期
4 吴定中,刘平;中医药抗肝纤维化研究进展[J];长春中医学院学报;2004年02期
5 陈艳华;中医药抗肝纤维化实验研究进展[J];福建中医学院学报;2004年03期
6 李东;肝纤维化逆转研究近况[J];实用肝脏病杂志;2003年01期
7 徐斌,张振华,黄祝青;血清基质金属蛋白酶及其组织抑制因子与肝纤维化[J];实用肝脏病杂志;2004年01期
8 郭顺根,戴敏,张玮,谢艳爽;肝纤维化发生发展与信号转导途径[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2003年01期
9 瞿佐发;肝纤维化的中药治疗综述[J];甘肃中医;2004年01期
10 李佳川,黄国均;中医药防治肝纤维化的实验与临床研究概况[J];甘肃中医;2004年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张丽容,刘迺丰,陈日新,张丽珊,黄鹰,李方园,王世浚;心肌病患者线粒体DNA异常的探讨[J];中国优生与遗传杂志;1993年04期
2 陈至善!200052上海,熊显华!200052上海;肾癌细胞增殖活性与预后的关系[J];临床肿瘤学杂志;1998年02期
3 张秀荣,孟如松,李春启,毛高平,王建荣;大肠癌及各类型大肠息肉流式细胞DNA定量研究[J];空军总医院学报;1998年03期
4 原银栋,刘庆阳,原泉,赵耀;恶性骨肿瘤中血管内皮生长因子表达的定量研究[J];中华骨科杂志;1999年07期
5 陈建庭,李菊根,金大地;血小板衍生生长因子促进成骨细胞DNA合成的实验研究[J];中华外科杂志;1999年07期
6 张淑娟,宋炜辉;治疗淋菌性结膜炎的用药观察[J];黑龙江医药科学;1999年03期
7 李秀珍;微波对脑的影响[J];国外医学.卫生学分册;2000年05期
8 邱方城,熊琛,严礼华,张志华,郑卫东;PCR检测HBVDNA的初步研究[J];郧阳医学院学报;2000年01期
9 李昕权,李丰益,廖清奎,罗春华;白血病随机扩增多态DNA分析及其临床意义[J];中国小儿血液;2000年06期
10 武大林;HLA方法学进展及其DNA分型应用[J];第一军医大学学报;2001年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘海英;陈刚;步宇翔;;碱基对的多铜修饰对DNA导电性的增强作用[A];中国化学会第28届学术年会第13分会场摘要集[C];2012年
2 赵宏远;李俊杰;桑润滋;;单细胞凝胶电泳技术检测不同处理山羊精子DNA损伤[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
3 刘玲;付强;朱化彬;彭秀丽;郝海生;杜卫华;赵学明;王栋;;牛毛囊基因组DNA制备方法的比较研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
4 梁春柳;;一个新的筛选化合物与DNA交互作用的简便方法[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年
5 张文众;李永宁;方瑾;梁春来;张倩男;;体外新评价方法——完整细胞核DNA检测板[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
6 邹丹丹;汪海林;;基于DNA甲基化结合蛋白MBD的甲基化分析[A];中国化学会第28届学术年会第2分会场摘要集[C];2012年
7 张晔;杜智;杨斌;高英堂;;检测外周血中游离DNA的应用前景(综述)[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
8 赵淑珍;刘光珍;;DNA免疫吸附治疗狼疮性肾炎的临床观察[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
9 陈士林;;中药DNA条形码鉴定体系[A];第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集[C];2011年
10 陆佳飞;周克隆;王缦;;磁珠法快速提取乙型肝炎病毒DNA的研究及其在诊断试剂中的应用[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈杰;信息技术将重组汽车DNA[N];科技日报;2010年
2 刘霞;科学家研发出新型人工合成DNA载体[N];科技日报;2010年
3 南方;化危为机 企业需韧性生长的DNA[N];中国企业报;2009年
4 吴强;港大引新技术DNA辨食材[N];中国食品质量报;2010年
5 本报记者 施晓焰 通讯员 马丽娟;云南:DNA数据库成“打拐”得力帮手[N];人民公安报;2009年
6 张巍巍;垃圾DNA可促进癌症发展首获证实[N];科技日报;2010年
7 常丽君;虱子DNA表明人类17万年前首次穿衣[N];科技日报;2011年
8 记者 冯卫东;DNA碱基序列决定其光敏性假设获证实[N];科技日报;2008年
9 许文强;拆、装更便捷的DNA双螺栓结构模型[N];大众科技报;2008年
10 记者 常丽君;研究人员发现自组装DNA链的最佳长度[N];科技日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭晓兰;端粒功能异常诱导的DNA损伤反应及其在肿瘤发生中的作用与分子机制[D];重庆医科大学;2010年
2 陈志健;1.8 GHz微波对X射线和阿霉素致淋巴细胞DNA损伤修复及对蛋白表达的影响[D];浙江大学;2010年
3 朱慧芳;Y家族DNA聚合酶对化学致癌物MNNG应答的转录调控研究[D];浙江大学;2009年
4 万超;抗猪瘟嵌合DNA疫苗及TRIF的DNA疫苗佐剂效应研究[D];武汉大学;2009年
5 赵丽霞;克隆绵羊印记相关基因的DNA甲基化研究[D];内蒙古农业大学;2010年
6 沈美龙;基于DNA免疫的乙型肝炎病毒表面抗原大中小蛋白的免疫原性研究[D];南京医科大学;2010年
7 徐铁刚;细菌DNA磷硫酰化修饰与限制[D];上海交通大学;2008年
8 高鹏;特异性介导DNA转导的多结构域嵌合蛋白的构建、表达及鉴定[D];吉林大学;2011年
9 康大伟;DNA分子器件场效应理论研究[D];山东大学;2010年
10 高天;基于寡核苷酸芯片的地中海贫血特异性DNA甲基化的研究[D];第三军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 芦丽淦;柚皮素及聚乙二醇增强乙肝DNA疫苗免疫效果的研究[D];河南大学;2010年
2 李芳;基于磁性微粒的法医样本DNA纯化[D];西北大学;2011年
3 杨锦艳;六种香豆素有效成分与DNA相互作用的研究[D];山西医科大学;2010年
4 林启凰;用于乳腺蛋白标志基因检测的DNA电化学生物传感器的研究[D];福建医科大学;2010年
5 于文静;亚麻韧皮部特异启动子克隆与26份种质DNA指纹图谱构建[D];中国农业科学院;2010年
6 Rebecca Simisola Agboola;硼(B)和氯化钠胁迫处理诱导高粱(Sorghum bicolor)自交系发生形态和DNA甲基化的变异[D];东北师范大学;2010年
7 石微;溴氰菊酯致大鼠DNA损伤及损伤后修复功能的影响[D];青岛大学;2010年
8 张诺;DNA-纳米羟基磷灰石修饰电极的制备及在生物分析中的应用[D];济南大学;2010年
9 郭珈辰;基于图形表示的DNA相似性分析及进化树构建算法研究[D];湖南大学;2010年
10 刘香港;基于功能材料的新型电化学DNA生物传感器的研制及应用研究[D];山东农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026