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《河南师范大学》 2018年
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miR-382对大鼠肝细胞株BRL-3A增殖的作用研究

高航  
【摘要】:肝脏是一种具备极强独特再生能力的的器官,正常的情况下是处于静止的状态,很少会增殖,当肝脏出现损伤或部分肝切除(partial hepatectomy,PH),会立即诱发和启动肝细胞增殖和肝脏再生过程,恢复其原有体积、重量和功能。深入研究肝再生的分子机制,对于揭示肝病的发病机理和开发治疗肝病的药物,均具有重要的指导意义。miRNA是在进化上高度保守的具有发夹结构的长约22nt的单链非编码小RNAs,却对细胞增殖、分化、凋亡、生长等重要的细胞生命活动起调控作用,与其靶基因mRNA的3'-UTR序列以碱基互补配对方式发生结合,减弱mRNA的转录后翻译能力或直接降解该mRNA,从而能够通过转录后水平来调控基因的表达,影响细胞的生理生化活动。我们先前的研究表明miR-382在大鼠再生肝中差异表达,是大鼠肝再生相关的miRNA。目前,人们对其调控大鼠肝细胞增殖分子机制尚未见报道。因此,本文主要通过转染mir-382 mimic和inhibitor,过表达和干涉miR-382的表达,检测其对大鼠肝细胞BRL-3A增殖作用的调控,以阐明mir-382在残肝恢复过程中对肝细胞增殖的调控机理。采用MTT和EdU法检测细胞活性和增殖调控机理,结果表明,miR-382过表达后促进BRL-3A细胞的生长,miR-382下调表达后抑制BRL-3A细胞的生长;流式细胞术检测表明,miR-382过表达组与NC组对比,S期的细胞数明显升高,而miR-382干涉组与NC组对比,S期的细胞数明显降低;通过mRNA和蛋白水平分析PTEN-AKT信号通路相关基因/蛋白的表达,RT-PCR和Western blot检测表明miR-382过表达后PTEN显著下调表达,P-AKT上调表达,且细胞增殖相关基因Myc、Bcl2和Ccnd1的mRNA和蛋白表达水平上调,细胞凋亡相关基因Caspase3和Bax的mRNA和蛋白表达水平下调,而miR-382干涉组与上述结果相反。因此,我们推测miR-382可能通过靶向抑制PTEN的表达,进而促进大鼠肝细胞BRL-3A的增殖且有促进肝脏再生和修复的潜能。
【学位授予单位】:河南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:Q952

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