收藏本站
《武汉大学》 2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

巨噬细胞MsrA对动脉粥样硬化的干预研究

周赤燕  
【摘要】:背景:氧化应激参与了机体多种代谢和信号通路的调控,与动脉粥样硬化(As)类疾病密切相关,维持机体正常的氧化还原平衡对于As的机制研究和干预控制具有重要意义。甲硫氨酸(Met)是蛋白质中极易被氧化的残基之一,它的氧化修饰参与了蛋白生理功能的调节以及多种渐进性疾病的发生。甲硫氨酸亚砜还原酶A (MsrA)能特异性地还原Met氧化产物——甲硫氨酸亚砜(MetSO),是一类进化保守、普遍存在的细胞内抗氧化酶。 方法:构建含hMsrA的pWPI重组慢病毒载体,以含绿色荧光蛋白GFP的空载体为对照,分别与包装质粒A8.91和包膜质粒pD2G共转染293t细胞系,包装病毒颗粒,高速离心浓缩后检测病毒滴度。体外实验:将慢病毒颗粒以适宜的MOI (Multiplicity of infection)感染小鼠原代腹腔巨噬细胞和传代RAW264.7巨噬细胞系,观察高表达hMsrA对oxLDL刺激下巨噬细胞生物学功能的影响。采用油红O染色评价细胞泡沫化状态:荧光探针DCF检测细胞ROS水平;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6的分泌;RT-PCR和Western Blotting方法检测脂质转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SRBI和LXR的转录和表达水平。体内实验:慢病毒载体体外感染小鼠骨髓造血干细胞(HPCs),通过骨髓移植技术将其回输到apoE-/-受体鼠中,小鼠高脂饮食12周后安乐死,检测小鼠血浆脂质含量(TC、 TG)、炎症水平(TNF-α、IL-6、MCP-1)、抗氧化酶活性(PON1、SOD)及HPCs和脾脏中hMsrA表达水平。并通过对小鼠主动脉窦的冰冻切片及油红O染色,胸腹主动脉段en face剖面分析,评价hMsrA对动脉粥样斑块的影响。 结果:成功构建慢病毒颗粒LV-hMsrA,基因测序及蛋白印迹法分别证实了目的蛋白hMsrA的碱基序列和蛋白表达均没有发生突变。氧化应激条件下,巨噬细胞高表达hMsrA可以显著降低细胞内的脂质沉积和ROS水平,抑制细胞炎症因子IL-6和TNF-a的分泌(P0.05)。与LV-GFP组细胞相比,LV-hMsrA组细胞的脂质转运相关蛋白ABCG1、LXR、ABCA1和SRBI的mRNA和蛋白水平都有显著提高(P0.05)。而无刺激培养下,细胞内高表达hMsrA对ABCA1、 ABCG1、SRBI和LXR均没有影响(P0.05)。动物实验中,apoE-/-小鼠接受骨髓移植14周后,目的蛋白hMsrA仍在小鼠体内稳定表达。与对照组相比,巨噬细胞高表达hMsrA的apoE-/-小鼠其主动脉粥样斑块沉积减缓,血清抗氧化蛋白PON1和SOD的活性增加,血清炎症因子MCP-1的含量降低(P0.05)。而主动脉窦的脂质沉积、血脂水平(TC、TG)、血清IL-6和TNF-α在LV-hMsrA组和LV-GFP小鼠之间没有显著差异(P0.05)。 结论:巨噬细胞高表达hMsrA可以降低细胞炎症水平和ROS水平,并通过调控细胞脂质内外流途径抑制巨噬细胞泡沫化过程。apoE-/-小鼠中巨噬细胞源性hMsrA高表达也可能通过改变血管壁局部和整体的氧化、炎症状态而减缓动脉粥样斑块的进程。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R363

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;豚鼠巨噬细胞经P_(204)处理后的抗石英细胞毒作用[J];国外医学参考资料(卫生学分册);1976年04期
2 邓侠进;;巨噬细胞的抗癌作用[J];遵义医学院学报;1979年02期
3 陆天才;;疾病对肺巨噬细胞的影响[J];煤矿医学;1982年01期
4 郭瑞清;祝彼得;;一种分离巨噬细胞的简单方法[J];滨州医学院学报;1990年02期
5 谢志坚;巨噬细胞异质性[J];医学综述;2001年06期
6 饶艳;运动及神经内分泌对巨噬细胞功能的调节[J];体育与科学;2002年05期
7 朱金元;;吸烟对肺巨噬细胞的影响[J];浙江医学教育;2003年01期
8 张俊峰;过氧化物酶体增殖物激活受体与单核/巨噬细胞系[J];医学综述;2004年03期
9 韦锦学;顾军;;巨噬细胞的激活诱导死亡[J];生命科学;2006年02期
10 李晓曦;郭宁;曹雪涛;;肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤生长与转移的研究现状[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 吴国明;周辉;;巨噬细胞和创伤纤维化[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年
3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
6 秦帅;陈希;孔德明;;构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系[A];贵州省中西医结合内分泌代谢学术会论文汇编[C];2012年
7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年
8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年
10 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年
2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年
3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年
4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年
5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年
6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年
7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年
8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年
9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年
10 记者 许琦敏;“铁泵”蛋白帮助回收铁元素[N];文汇报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周赤燕;巨噬细胞MsrA对动脉粥样硬化的干预研究[D];武汉大学;2013年
2 章桂忠;TIPE2蛋白调控细胞增殖和炎症的机制研究[D];山东大学;2015年
3 张瑜;DKK1抑制巨噬细胞内脂质沉积及其相关分子机制[D];山东大学;2015年
4 孟涛;异丙酚对心脏收缩功能的抑制作用及其对巨噬细胞分泌功能调节的机制研究[D];山东大学;2015年
5 周兴;基于酵母微囊构建新型口服巨噬细胞靶向递送系统的研究[D];第三军医大学;2015年
6 蒋兴伟;Tim-3对巨噬细胞极化的调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年
7 刘伯玉;清道夫受体A介导小鼠巨噬细胞吞噬钩端螺旋体研究[D];上海交通大学;2013年
8 杨绍俊;miRNA-155介导ESAT-6诱导巨噬细胞凋亡的分子机制及其在结核诊断中的作用[D];第三军医大学;2015年
9 翟光耀;单核/巨噬细胞Ly6C~(low)亚群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京协和医学院;2014年
10 韩露;TRB3介导的脂肪组织巨噬细胞极化与糖尿病冠状动脉病变关系的研究[D];山东大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介导巨噬细胞极化效应对动脉粥样硬化作用的研究[D];福建医科大学;2015年
2 张译丹;盐皮质激素受体拮抗剂调控巨噬细胞表型对实验性矽肺的作用[D];河北医科大学;2015年
3 卢文冉;HCV core蛋白作用的巨噬细胞培养上清对肝细胞生物学性状的影响[D];河北医科大学;2015年
4 李文建;载脂蛋白E影响巨噬细胞因子表达及分型的机制研究[D];河北医科大学;2015年
5 曹爽;高糖对巨噬细胞TLR4信号转导的调节作用[D];河北医科大学;2015年
6 宁程程;肿瘤相关巨噬细胞在子宫内膜癌雌激素敏感性中的作用及机制研究[D];复旦大学;2014年
7 高龙;PLD4在肿瘤相关巨噬细胞抑制结肠癌增殖中的作用研究[D];成都医学院;2015年
8 任虹;感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠抑制巨噬细胞CCL5分泌的机制研究[D];河北医科大学;2015年
9 李美玲;双酚A对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究[D];安徽医科大学;2015年
10 刘琼;黄芪多糖影响巨噬细胞向脂肪细胞趋化的作用及机制研究[D];新乡医学院;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026