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《武汉大学》 2017年
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长链非编码RNA TCAM1促进胃癌增殖的研究

阎雷  
【摘要】:目的检测长链非编码 RNATCAM1(Homo sapiens testicular cell adhesion molecule 1 homolog)在胃癌组织及细胞中的表达,并观察其对胃癌增殖能力的影响。背景胃癌是威胁人类健康的最常见恶性肿瘤之一,尽管随着医疗服务水平的提高,胃癌的临床诊断、治疗和预后均获得了较大的进展,但其发病率、死亡率仍较高,严重影响了患者的正常生活和生存质量。肿瘤的发生、发展是多种因素相互作用的结果,且在肿瘤发展的不同阶段,同一因素发挥的作用也是有差异的。环境危险因素能够引起机体内一些生物学功能的变化,导致基因转录表达发生异常。环境危险因素与机体基因彼此作用,与肿瘤的发生有着密切关系。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤转移中的关键调控作用已引起人们的广泛关注。lncRNA是一种重要的基因转录调控原件,通过表观遗传学、转录及转录后调控等多个层面对基因表达进行调控。大量研究表明,在前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等多种肿瘤中存在着lncRNA分子的异常表达。方法收集2015年1月-2016年1月在荆州中心医院普外科治疗的122例胃癌患者的胃癌组织及对应的癌组织旁的组织标本,所有标本均经H.E染色证实为胃癌,收集标本存放于液氮罐中备用。挑选符合纳入及排除标准的病理标本进行基因芯片检测,分析癌组织与癌旁组织基因表达差异情况。体外培养胃癌细胞系,采用qPCR分别检测胃癌、癌旁组织以及胃癌细胞系和正常胃粘膜细胞系TCAM1的表达。设计针对TCAM1的靶向siRNA转染胃癌细胞,通过载体构建、细胞转染构建稳定表达lncRNASGC7901细胞系,检测稳转细胞的增殖、迁移和浸润能力,用流式细胞术检测细胞周期。评估lncRNATCAM1在 癌发生、发展过程中的功能及机制。结果根据前期lncRNA芯片筛选结果,我们选择在两组数据中差异倍数均为最大的lnc-TCAM1作为下一步研究的对象。首先采用qPCR检测122对胃癌及相应癌旁组织中TCAM1mRNA的表达,以GAPDH做内对照,通过比较CT值,发现TCAM1mRNA在多数肿瘤中呈上调趋势。在细胞株中我们也发现,与永生化胃粘膜细胞GES1相比,胃癌细胞株中TCAM1高表达。TCAM1的表达与临床病理特征有关,在低分化、浸润程度较深以及肿瘤较大组中表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。采用稳定过表达TCAM1的质粒转染胃癌细胞SGC7901后,TCAM1表达上调约50%。之后分别检测SGC7901细胞和过表达TCAM1的SGC7901细胞的增殖能力,结果发现过表达TCAM1显著升高胃癌细胞SGC7901的增殖能力。采用流式细胞仪检测细胞周期。我们发现,过表达TCAM1可以增加G2/M期细胞比例。根据显微镜观察结果可以看出过表达TCAM1细胞的迁移、浸润能力显著增强;根据细胞计数结果,过表达TCAM1细胞数显著高于转染空质粒的SGC7901细胞数,差异显著(P0.05)。采用TCAM1-siRNA转染胃癌细胞SGC7901后,我们发现TCAM1表达抑制率90%。随后我们检测实验组和对照组细胞增殖能力,我们发现敲低TCAM1显著抑制胃癌细胞SGC7901的增殖能力。采用流式细胞仪检测细胞周期,发现敲低TCAM1可以减少G2/M期细胞数(14.67±6.73 vs.8.61±0.91)。结论1..胃癌组织中lncRNATCAM1表达水平显著升高,并与淋巴结是否发生转移、胃癌TNM分期存在显著的相关性。lncRNATCAM1可以作为胃癌发生发展、临床预后评估等的生物标志物,具有很好的临床参考价值。本研究为lncRNATCAM1在胃癌发生发展过程中的作用和机制提供了一条有效途径。2.lnc TCAM1能够促进胃癌细胞增殖,增强其浸润、侵袭能力,且对胃癌细胞的细胞周期产生显著影响。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R735.2

【参考文献】
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