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《武汉大学》 2005年
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烟草驱动蛋白家族的新成员:NtKrp基因的克隆和功能分析

邹建伟  
【摘要】:本文以烟草(Nicotiana tabacum L-cv wisconsin 38)为材料,成功分离了NtKrp基因。为了进一步了解该基因在植物发育生长过程中的作用,对该基因的表达模式、生化活性、体内定位及转基因植株表型等方面进行了研究。主要结果如下: 1、通过对不同时期烟草的胚胎cDNA文库的筛选,成功克隆了该基因的全长片段,随后对该基因的氨基酸序列进行了预测并对该序列进行了生物信息学分析。利用专业软件从该蛋白序列中预测出一个高度保守的功能区:马达区。马达区的序列在驱动蛋白超家族中是高度保守的。由于含有这个高度保守的功能结构域,该基因被认为属于驱动蛋白超家族的成员。通过序列对比和检索,该基因与拟南芥中的AtPAKRP1基因等一起隶属于驱动蛋白超家族中的孤儿亚家族,与其它驱动蛋白在序列上同源性较低。目前为止对该亚家族的功能还知道得很少。同时,利用专业软件对该蛋白的马达区的空间结构进行预测。结果表明该蛋白马达区的空间结构具有该家族马达区空间结构的共同特征。因此该马达区也应具有ATPase活性和与微管结合的活性。这进一步表明该基因是驱动蛋白超家族的一员。 2、对该基因在烟草中的表达模式进行了分析。首先,利用RT-PCR技术分析了该基因在烟草多个组织,如叶、根、茎和未受精的花中的表达分布情况。实验结果表明在这些组织中仅在叶中可以检测到该基因的转录本。同时,利用单细胞和单胚RT-PCR技术对该基因在植物受精前后和胚胎发生过程中的表达情况进行了分析。实验结果表明该基因在受精后才启动表达,并在胚胎发生过程中都可以
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S572;Q943

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