收藏本站
《武汉大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

环状RNA和Homer2在肝细胞癌中的诊断价值及circSMAD2在肝细胞癌中的分子机制

张献伟  
【摘要】:背景:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)在世界范围内是致死率第三位的恶性肿瘤。由于早期缺少典型的临床症状和敏感的诊断指标,多数HCC在进展期被诊断出来,具有较差的预后。因此,新的HCC诊断标志物和治疗靶点的研究非常重要。环状RNA(Circular RNA,CircRNA)是一类非编码RNA,近年来它们被发现参与到了多种疾病的发生发展过程中。目的:本研究的目的在于通过定量检测并比较circRNAhsa_circ 0001445和circSMD2在HCC和癌旁组织:在HCC、肝硬化、乙型病毒肝炎(乙肝)患者及健康人群血浆中的RNA表达水平,寻找变化规律并确定其对HCC的诊断价值。接着,探索circSMAD2在HCC细胞中的生物学功能,并进一步地研究其分子机制。此外,检测比较Homer2在HCC和癌旁组织中的表达量,并评估组织中Homer2的表达量对HCC的诊断价值,并制备抗Homer2单克隆抗体。方法:收集了 HCC癌和癌旁组织;HCC、肝硬化和乙肝患者及健康对照的血浆,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织和血浆中的circRNA hsa_circ_0001445和circSMAD2的表达量,绘制受试者特征(ROC)曲线评估其对HCC的诊断价值。接着,首先通过qRT-PCR的方法对HCC细胞株和正常肝细胞中的circSMAD2的表达量进行检测。然后通过重组表达circSMAD2的质粒pcDNA3.1(+)-circSMAD2,并转染HCC细胞株HepG2。接着,通过增殖、凋亡、迁移、侵袭和western blot实验研究过表达circSMAD2对HCC细胞生物学活动的影响。进而通过生物信息学的方法预测circSMAD2的靶miRNA,并重组了野生型的psiCHECK-circSMAD2-wt载体,并通过点突变的方式,获得了其与靶miRNA结合位点突变的载体psiCHECK-circSMD2-mut,并通过双荧光素酶报告实验的方法来验证二者直接结合的关系。此外,通过过表达和敲低circSMAD2来研究其对靶miRNA表达的影响。最后,通过验证共转染circSMAD2和靶miRNA对HCC细胞的影响来探索circSMAD2调节HCC的分子机制。最后,使用qRT-PCR的方法对79对HCC患者的癌和癌旁组织中Homer2的表达量进行了研究,并使用ROC曲线评价了其对HCC的诊断价值。通过克隆、重组、表达和纯化等方法获得Homer2免疫蛋白和筛选蛋白。并进行小鼠的免疫、细胞的融合、杂交瘤细胞的筛选、腹水的获得及抗体的纯化等实验制备抗Homer2单克隆抗体,并通过间接ELISA和western blot验证其特异性。结果:HCC组织中hsa_circ_0001445(P0.001)和circSMAD2(P=0.014)的表达量均显著低于癌旁组织,并且hsacirc0001445的表达量和癌灶数量相关(P =0.014),而circSMAD2的表达量和癌组织的分化程度相关(P0.001)。还发现HCC患者血浆hsa_circ_0001445水平明显低于肝硬化(P0.001)、乙肝(P0.001)和健康对照(P0.001)的水平。ROC曲线显示血浆hsa_circ_001445是一个良好的诊断指标并能很好地区分HCC与健康对照(AUC=0.862)、肝硬化(AUC=0.672)或乙肝(AUC=0.764)患者,与血清AFP联合应用时,血浆hsa-circ0001445的诊断价值进一步提高。接着,细胞生物学功能实验证明过表达circSMAD2可以抑制HCC细胞的迁移、侵袭和上皮间质转换(EMT)。进一步地,通过生物信息学的预测了潜在的circSMAD2的靶点,选择了其中评分前十位的miRNA合成了 miRNAmimics,通过双荧光素酶报告实验证明其中miR-629可以直接结合circSMAD2。此外,我们发现在HCC细胞株中过表达circSMAD2可以抑制miR-629的表达,反之亦然。在HCC细胞株中共转染circSMAD2和miR-629可以抑制过表达circSMAD2对HCC细胞迁移、侵袭和EMT的调节。此外,Homer2在癌组织中的表达量显著降低(P0.001),并且对HCC具有一定的诊断价值(AUC=0.660)。此外,通过克隆、重组、表达和纯化获得了高纯度的Homer2免疫蛋白和筛选蛋白,然后通过细胞融合的方法得到了稳定分泌抗Homer2抗体的杂交瘤细胞株,并且通过腹水纯化的方法制备出了特异性的抗Homer2单克隆抗体,命名为Anti-Homer2-2B7。间接ELISA和Western blot证明其具有良好的特异性。结论:hsa_circ_0001445和circSMAD2在HCC中的表达量均显著降低,并且血浆hsacirc_0001445水平对HCC具有良好的诊断价值。并且,circSMAD2可以通过调节miR-629的功能来抑制HCC细胞的迁移、侵袭和EMT。此外,Homer2在HCC组织中的表达量显著降低并对HCC具有一定的诊断价值。最后,本研究成功制备了特异性的抗Homer2单克隆抗体。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R735.7;R730.43

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 Marco Ragusa;Cristina Barbagallo;Luisa Statello;Angelo Giuseppe Condorelli;Rosalia Battaglia;Lucia Tamburello;Davide Barbagallo;Cinzia Di Pietro;Michele Purrello;;Non-coding landscapes of colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年41期
2 Kai-Wen Chen;Tzu-Ming Ou;Chin-Wen Hsu;Chi-Ting Horng;Ching-Chang Lee;Yuh-Yuan Tsai;Chi-Chang Tsai;Yi-Sheng Liou;Chen-Chieh Yang;Chao-Wen Hsueh;Wu-Hsien Kuo;;Current systemic treatment of hepatocellular carcinoma:A review of the literature[J];World Journal of Hepatology;2015年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 Guang Song;Hong-Xia Cao;Shao-Xin Yao;Cang-Tuo Li;;Abnormal expression of WIF1 in hepatocellular carcinoma cells and its regulating effect on invasion and metastasis factors of TIMP-3 and caveolin-1 of hepatocellular carcinoma[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年11期
2 Annie K Hung;Jennifer Guy;;Hepatocellular carcinoma in the elderly:Meta-analysis and systematic literature review[J];World Journal of Gastroenterology;2015年42期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 Jian Zhang;Sha Li;Lu Li;Meng Li;Chongye Guo;Jun Yao;Shuangli Mi;;Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2015年01期
2 Jun Han;Long-Fei Rong;Chuan-Bin Shi;Xiao-Gang Dong;Jie Wang;Bao-Lin Wang;Hao Wen;Zhen-Yu He;;Screening of lymph nodes metastasis associated lncRNAs in colorectal cancer patients[J];World Journal of Gastroenterology;2014年25期
3 Ali Raza;Gagan K Sood;;Hepatocellular carcinoma review:Current treatment,and evidence-based medicine[J];World Journal of Gastroenterology;2014年15期
4 Jie Yin;Zhigang Bai;Jianning Song;Yun Yang;Jin Wang;Wei Han;Jun Zhang;Hua Meng;Xuemei Ma;Yao Yang;Tingting Wang;Weirong Li;Zhongtao Zhang;;Differential expression of serum miR-126,miR-141 and miR-21 as novel biomarkers for early detection of liver metastasis in colorectal cancer[J];Chinese Journal of Cancer Research;2014年01期
5 Bo Zhai;Xue-Ying Sun;;Mechanisms of resistance to sorafenib and the corresponding strategies in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Hepatology;2013年07期
6 Masatoshi Kudo;;Signaling pathway/molecular targets and new targeted agents under development in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年42期
7 Renata Hezova;Alena Kovarikova;Julie Bienertova-Vasku;Milana Sachlova;Martina Redova;Anna Vasku;Marek Svoboda;Lenka Radova;Igor Kiss;Rostislav Vyzula;Ondrej Slaby;;Evaluation of SNPs in miR-196-a2, miR-27a and miR-146a as risk factors of colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2012年22期
8 ;Telomerase-specific oncolytic virotherapy for humanhepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2008年08期
9 ;Expression of plasma vascular endothelial growth factor in patients with hepatocellular carcinoma and effect of transcatheter arterial chemoembolization therapy on plasma vascular endothelial growth factor level[J];World Journal of Gastroenterology;2004年19期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 罗萍;景伟;李南迪;涂建成;;Homer蛋白与疾病关系的研究进展[J];临床检验杂志;2017年03期
2 许淑芳;邹辉;吴三云;涂建成;;2型糖尿病大鼠胰腺中Homer的表达及意义[J];基础医学与临床;2013年07期
3 史铁钧;费舟;章翔;黄卫东;梁景文;宋蕾;;大鼠弥漫性脑损伤后Homer蛋白的表达及其意义[J];第四军医大学学报;2005年24期
4 王季良;COTCHA![J];河南税务;2002年12期
5 海涛;;激情即生命![J];成功;2001年04期
6 刘伟;姜剑伟;张建军;;Homer1a的神经保护作用及机制研究进展[J];国际药学研究杂志;2018年09期
7 方士强;罗振钊;李晓怡;刘水逸;卢忠心;;Homer在2型糖尿病大鼠海马中的表达及意义的研究[J];中国糖尿病杂志;2018年08期
8 张澄宇,章江洲,彭碧文;Homer蛋白介导谷氨酸受体信号转导[J];生理科学进展;2004年04期
9 沈芳;崔彩莲;;Homer蛋白与药物成瘾[J];中国药物依赖性杂志;2009年03期
10 亢登峰;王英元;李晓英;;Homer蛋白的研究进展及法医学应用[J];中国法医学杂志;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 Haiyang Liu;Zhiwei Li;Jianchao Li;Qingqing Yang;Zhe Feng;Yujie Li;Haibin Yang;Cong Yu;Jun Wan;Wei Liu;Mingjie Zhang;;Homer tetramer promotes actin-bundling activity of Drebrin[A];中国生物化学与分子生物学会第十二届全国会员代表大会暨2018年全国学术会议摘要集[C];2018年
2 ;Prefrontal Cortex Homer Expression in an Animal Model of Attention Deficit/Hyperactivity Disorder[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年
3 张磊;刘伟;费舟;;大鼠弥漫性轴索损伤后Homer蛋白表达变化的研究[A];第二届西部神经外科学术会议论文集[C];2010年
4 张磊;费舟;李兵;赵永更;程光;;培养神经元机械性损伤谷氨酸、γ-氨基丁酸含量与Homer蛋白表达变化和关系的研究[A];第二届西部神经外科学术会议论文集[C];2010年
5 熊秋菊;李荣春;周伶;;Homer1在慢性挫败应激诱导抑郁症中突触可塑性研究[A];2016中国医师协会疼痛医师专业委员会年会资料汇编[C];2016年
6 熊秋菊;李荣春;周伶;;Homer1在慢性挫败应激诱导抑郁症中突触可塑性研究[A];首次全国中西医结合疼痛学术交流会资料汇编[C];2016年
7 熊秋菊;李荣春;周伶;;Homer1在慢性挫败应激诱导抑郁症中突触可塑性研究[A];中华医学会疼痛学分会第十二届学术年会论文集[C];2016年
8 吴三云;喻明霞;李晓改;陈薇;胡汉宁;郑芳;周新;Paul Worley;涂建成;;氧化低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞氧化损伤Homer基因及蛋白的表达[A];第11届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2012年
9 杨蕾;洪琴;张敏;刘晓;潘晓勤;郭梅;费莉;童梅玲;陈荣华;郭锡熔;池霞;;Homer1a RNAi后的大鼠突触超微结构变化[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2012年
10 张磊;费舟;李兵;赵永更;程光;;培养神经元机械性损伤谷氨酸、γ-氨基丁酸含量与Homer蛋白表达变化和关系的研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 张琳一/DigiTimes;曜越发布Home Server等级全新机壳Eureka[N];电子资讯时报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张献伟;环状RNA和Homer2在肝细胞癌中的诊断价值及circSMAD2在肝细胞癌中的分子机制[D];武汉大学;2018年
2 黄卫东;神经元损伤后Homer介导的mGluR1a受体信号转导研究[D];第四军医大学;2005年
3 吴三云;Homer在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究[D];武汉大学;2014年
4 苏宁;Homer 1a在创伤性脑损伤中的机制研究[D];第四军医大学;2015年
5 路军;Homer 1a在2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后心室非梗死区重构中的作用[D];第四军医大学;2015年
6 张磊;Homer和Shank基因表达改变在脑损伤和脑胶质瘤病理过程中的意义[D];第四军医大学;2009年
7 郭万刚;缺血再灌注所致心肌细胞凋亡的分子机制——Homer1a和QKI的作用[D];第四军医大学;2010年
8 王远;Homer1a在NMDA神经元损伤中的作用及其与nNOS相关性研究[D];第四军医大学;2013年
9 王远;Homer1a在NMDA神经元损伤中的作用及其与nNOS相关性研究[D];第四军医大学;2013年
10 费霏;缺血缺氧性视神经视网膜损伤的分子机制研究[D];第四军医大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵长龙;微网运行经济型及HOMER软件应用研究[D];西南交通大学;2015年
2 洪琴;Homer与注意缺陷多动障碍关系的研究[D];南京医科大学;2008年
3 王福远;大鼠局灶性脑挫伤后Homer蛋白表达变化[D];中国医科大学;2010年
4 霍恺;代谢型谷氨酸受体5在创伤性脑损伤中的作用及其与Homer1a的相关性研究[D];第四军医大学;2013年
5 冯乐霄;Homer1a在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究[D];第四军医大学;2015年
6 梅晓静;约翰·巴斯《路的尽头》中的狂欢世界[D];广东外语外贸大学;2007年
7 史铁钧;弥漫性脑损伤后Homer介导的mGluR1a非激动剂依赖信号转导研究[D];第四军医大学;2005年
8 王凯;离体神经元损伤后Homer1a与Notch信号的作用及关系研究[D];第四军医大学;2012年
9 欧阳;人物的退隐与历史的展开[D];哈尔滨师范大学;2015年
10 李栋;蛇床子素的神经保护作用研究[D];第四军医大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026