收藏本站
《武汉大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

枯草芽孢杆菌抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变株的筛选及proBA基因的克隆和表达

苗丽霞  
【摘要】:利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌93151进行诱变处理,获得了一株耐NaCl浓度高达14%的突变株,经测定该突变株是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。对该突变菌株细胞内自由脯氨酸含量的分析发现,随着培养基中盐浓度的提高,细胞内自由脯氨酸的含量显著增加。由此表明,该突变菌株对渗透压的耐受能力与细胞内自由脯氨酸的含量密切相关。 根据枯草芽孢杆菌93151野生菌株proB基因的序列设计并合成引物,利用TaKaRa LA PCR~(TM) in vitro Clonging Kit试剂盒,克隆突变菌株的proBA基因,得到一个约2.3kb的DNA片段,序列分析表明该片段包含一个完整的proB基因和不完整的proA基因。与野生菌株的proB基因相比,突变菌株proB基因中有3个碱基发生了改变,其中一个碱基的变化(从起始密码子开始第781位由T→A),导致了一个氨基酸发生改变(Ser→Thr),另外两个碱基的变化(从起始密码子开始第777位由T变为G,第1087位由T变为C)为沉默位点突变。登陆ncbi网站,分析ProB蛋白的保守区域发现,ProB中有几个相对保守的区域,而该突变的氨基酸残基并不在这些区域内,可能这个突变的氨基酸残基在一级结构上并不处于ProB的催化活性区域内,而可能是处于该酶的变构区域,在高级结构上影响了它的变构活性,最终导致ProB解除了脯氨酸的反馈抑制,并提高了突变株耐渗透压能力。 同时对部分proA基因序列分析发现,proB基因的终止密码子和proA基因的起始密码子头尾重叠,并且在proA基因起始密码子上游第14个碱基处有一个类似于SD的序列,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌168的同源性为77%。这是在枯草芽孢杆菌中首次发现的proB和proA基因重叠的组织方式。 通过构建pBE_2-WproB(含有野生菌株proB基因)和pBE_2-MproB(含有突变菌株的proB基因)表达载体,将其分别转入脯氨酸营养缺陷型菌株E.coli 1.1252(proB~-),获得E.colil.1252/pBE_2-MproB及E.coli1.1252/pBE_2-WproB。结果表明,E.coli1.1252/pBE_2-MproB及E.coli1.1252/pBE_2-WproB在37℃培养条件下,都可以在含有0%、0.2%NaGl的MM培养基生长,但E.coli1.1252/pBE_2-MproB生长30小时后,就可以长出较大 的菌落,而E.co1z’1.1252/pBEZ一W刀r出生长48小时后,才长出较小的菌落。 在含有1%NaCI的MM培养基上,三co1z’1 .1 252/pBEZ一M夕r出经过72小时的 培养,也可以长出小菌落,而云co1z’1 .1252/pBEZ一W娜月出在此培养基上却 不能生长。由此表明,野生菌株与突变菌株厂oB基因的导入都能使脯氨酸 营养缺陷型三co1z’ 1 .1252恢复在基本培养基上生长的能力,并且可提高 三co1z’ 1 .1 252的耐渗透压能力,但突变的ProB基因提高受体菌的耐渗透 压能力是未突变那,出基因的5倍。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q933;Q78

免费申请
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 田迅;;关于特高压线路工程组塔施工中抱杆的方案选择[A];重庆市电机工程学会2010年学术会议论文集[C];2010年
2 徐书林;张炳辉;吴向东;;井架竖立新工艺的探讨与应用[A];全国矿山建设学术会议论文选集(下册)[C];2003年
3 张阵阵;刘永昌;冯嘉礼;;最大相似结构互补结合与最大相似功能互补匹配的相似度函数建立[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
4 钟习九;;钢结构井架吊装方法选择与探讨[A];矿山建设学术会议论文选集[C];2002年
5 吕超英;肖贵成;;南阳1000kV开关站构架主柱采用抱杆组立施工方法[A];第十届中国科协年会环境保护与生态文明建设论坛论文集[C];2008年
6 高政利;;功能互补、产品终端与零售(连锁)联盟集团组织(FRR)范式研究——以中小生产性组织为例[A];人文科技发展与管理创新——湖南省管理科学学会2009年度学术年会论文集[C];2009年
7 朱荫华;汪徐林;王利;;淮南顾桥矿主井井架的起吊工艺[A];矿山建设工程新进展——2005全国矿山建设学术会议文集(下册)[C];2005年
8 杨怀伟;付善喜;孙雪松;;1000kV特高压输电线路铁塔组立方案论证[A];高效 清洁 安全 电力发展与和谐社会建设——吉林省电机工程学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 高梅影;戴顺英;彭可凡;;苏云金芽孢杆菌工程菌的重组质粒向其他芽孢杆菌的转移[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
10 高梅影;戴顺英;彭可凡;;重组广谱苏云金芽孢杆菌工程菌生态安全性研究之一:工程菌的重组质粒向同生境中其它芽孢杆菌的转移[A];武汉市首届学术年会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘柳清;抱杆在手组塔无忧[N];中国电力报;2011年
2 记者 王寅龙;推进“六个对接” 实现功能互补[N];开封日报;2010年
3 江明 马一民;新型组塔施工机具可拆分式抱杆完成试验[N];国家电网报;2011年
4 张云 孟碧波;电建科技创新结硕果[N];华中电力报;2008年
5 曹际华 杨烨;我国大跨越高塔组塔技术有了新突破[N];华中电力报;2008年
6 本报记者 房晓童 通讯员 杨记宁 李宝峰;44天,一个新的开始[N];国家电网报;2011年
7 刘旭青;收入分配中市场调节与政府调控的功能互补[N];光明日报;2002年
8 上海市绿化和市容管理局党组;组织互联·资源互通·功能互补[N];解放日报;2010年
9 黄艳渝 梁石;川送QC小组建功特高压[N];西南电力报;2009年
10 程翀;狠抓细节 执着创优[N];中国电力报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴燕榕;苏云金芽孢杆菌vip3A基因及杀虫防病工程菌研究[D];福建农林大学;2004年
2 魏巍;苜蓿中华根瘤菌耐盐分子机制的研究[D];中国农业大学;2005年
3 胡千德;两个人类新基因TRPT1和PGL29的结构及功能分析[D];复旦大学;2003年
4 李芬;人Elongator复合物及其组蛋白乙酰转移酶活性在基因表达调控中的功能研究[D];东北师范大学;2003年
5 许永汉;水稻长节间基因Eui的图位克隆及功能分析[D];浙江大学;2004年
6 于彦春;水稻矮杆、脆茎突变体dwb1的定位及水稻白叶枯病抗性的遗传机理研究[D];浙江大学;2004年
7 田连福;镁离子转运基因AtMGT7的功能研究[D];湖南师范大学;2008年
8 胡亚平;油料作物油脂合成相关基因的转录、克隆和功能比较研究[D];中国农业科学院;2009年
9 马占强;苜蓿中华根瘤菌CCNWSX0020抗铜基因的克隆与功能验证[D];西北农林科技大学;2011年
10 张辉;通过DNA family shuffling技术获得植物强耐盐Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NHXFS1[D];华东师范大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苗丽霞;枯草芽孢杆菌抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变株的筛选及proBA基因的克隆和表达[D];武汉大学;2003年
2 刘鑫;舟山370m高塔抱杆现场试验和结果分析[D];合肥工业大学;2010年
3 肖军利;复杂支承条件下特种空间杆系钢结构研究[D];南京工业大学;2004年
4 杨健;论人民调解、行政调解与诉讼调解的制度衔接[D];厦门大学;2008年
5 侯娟;学校与家庭的情感性道德教育功能互补研究[D];重庆师范大学;2008年
6 周海霞;灭活原生质体融合选育α-ALDC-高产菌株[D];河北大学;2004年
7 刘济宁;海洋微生物050101菌株的杀虫活性筛选及其基因重组研究[D];华南热带农业大学;2004年
8 夏绍凯;大型输电铁塔吊装抱杆的力学试验和有限元分析[D];合肥工业大学;2006年
9 陈钢;费氏中华根瘤菌HNO1 lrp基因的研究[D];广西大学;2007年
10 宁德娟;胡杨质膜H~+-ATPase基因PePMA的克隆及异源表达[D];北京林业大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026