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《武汉大学》 2017年
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壳寡糖减缓大鼠髓核细胞退变的实验研究

贾鹏  
【摘要】:目的:研究显示壳聚糖具有保护椎间盘髓核(NP)细胞抵抗椎间盘退变(IDD)的功能,但是壳聚糖的分子量较高,不利于机体吸收,因而限制了其临床应用的可能。壳聚糖的低分子量衍生物壳寡糖(COS),相对于壳聚糖来说更易被机体所吸收。然而COS对椎间盘髓核细胞的影响尚不明确。本研究旨在探究COS对退变NP细胞的保护作用并初步探索其机制。方法:用过氧化氢处理大鼠椎间盘NP细胞诱发IDD样改变。随后给予过氧化氢诱导前采用COS预处理,观察细胞内发生的改变。细胞活力使用CCK-8试剂盒检测。凋亡检测使用annexin-VFITC/PI双染色和Hoechst33342染色。细胞外基质(ECM)成分Ⅱ型胶原、蛋白多糖,及相关降解酶整合素样金属蛋白酶与凝血酶(ADAMTS)、基质金属蛋白酶(MMP)表达水平使用蛋白印迹试验(WB)和聚合酶链式反应(PCR)进行检测。本研究通过WB分析了过氧化氢诱导下的NP细胞中PI3K/Akt信号转导通路的活性。为了研究PI3K/Akt信号转导通路与COS对NP细胞保护作用之间的关系,我们使用渥曼青霉素抑制PI3K/Akt信号通路。结果:CCK-8试验结果显示,COS对正常NP细胞无显著影响并可保护过氧化氢处理细胞的活力。annexin-VFITC/PI及Hoechst33342染色结果显示COS可减弱过氧化氢诱导的细胞凋亡。WB和PCR结果显示,COS给药提高了 Ⅱ型胶原与蛋白多糖的表达,并抑制了 ADAMTS4和MMP-13的合成。我们用WB检测了 PI3K/Akt信号通路的活性,结果示COS给药可增强退变细胞中通路活性。当使用渥曼青霉素抑制PI3K/Akt信号转导通路活性时,COS的保护作用被消除。结论:COS可减缓过氧化氢诱导发生的NP细胞退变,该保护作用依赖于胞内PI3K/Akt信号转导通路活性的增强。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R681.5

【参考文献】
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