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《武汉大学》 2018年
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精索静脉曲张大鼠睾丸生精上皮细胞中自噬的研究

朱少明  
【摘要】:背景与目的:在生理或应激状态下,自噬通过及时降解细胞内受损的蛋白或细胞器等,在维持细胞稳定,调节细胞免疫,保持细胞干性对抗细胞衰老及凋亡中发挥重要作用。而自噬在精索静脉曲张的研究中鲜有报道。本实验通过精索静脉曲张大鼠模型,观察睾丸生精上皮细胞中细胞凋亡及自噬的表达情况,并进行相关性分析,为精索静脉曲张致不育机制研究提供新思路。方法:取40只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、VC组(VC造模组)、VC手术组(VC+手术治疗组)、假手术组,每组10只。正常对照组不做任何处理,VC组和VC手术组行精索静脉曲张造模,假手术组打开腹腔但不做任何处理。第30天时对VC手术组行左侧精索静脉高位结扎手术治疗。第60天时对所有组大鼠取左侧睾丸标本。睾丸组织行HE染色观察大鼠曲精小管结构变化;TUNEL染色观察生精上皮细胞凋亡情况;透射电子显微镜观察生精小管上皮细胞中自噬体、自噬溶酶体等;Western-blot,RT-PCT检测LC3和Beclinl水平的变化;采用Logistic回归对Western-blot中LC3-Ⅱ/Ⅰ与生精上皮细胞凋亡指数进行分析。结果:HE染色可见VC组中睾丸部分曲精小管结构紊乱,生精上皮细胞数量减少,VC手术治疗组中破坏程度相对VC组较轻。TUNEL染色可见,正常对照组中凋亡的生精上皮细胞数量较少,VC组中显著增加,VC手术治疗组相比VC组要少,但比正常对照组多。透射电镜观察发现,正常对照组和假手术组生精小管上皮细胞中较少见自噬体和自噬溶酶体,VC组和VC手术组中自噬体、自噬溶酶体明显增多。Western-blot及RT-PCR检测示,自噬相关蛋白,Beclin-1和LC3在VC组和VC手术组中表达明显高于正常对照组和假手术组。Logistic回归分析显示,LC3-Ⅱ/Ⅰ与生精上皮细胞凋亡指数呈正相关。结论:VC可致大鼠曲精小管结构破坏,生精上皮细胞数量减少,细胞凋亡率显著上升,同时也激活了自噬;VC手术治疗可以一定程度上减轻VC对生精小管结构的破坏,减少生精细胞的凋亡,降低生精上皮细胞中的自噬;生精上皮细胞中自噬的表达与生精上皮细胞凋亡呈正相关。自噬可能在VC致不育机制中起了重要作用。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R697.24

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【参考文献】
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