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《武汉大学》 2017年
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Paraspeckles促进pri-miRNA加工的机制研究

姜黎  
【摘要】:Paraspeckles是由长的非编码RNA NEAT1在nuclear speckles边缘组装形成的离散的点状亚核小体结构。Nuclear speckles中含有大量的剪接调控因子,主要参与调控pre-mRNA的加工,而paraspeckles中则含有反向重复序列的RNA以及30多种RNA结合蛋白,因而通常被认为具有滞留RNA结合蛋白的功能。本研究论文发现paraspeckles可能充当pri-miRNA加工的活跃中心,具有增强Microprocessor(Drosha/DGCR8)加工 pri-miRNA 的功能。通过敲低 paraspeckles的结构性lncRNA NEAT1或者其核心蛋白组分PSF/NONO以破坏paraspeckles的完整结构,会严重影响细胞内绝大多数pri-miRNA的加工,small RNA-seq数据也证实,一旦paraspeckles的完整结构被破坏,大多数miRNA的表达水平会显著性下降。进一步通过PSF/NONO的CLIP-seq实验发现,PSF/NONO直接结合细胞内儿乎所有表达的pri-miRNA。详细的生化试验进一步证明lncRNA NEAT1不仅可以作为RNAbinding preoteins(RBPs)识别结合的平台,还可以利用自身碱基配对形成的各种stem-loop结构招募Microprocessor(Drosha/DGCR8),以其3'末端含有的pseduo pri-miR-612为代表。综合上述实验结果,由lncRNA NEAT1组装形成的亚核结构paraspeckles参与协调pri-miRNA的加工,而细胞内大约80%的miRNA来源于不同pre-mRNAs中的内含子,pre-mRNA的加工过程和pri-miRNA的加工过程协同进行,这可能解释了 paraspeckles为何总是定位于nuclear speckles的边缘。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:Q75

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