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《武汉大学》 2003年
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HCV Core蛋白诱导Cos-7细胞凋亡的研究

佘应龙  
【摘要】:丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙肝的病原体,在初次感染后常常转变成慢性持续性感染,从而易于导致肝硬化和肝癌,但关于其致癌机制迄今还不是很清楚,因此对HCV的病毒复制以及各个蛋白功能的研究非常重要,有利于阐明病毒复制及其在机体内致病的机理。Core蛋白是HCV的核心蛋白,具有多种功能,多个研究小组的研究表明Core蛋白能影响细胞的生长和分化,可能与HCV的致病性密切相关。 本论文研究了HCV 1型全长core基因(1-574bp)在真核细胞中的表达及其表达所引起的宿主细胞的变化。用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切pRSET-C获得全长core基因,将其插入到真核表达载体pCDNA3 CMV启动子下游,构建了重组真核表达质粒pCDNA3-Core。用脂质体LipoVec~(TM)将重组质粒pCDNA3-Core转染到人宫颈癌细胞Hela细胞系和猴肾细胞Cos-7细胞系中进行表达,设pCDNA3空质粒转染为空白对照,设pEGFP—N1质粒转染为阳性对照。免疫荧光实验检测了Core蛋白在Hela细胞系中的表达,但没有观察到较为明显的细胞变化。免疫斑点实验检测了Core蛋白在Cos-7细胞中的表达,而且还观察到在pCDNA3-Core转染COS-7细胞48小时后,细胞开始发生脱落,转染72小时后发生大量脱落。Hoechst 33258染色结果显示,转染了pCDNA3-Core的细胞的细胞核浓缩凝聚成几块,有的碎裂成分散状态,而对照细胞的细胞核为正常形态;DNA Ladder实验结果也表明转染有pCDNA3-Core的细胞出现了约180-200bp整数倍的DNA梯形带,而阴性对照却没有变化。而细胞核凝缩、DNA片段化都是细胞凋亡的重要生理生化特征,因此上面的实验结果表明HCV Core蛋白在Cos-7细胞中表达能诱导Cos-7细胞的凋亡。 HCV感染机体后,在感染者血清中病毒滴度很低,容易转变为慢性持 续性感染这可能与宿主的免疫防御和HCV病毒复制之间达到某种平衡有 关。本论文研究表明,Core引起细胞凋亡是一个比较缓慢的过程,其诱 发凋亡的功能与Core蛋白的量有关,Core蛋白量低时对宿主细胞的生长 和分化没有造成明显的变化,但Core蛋白累积到一定水平时就能引起宿 主细胞的凋亡,这样既能限制HCV在感染细胞中不能大量复制产生大量子 代病毒,又能保证有少量子代病毒产生。这与HCV感染机体后易造成持续 性感染且患者血清中病毒滴度低是一致的。Core蛋白的这种功能可能在 HCV的持续性感染中起着重要作用。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R373.2

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