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维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导mICAM-1表达的调节

朱泽荣  
【摘要】:目的 用Triton X-114 提取肺炎支原体的膜脂蛋白(Mp-LAMP),观察Mp-LAMP对ECV304细胞膜表面细胞间粘附分子1(mICAM-1)表达的影响,并初步探讨膜脂蛋白中的活性成分;观察抗氧化剂维生素C对Mp-LAMP诱导ECV304细胞、A549细胞表达mICAM-1的影响,为阐明肺炎支原体感染所致炎性反应奠定基础,并探讨维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导的炎症反应的抑制作用。 方法 本实验主要分为两个阶段:第一阶段提取肺炎支原体膜脂蛋白,并用提取的膜脂蛋白刺激脐静脉血管内皮细胞系ECV304细胞。采用流式细胞法检测不同Mp-LAMP浓度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)及不同作用时间(0h、4h、8h、16h、24h、32h)对ECV304细胞表达mICAM-1水平的影响;用蛋白酶K(0.2μg/ml)及脂蛋白脂肪酶(0.2μg/ml)处理Mp-LAMP,以观察两种酶对膜脂蛋白诱导的mICAM-1表达水平的影响。第二阶段用流式细胞术检测不同浓度维生素C(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)对Mp-LAMP诱导ECV304细胞及肺上皮细胞系A549细胞表达mICAM-1水平的影响。 结果 与基础表达水平相比,ECV304细胞受到Mp-LAMP作用后,mICAM-1的表达水平明显上调(P0.01),且对Mp-LAMP具有浓度依赖性,但当Mp-LAMP的刺激浓度超过25μg/ml后,mICAM-1的表达水平不再升高。随着Mp-LAMP作用时间的延长,ECV304细胞mICAM-1表达水平逐渐上升,16—24h之间达到高峰,然后开始下降;经蛋白酶K消化后的Mp-LAMP仍然可以诱导ECV304细胞mICAM-1表达水平的上调,与Mp-LAMP对照组相比无显著性差异(P0.05);而经脂蛋白脂肪酶消化的Mp-LAMP诱导ECV304细胞表达mICAM-1的能力与对照相比则明显下降(P0.01);与对照组相比,不同浓度的维生素C对膜脂蛋白刺激A549细胞表达mICAM-1的水平无显著性差异(P0.05),但对膜脂蛋白刺激ECV304细胞表达mICAM-1具有抑制作用(P0.05),维生素C浓度越高,抑制作


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