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《武汉大学》 2017年
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诱导性一氧化氮合酶及瞬时感受器电位通道V4在泡沫细胞迁移和形成中的作用研究

薛超  
【摘要】:背景:心血管事件是世界范围内致死致残的首要病因,而且近年来心血管疾病的发生率呈上升态势,给家庭及社会带来了极大的社会及经济负担,动脉粥样硬化是导致包括冠心病、腹主动脉瘤、心衰、中风在内的心血管疾病主要原因。伴随着治疗药物及技术不断进步,人们对于心血管疾病治疗有了更多的措施,但对于动脉粥样硬化治疗仍停留在干预相关危险因素及再灌注等对症治疗阶段,而且效果仍难以令人满意。巨噬细胞源性的泡沫细胞在血管内皮下形成及迁移下降是动脉粥样硬化发生和发展过程中的一个重要环节,研究巨噬细胞源性的泡沫细胞形成及迁移下降的相关机制对于进一步阐释动脉粥样硬化的发病机制以及对于动脉粥样硬化相关疾病的治疗提供可能的靶点具有重要的意义目的:本研究的主要目的是研究iNOS在泡沫细胞迁移下降中的作用及瞬时感受器电位通道V4在泡沫细胞形成中的作用研究。方法:(1)通过改良的Boyden小室迁移实验检测iNOS抑制剂1400W对于RAW264.7及PMA诱导的U937细胞诱导的泡沫细胞迁移的影响。(2)将 RAW264.7 及 U937 细胞分为对照组,nLDL 组、oxLDL 组、oxLDL+1400W组,Westernblotting 检测 Rac-1、p-Vav、p-MRLC 水平变化。(3)将 RAW264.7 及 U937 细胞分为对照组,nLDL 组、oxLDL 组、oxLDL+1400W组,细胞爬片油红染色检测细胞内脂质沉积情况。(4)免疫荧光检测RAW264.7、PMA诱导的U937及PMA诱导的THP-1细胞表面TRPV4蛋白表达。(5)Westernblotting检测PMA诱导前后U937及THP-1细胞的TRPV4蛋白表达情况。(6)将RAW264.7、PMA诱导的U937及THP-1细胞分为对照组,nLDL组、oxLDL组,Westernblotting及免疫组化检测检测TRPV4分子表达。(7)Westernblotting 检测 PPARy 抑制剂 T0070907 对于 RAW264.7 细胞 TRPV4分子基础表达影响,将RAW264.7细胞分为对照组、oxLDL组、oxLDL+ T0070907组Westernblotting检测TRPV4分子表达改变。(8)细胞爬片油红染色检测TRPV4激动剂GSK1016790A对于巨噬细胞性的泡沫细胞内脂质沉积影响。结果:(1)改良的Boyden小室迁移实验结果证实iNOS抑制剂1400W可以改善oxLDL诱导的RAW264.7及PMA诱导的U937细胞迁移下降。(2)在RAW264.7及PMA诱导的U937细胞中oxLDL使得Rac-1表达水平上升,Vav磷酸化水平和MRLC磷酸化水平上升,1400W可以改善oxLDL诱导Rac-1表达水平上升和Vav磷酸化水平和MRLC磷酸化水平上升情况。(3)细胞爬片油红染色结果提示1400W能改善脂质在巨噬细胞内沉积情况。(4)TRPV4在RAW264.7细胞、PMA诱导的U937细胞及PMA诱导的THP-1细胞表面均有表达。(5)PMA诱导可以增加U937及THP-1细胞TRPV4蛋白表达。(6)oxLDL减少RAW264.7细胞、PMA诱导的U937细胞及PMA诱导的THP-1细胞TRPV4蛋白表达,但nLDL不能减少TRPV4蛋白表达。(7)PPARy抑制剂T0070907可以增加RAW264.7细胞TRPV4蛋白表达,改善oxLDL诱导的TRPV4蛋白表达下降。(8)细胞爬片油红染色结果提示GSK1016790A可以减少巨噬细胞性的泡沫细胞内脂质沉积。结论:本研究发现在经oxLDL诱导RAW264.7及PMA诱导的U937细胞形成的泡沫细胞中Vav-Rac-myosin通路被激活,iNOS抑制剂1400W可以通过减少脂质在RAW264.7细胞内沉积来减少Vav-Rac-myosin被激活的程度。在本研究中还发现在RAW264.7、PMA诱导的U937以及PMA诱导的THP-1细胞表面均有TRPV4表达,PMA可以增加THP-1和U937细胞的TRPV4表达,提示TRPV4表达可能与细胞吞噬能力相关。我们还发现经oxLDL处理的RAW264.7、PMA诱导的THP-1及PMA诱导的U937形成的泡沫细胞细胞表面TRPV4分子表达明显下降,而且这一作用很有可能是通过作用于PPARy实现的,而且TRPV4激动剂GSK1016790A可以减少巨噬细胞源性的泡沫细胞内的脂质沉积。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R54

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