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《武汉大学》 2004年
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脂质体蛋白转染方法比较及运用该方法制备结核特异性靶细胞

李峥  
【摘要】:脂质体(liposome)是由磷脂及其他附加成分形成的一种双分子层小囊泡。由于这种双分子膜层具有生物膜特征,可与细胞融合,将脂质体囊泡中包裹的药物或其他成份导入细胞中。目前脂质体己广泛应用于制药、化妆品、农药等各个领域。 使某种细胞表达特异性蛋白我们常常选用核酸转染,其中脂质体转染法效率最高。现在有很多脂质体转染试剂面市,转染技术也很成熟。不过随着蛋白技术的发展,蛋白质学时代的到来,脂质体作为蛋白载体导蛋白入细胞技术也逐渐得到重视。脂质体可以与细胞膜融合而只将蛋白导入细胞,进入细胞后蛋白可以按照外源性蛋白的加工和递呈过程,通过细胞内溶酶体加工处理成多肽,然后和MHC分子一同递呈到细胞膜表面。但与脂质体作为核酸载体转染技术相比,其相应的试剂,方法及转染效率还没有比较完善的报道。 脂质体制备技术有很多种,较常用的为逆相蒸发法和冻融—超声法。本研究拟通过这两种制备脂质体的方法,探讨脂质体导蛋白入细胞的可行性。并尝试运用这一新方法制备结核特异性靶细胞。 目的:比较不同方法制备包裹蛋白脂质体的包封率和转染率。探讨转染的可行性。运用基因转染和蛋白导入两种方法制备结核特异性靶细胞,比较两种方法的转染效果。 方法:利用逆相蒸发法和冻融超声法制备包裹人IgG的阳离子脂质体,测定包封率并分别转染小鼠脾细胞,用流式细胞术,免疫荧光法,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和免疫印迹法检测转染效果。用Biontex试剂盒瞬时转染pcDNA3.1—Ag85B质粒入小鼠黑色素瘤细胞。同时用脂质体将结核杆菌滤液蛋白导入小鼠黑色素瘤细胞。转染法设两组:对照组(未转染Ag85B质粒的正常小鼠黑色素瘤细胞)和转染Ag85B质粒组。每组设两个复孔。导蛋白法设两组:对照组(未导入滤液蛋白组的正常小鼠黑色素瘤细胞)和导滤液蛋白组,每组同样设两个复孔。用结核病人血清作一抗,荧光标记鼠抗人IgG作为二抗,流式细胞仪检测细胞膜表面荧光的表达率。 结果:逆相蒸发法制备的脂质体包封率高于冻融—超声法(P<0.01)。流式结果显示两种方法制备的脂质体转染率无显著性差异(P>0.05)。转染Ag85B质粒组细胞表面荧光表达率明显高于空白对照组;同样导滤液蛋白组细胞表面荧光表达率,明显高 于空白对照组:转染质粒组和导蛋白组在细胞量相同的情况下均按常规量进行两种方 法的转染,转染质粒组细胞荧光表达率为32.1%,导结核杆菌滤液蛋白组荧光表达率 为40.7%,所得荧光表达量无明显差异。 结论:逆相蒸发法制备的阳离子脂质体可以作为蛋白转染的载体有效地将目的蛋 白导入细胞。由结果可知基因转染和蛋白导入均能有效地使目的基因或蛋白成功进入 细胞并表达在细胞膜表面,均为行之有效地制备靶细胞和方法。两种方法在效果上无 明显差异,可根据具体条件来选择较为合适的方法。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R392

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 智刚,王宝林,季朝能,朱琪泉,王洪海;结核杆菌Ag85B的表达纯化[J];复旦学报(自然科学版);2002年01期
2 郭建巍;HSP—肿瘤免疫的分子佐剂[J];国外医学(免疫学分册);2002年04期
3 刘衍兴,郭辉;磷脂脂质体对银杏叶乙醇提取物药理增效作用实验观察[J];基层中药杂志;1998年04期
4 刘衍兴,郭辉;小檗碱及其脂质体降血糖作用实验研究[J];基层中药杂志;1999年01期
5 居巍,刘君炎,庄玉辉,叶林柏;结核杆菌HSP65 DNA疫苗的初步研究[J];免疫学杂志;2002年02期
6 刘启光,尹长城,沈子威,赵南明,吴旻;用酸敏脂质体将荧光染料导入NIH3T3细胞及人胚肺成纤维细胞[J];生物化学与生物物理进展;1989年03期
7 罗云敬,刘海涛,李天剑,沈含熙;头孢菌素类抗生素脂质体的包封率测定与渗漏研究[J];中国生化药物杂志;1999年01期
8 管红兵,温文倩,顾青,田毓华;脂质体包裹可溶性蛋白质抗原诱导特异性CTL的研究[J];上海医学;1998年12期
9 王瓞,林其谁;脂质体药物传递系统[J];生命科学;1999年04期
10 胡兰荣,齐晓峰,郑昌学,吴健,董志伟;丝裂霉素靶向免疫脂质体对胃癌细胞M85的体外杀伤作用[J];生物化学杂志;1991年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘烈刚,刘恭平,姚平,郝丽萍,杨雪峰,孙秀发,朱清华;维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox-3.5 mRNA表达与胚胎发育关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年03期
2 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
3 安兰敏,杨军,徐兵;铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对P53基因表达影响的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
4 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
5 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
6 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
7 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
8 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
9 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
10 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
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1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 郭昱嵩;王中铎;刘楚吾;陈志明;刘筠;;勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)线粒体DNA全序列的测定与分析[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
4 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
5 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG2基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
6 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
7 唐小江;马争;黄建勋;黄汉林;李来玉;牛侨;;正己烷引起红细胞膜血影蛋白交联的研究[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年
8 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
9 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
10 严家彬;李新辉;吴淑勤;杜合军;;鳜鱼病毒核酸特异片段表达及高效价抗体制备[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 那坤;柔肝颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β_1/Smads信号转导通路的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
3 郭里;若干图论问题的DNA计算机算法研究[D];湖南大学;2009年
4 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
5 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
6 郝艳红;猪囊尾蚴发育过程中的超微形态学和膜分子生物学及其药物影响[D];东北农业大学;2000年
7 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
8 王宏田;牙鲆免疫系统和抗病力的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
9 王桂琴;核心蛋白聚糖DECORIN在肝纤维化形成机制中的作用[D];第二军医大学;2000年
10 吴艳涛;新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
2 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
3 王翠;杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a的基因克隆与功能分析[D];郑州大学;2010年
4 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
5 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
6 李静;父源性HLA-A基因与子痫前期相关性研究[D];郑州大学;2010年
7 张燕松;肾移植术后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达研究[D];郑州大学;2010年
8 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
9 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
10 陈操;日本七鳃鳗抗增殖蛋白Prohibitin1研究及类B淋巴细胞免疫调节初探[D];辽宁师范大学;2010年
【二级参考文献】
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1 李国锋,庄志铨,周日红,周晓智;一阶导数光谱法在测定维生素E霜中维生素E含量时的应用[J];第一军医大学学报;1995年02期
2 谢星辉,徐国兴;脂质体的现状和展望[J];国外医学.药学分册;1984年01期
3 温玉麟;;头孢菌素类抗生素的稳定性(上)[J];国外医药(抗生素分册);1990年04期
4 张林刚,胡继存,陆祖宏;可控组装方法制备脂质体[J];化学学报;1998年04期
5 余勤,梁茂植,邹远高,秦永平,尤宗兵,郑萍;反相高效液相色谱法测定人血浆及淋巴组织中5─氟尿嘧啶浓度[J];华西医学;1995年03期
6 陆惠娴;银杏的研究进展[J];基层中药杂志;1997年04期
7 童金花;黄连素片治疗Ⅱ型糖尿病49例临床观察[J];新中医;1997年03期
8 沈敏,黄少翚,邱德凯,王自鸣,江绍基,萧树东;冬虫夏草多糖及脂质体包埋冬虫夏草多糖对大鼠淋巴细胞表面分子的影响[J];上海免疫学杂志;1991年04期
9 翁帼英,陈明非,王玲玲;脂质体中卵磷脂的氧化产物与溶血的关系[J];生物化学与生物物理进展;1990年01期
10 邓英杰;苏德森;李焕秋;顾学裘;;多相脂质体139注射液化学稳定性的研究[J];沈阳药学院学报;1985年03期
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1 陈国武;孟纯阳;蒋电明;胡侦明;;重组真核表达质粒pEGFP/hVEGF_(165)转染兔成骨细胞条件的优化[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期
2 孙晓璐;张平静;汪成富;冯丽萍;樊小英;李忠明;;毕赤酵母对不同细菌抗原的差异性表达[J];南昌大学学报(理科版);2011年03期
3 石佳;马笑雪;;宿主基因多态性与结核病易感性的相关研究新进展[J];微生物学杂志;2011年03期
4 姜蔼玲;林航;;结核分枝杆菌分泌蛋白及其检测技术的研究进展[J];中国现代医生;2011年16期
5 潘小霞;张顺;袁静;文喻玲;陈元鼎;;增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达[J];中国医药生物技术;2011年04期
6 韩羽楠;潘崎;;胰岛素非注射给药途径研究与进展[J];中国科技信息;2011年15期
7 霍海峰;党帅军;;具有变化潜伏期的结核病模型稳定性分析[J];兰州理工大学学报;2011年03期
8 权蓉;陈晓品;冉之蓉;何芳;杨彪;赵银晶;杨小琼;;靶向干扰Chkl增强阿霉素抗人乳腺癌MCF-7/adr细胞的作用机制研究[J];中国细胞生物学学报;2011年05期
9 柴俊;罗家琴;蒋成砚;朱文豪;张以芳;;牛结核分枝杆菌Ag85b基因的克隆及表达[J];云南大学学报(自然科学版);2007年S3期
10 林月霞;吴志坚;袁茵;董斌;田素娟;;人乙酰肝素酶基因真核表达载体的构建与表达[J];广东药学院学报;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 车晓平;赵小伟;李卫敏;;脂质体在皮肤局部给药系统中的应用[A];2007中药药物创新与制药关键技术研讨会暨中华中医药学会中药化学中药制剂学术会议论文集[C];2007年
2 高华;薛红利;黄学娣;陈俐娟;孟文彤;阚兵;王先和;牛挺;;脂质体和厚朴酚治疗淋巴瘤的实验研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
3 徐昕;潘卫三;聂淑芳;祝林;奉建芳;;蟾毒提取物长循环脂质体的生物学评价[A];2009全国中药创新与研究论坛学术论文集[C];2009年
4 安身景;甘礼华;姚远;张付清;徐子颉;郝志显;陈龙武;;异丙酚与卵磷脂脂质体相互作用研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
5 赵大庆;高新风;裴奉奎;倪嘉缵;黄芬;;用NMR方法研究山莨菪碱与DPPC脂质体的相互作用[A];第七届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];1992年
6 涂良钰;李绍珍;;抗代谢中药剂型及对晶体上皮细胞作用的研究[A];全国首届中青年中医眼科学术研讨会资料汇编[C];1996年
7 黄虹;龚永生;范小芳;毛孙忠;胡良冈;;脂质体L-精氨酸对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮代谢及其合酶基因表达的影响[A];第六次全国缺氧和呼吸病理生理学术会议论文摘要汇编[C];2003年
8 梁晓飞;王汉杰;田惠;罗浩;成靖;郝丽娟;常津;;新型载药磁性阳离子高分子脂质体的制备[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
9 刘汉清;刘文雅;刘嘉;王娟;;硫酸铵梯度法制备苦参碱脂质体的工艺研究[A];中华中医药学会第九届制剂学术研讨会论文汇编[C];2008年
10 何春艳;刘庆良;;包裹乙肝表面抗原和天然骨架CpG ODN的脂质体乙肝疫苗的免疫原性和安全性[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 艾平;美科学家发现结核杆菌耐药原因[N];大众科技报;2000年
2 记者 颜秋雨 通讯员 伍西明;结核杆菌检测有了新技术[N];健康报;2011年
3 记者 毛磊;结核杆菌“盔甲”有破绽[N];新华每日电讯;2004年
4 张亚红 朱照静;摸索新途径 提高靶向性[N];中国医药报;2006年
5 记者 章迪思;高难高精“药物小车”中国也能造[N];解放日报;2009年
6 ;结核杆菌:美丽的“瘟神”[N];大众卫生报;2003年
7 记者 白毅;沈阳药大频出新成果[N];中国医药报;2006年
8 林峰;脂质体阿霉素新药临床研究立项863计划[N];科技日报;2005年
9 省疾病预防控制中心 李国刚;认识结核杆菌——结核病的“元凶”[N];河北日报;2006年
10 韩文;白介素-2前体脂质体研究获进展[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李斌生;载端粒酶ASODN-t的壳聚糖纳米粒的制备和对肝癌HepG-2细胞的转染[D];中南大学;2007年
2 刘屹;和厚朴酚脂质体治疗卵巢癌的实验研究[D];四川大学;2007年
3 郑顺贞;9-硝基喜树碱脂质体抗肝癌作用研究[D];华中科技大学;2011年
4 周青峰;海藻糖的发酵制备和保护机理的研究[D];华南理工大学;1997年
5 冯力蕴;复合荧光CdSe量子点的制备、表征与光学性质研究[D];中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所);2006年
6 戚凤春;新型流感疫苗的研究[D];吉林大学;2006年
7 康建功;鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分脂质体研制及抗肿瘤实验研究[D];中国海洋大学;2007年
8 于建斌;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对恶性黑素瘤生长抑制作用的实验研究[D];郑州大学;2007年
9 孙立;早期诊断结核杆菌相关肾损伤的实验性研究[D];中国医科大学;2010年
10 赵全民;抗结核杆菌有效中药筛选及蛇床子对结核杆菌分子表达影响的研究[D];吉林农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李峥;脂质体蛋白转染方法比较及运用该方法制备结核特异性靶细胞[D];武汉大学;2004年
2 贡亦清;5-氟尿嘧啶脂质体防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究[D];安徽医科大学;2004年
3 王筱亮;重组水蛭素脂质体鼻腔给药的研究[D];北京中医药大学;2005年
4 赵海英;促肝细胞生长素前体脂质体的研究[D];沈阳药科大学;2001年
5 吕文平;脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因(CD/5-FC)联合放射线治疗人直肠癌的实验研究[D];第三军医大学;2002年
6 薛同春;单抗Au_(14-1)-脂质体-p53基因转染载体的制备及其在宫颈癌U_(14)细胞中的表达[D];江西医学院;2004年
7 赵占中;新孢子虫NcSRS2 DNA疫苗的研究[D];中国农业大学;2005年
8 王亚军;脂质体流感疫苗的制备及免疫效果评价[D];吉林大学;2006年
9 王艳丽;汉防己甲素脂质体的研制[D];河南大学;2008年
10 姚伟荣;宫颈癌U_(14)细胞正丁醇提取物脂质体瘤苗的制备及其抑瘤效应观察[D];江西医学院;2003年
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