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《武汉大学》 2003年
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棉铃虫核型多角体病毒朝鲜株的部分基因组克隆载体的构建与序列分析

赵光日  
【摘要】:棉铃虫核型多角体病毒(Helicovera armigera nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,简称HaNPV)属于杆状病毒科,核型多角体病毒属。其中又分为两个亚属,即单核衣壳NPV亚属(SNPV)和多核衣壳NPV亚属(MNPV)。 经过对棉铃虫核型多角体病毒的多角体生物学特性、繁殖、形态结构和基因组几种限制性内切酶酶切图谱初步分析,每个分离株(isolate)或变异株(variant)的杀虫毒力并不完全相同。 通过生物活性实验,已确定了棉铃虫单粒包埋核型多角体(HaSNPV)的杀虫毒力比棉铃虫多粒包埋型核型多角体(HaMNPV)的杀虫毒力高得多。 到目前为止,棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(HaSNPV)中发现一些分离株,它们包括G4分离株,上海株,博茨瓦那株(HaS-BW),印度株(HaS-IN)和南非株(HaS-SA)。 为了充分利用棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒资源,为了开展害虫生物防治提供依据,对首次在朝鲜分离得到的棉铃虫单粒核型多角体病毒进行了研究。 本文从形态结构,结构多肽,限制性内切酶酶切图谱等方面进行了研究。多角体直径0.7~2μm。病毒粒子大小为326nm×69nm。经SDS-PAGE分析,棉铃虫多角体蛋白分子量为28.7kD。病毒粒子结构多肽与曾报道的G4株(湖北株)和HzSNPV(美洲株)比较类似。棉铃虫核型多角体病毒朝鲜株(HaSNPV-KO)的基因组BamHI,EcoRI,HindⅢ和PstI消化后,得到的内切酶图谱表现,与已报道的几个分离株类似,分子大小均为130.18kb。 棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒G4分离株(Gene Bank 271059),上海株(Gene Bank 303045)和美洲株(HzSNPV)(Gene Bank,334030)的全序列已测完,而且对G4分离株和美洲株基因组结构的分析进行得比较深。G4分离株基因组大小为131403bp,上海株为130760bp,美洲株为130869bp。 G4株与美洲株基因组分析结果表明,G4株有135个ORF,而美洲株有 139个O灯。据上述结果,可见,即使属于同一种病毒,每个分离株基因组 之间具有一定的差异。 本文进行了棉铃虫核型多角体病毒朝鲜分离株基因组BamHI一I片段全序 列,BamHI一H片段全序列和B田刀Hl一G片段部分序列的测序,而且与已报道的 G4株,上海株和美洲株比较分析。 棉铃虫核型多角体病毒朝鲜分离株基因组BamHI一I片段包括p26基因、 Plo基因和p74基因的3’末端,BamHI一H片段包括gP37基因、hrZ同源序 列和br。一b基因的5’末端。B田nHI一G片段部分序列包括bro一b基因的3’ 末端、hr3同源序列、he65基因、iaPZ基因和HaORF63基因的3’末端。 上述的p26基因、plo基因和p74基因的3’末端、即37基因、bro一b 基因、he65基因、iapZ基因和 HaORF63基因的3’末端与曾测完的三个棉铃 虫单粒包埋核型多角体病毒分离株(G4株、美洲株和上海株)的同源性比较 结果表明,它们之间有极高的同源性,甚至有的基因的核昔酸序列完全相同。 hrZ同源序列由1150个核昔酸组成,朝鲜株的hrZ序列比上海株多243 个bp,朝鲜株的hr2序列与病毒美洲株的hr2序列有90.5%的同源性,美洲 株的hrZ序列比朝鲜株多390个bP。 棉铃虫核型多角体朝鲜株hr3序列核普酸序列的大小共为 759bp,与G4 株一样。朝鲜株与G4株(759bP)的hr3核营酸序列完全相同,与美洲株(492bP) 有94.4%的同源性。 用nNAsls Max和scanprosite软件,进行了对p26基因、plo基因、gp37 基因、bro一b基因、he65基因和iaPZ基因编码的氨基酸蛋白的二级结构和疏 水性的分析。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S476

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