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《武汉大学》 2004年
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苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶纯化、性质研究及其mel基因的克隆和表达

刘楠  
【摘要】:mel基因编码的产物为酪氨酸酶。该酶催化底物L-酪氨酸形成L-多巴,并经过一系列的氧化反应形成黑色素。黑色素具有多种重要的生理功能,特别是其抗紫外线、清除自由基的功能及其应用价值倍受关注,形成一新的研究热点。苏云金芽孢杆菌是目前世界上应用最广泛的微生物杀虫剂,但是其在大田中的应用因为伴孢晶体受紫外线辐射易失活而受到限制。我们实验室在研究过程中发现几乎所有亚种的苏云金芽孢杆菌在42℃条件下均可以产生黑色素,这为苏云金芽孢杆菌的广泛应用奠定了重要的理论基础。 本研究利用“一步过柱法”纯化了苏云金芽孢杆菌的酪氨酸酶,并且对其酶学性质进行了研究,发现该酶除具有酪氨酸酶共有的性质外,还有许多独特的性质,如热稳定性、底物特异性、被高浓度EDTA激活等。苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶独特的性质使其成为研究蛋白质结构和功能关系的理想模式酶。 本研究进一步使用“鸟枪法”克隆到了苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶基因(mel),以pUC18为载体构建了含有mel基因的质粒pBM,在大肠杆菌中获得了较好的表达。同时,我们还将苏云金芽孢杆菌mel基因亚克隆到枯草芽孢杆菌表达质粒pBE2上并在枯草芽孢杆菌中也获得了表达。对克隆到的mel基因进行的序列分析和同源比较显示该基因是一个典型的酪氨酸酶,其氨基酸序列具有酪氨酸酶特有的活性保守区域。我们对苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶结构的初步分析显示此蛋白在二级结构上与其他来源的酪氨酸酶有明显的区别。 此外,我们还考察了产黑色素苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的表达情况,发现伴孢晶体的全部表达依赖于30℃预培养。同时,伴孢晶体的表达和芽孢形成、黑色素的
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q936;Q78

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 彭方,方呈祥,彭珍荣;黑色素对λ溶原菌及其紫外线诱导性的影响[J];武汉大学学报(自然科学版);1999年06期
2 张宏宇,邓望喜,喻子牛;苏云金芽胞杆菌的遗传多样性 II.杀虫晶体蛋白及其基因型[J];遗传;2000年02期
3 胡国斌,郑从义,屈三甫,卫扬保;黑色素抑制流感病毒诱导宿主细胞凋亡[J];中国病毒学;1999年02期
4 王巨存,邢国胜,胡文铎,朱铁梁,王倩,赵华;有机锗Ge-132对氧自由基和由羟自由基诱导的脂质过氧化的影响[J];中国药学杂志;1994年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张生明;;碱提红景天中的多糖及抗氧化性研究[J];安徽农业科学;2008年18期
2 戈群妹;王新风;杨芳;陈珊珊;;葎草水提液多酚的含量测定与抗氧化性研究[J];安徽农业科学;2009年09期
3 曹鹏飞;;石榴皮和绿茶中单宁的抗氧化作用研究[J];安徽农业科学;2011年20期
4 王玉洁,符坚,刘楠,沈萍,彭珍荣;重要的生物资源黑色素及其功能的机理[J];氨基酸和生物资源;2003年01期
5 王进忠,孙淑玲,杨宝东;转Bt基因植物的研究与应用前景[J];北京农学院学报;2002年03期
6 方伟;陈彦;孙玉军;;茶多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用[J];茶叶科学;2008年01期
7 陈建武,黄必旺,黄志鹏,林毅,关雄;电转化法及其在苏云金杆菌中的应用[J];福建农业大学学报;1999年03期
8 黄天培;潘洁茹;李今煜;洪永聪;黄志鹏;;苏云金芽孢杆菌8010蛋白酶基因保守区克隆及序列分析[J];福建农林大学学报(自然科学版);2008年01期
9 赖谱富;李怡彬;陈君琛;周学划;沈恒胜;;大球盖菇漂烫液喷雾干燥精粉贮藏稳定性的研究[J];福建农业学报;2012年03期
10 张文飞;全嘉新;谢柳;王茜;易艳桃;丰玫玫;朱麟;王锐萍;方宣钧;;海南岛热带雨林区芽孢杆菌收集及Bt菌鉴定[J];基因组学与应用生物学;2009年02期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 洪玉枝;刘子铎;潘学文;喻子牛;;从大肠杆菌克隆株中分离杀虫晶体蛋白的方法[A];杀虫微生物[C];1992年
2 焦士蓉;黄承钰;宋薇薇;;枳实提取物的体外抗氧化作用研究[A];食物功效成分与健康——达能营养中心第九次学术年会会议论文集[C];2006年
3 盖玉红;宋慧;魏健;;灵芝液体深层发酵液多糖的抗氧化活性研究[A];第八届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李荣春;新型季铵化壳聚糖衍生物的制备及其抑菌和抗氧化活性研究[D];新疆农业大学;2010年
2 李芒;肚倍蚜适应单宁环境机理的初步研究[D];华中农业大学;2011年
3 檀建新;Bt cry基因克隆和环状芽孢杆菌几丁质酶的研究[D];中国农业科学院;2000年
4 张杰;对鞘翅目害虫高毒力的Bt cry基因分离克隆和工程菌的构建[D];中国农业科学院;2000年
5 宋福平;苏云金芽孢杆菌特殊异性cry基因的研究[D];东北农业大学;2001年
6 李艳华;抗禽流感病毒中药及盐酸金刚烷胺诱导M2基因变异的研究[D];东北农业大学;2003年
7 刘子铎;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白和辅助蛋白基因的克隆表达[D];华中农业大学;1999年
8 李林;苏云金芽胞杆菌高频转化系统的建立及其性能[D];华中农业大学;1999年
9 鲁松清;苏云金芽胞杆菌对鳞翅目昆虫广谱高毒基因工程菌的构建[D];华中农业大学;1999年
10 张利莉;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白cry1D的表达调控[D];华中农业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张燕飞;Bt水稻外源基因及其表达蛋白的环境持留研究[D];浙江大学;2011年
2 林智敏;杀虫基因cry1Ca的人工合成、原核表达及其转基因水稻的培育[D];福建师范大学;2010年
3 杨永兰;蛋氨酸羟基类似物抗氧化作用及其对小鼠生长的影响[D];江南大学;2010年
4 赵辉欣;转基因水稻秸秆中Cry1Ac蛋白降解的研究[D];中国农业科学院;2011年
5 杜广香;玛咖生物碱的分离纯化及抗氧化活性研究[D];华南理工大学;2011年
6 王冬冬;香辛料提取物抗氧化性的研究[D];湖南农业大学;2011年
7 郭莉明;五氯酚降解菌的驯化、筛选及其降解性能的研究[D];华中科技大学;2011年
8 吴佳;苏云金芽孢杆菌毒杀松材线虫活性研究及线虫冷冻保存[D];浙江农林大学;2011年
9 李翔;苏云金芽孢杆菌CryIAc重组蛋白及土曲霉PNR2发酵产物的杀虫活性研究[D];南京农业大学;2010年
10 贺天珍;桑枝皮多糖的制备、结构鉴定及其抗氧化活性分析[D];苏州大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 聂毓秀,陈玉兰,赵培林,张树功,倪嘉缵;锗-132对体外培养人二倍体细胞的作用[J];白求恩医科大学学报;1990年02期
2 朱炳法,洪金秧,陈红专,孙琛,姚天荣,陆德源,王一飞;有机锗及卡介苗素调控NK-A的研究[J];上海第二医科大学学报;1991年03期
3 季立才;;黑色素[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1991年01期
4 鲁纯素,赵会英,史录文;丝裂霉素促进活性氧自由基生成的研究[J];生物化学杂志;1989年06期
5 张宏宇,曾晓慧,邓望喜,喻子牛;苏云金芽胞杆菌的遗传多样性 I.遗传标记及其应用[J];遗传;1999年06期
6 黄诒森,何燕,张均田;五味子三种成分的抗氧化作用[J];中国药理学与毒理学杂志;1990年04期
7 林童俊,刘耕陶,李小洁,赵保路,忻文娟;黄皮酰胺抗脂质过氧化及对氧自由基清除作用[J];中国药理学与毒理学杂志;1992年02期
8 黄诒森,张均田;丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用[J];药学学报;1992年02期
9 陈雁群,田斌,李宣梅,陈雁君,谢淑红;羧乙基锗倍半氧化物对正常和异丙基肾上腺素损伤培养乳鼠心肌细胞的影响[J];药学学报;1992年07期
10 左丽,陈力,唐晓敏,郭辉玉;黄芪A6组分对流感病毒感染小鼠的防治作用[J];中国病毒学;1997年04期
【相似文献】
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1 朱绮琴;用Asmus法测K_m值[J];华东师范大学学报(自然科学版);1988年04期
2 高秀蕊;石双群;欧阳邸;马长军;;SOD与酪氨酸酶共存时各自的活性[J];河北师范大学学报(自然科学版);1993年02期
3 李韶勇,孙命,曲娜,缪方明;黑色素的合成及其常见抑制剂的作用机理[J];天津师范大学学报(自然科学版);2002年01期
4 傅博强,李欢,王小如,LEE Frank SC;甘草黄酮类化合物对酪氨酸酶单酚酶的抑制[J];天然产物研究与开发;2005年04期
5 黄浩,宋康康,邱龙新,陈清西;对醛基苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用[J];厦门大学学报(自然科学版);2005年04期
6 李好样;李永耀;韩红斐;;苹果中酪氨酸酶的提取及其催化活性研究[J];太原师范学院学报(自然科学版);2008年04期
7 杨美花;李智聪;刘凤娇;庄江兴;王勤;陈清西;;L-半胱氨酸作为化妆品美白添加剂的作用机理[J];厦门大学学报(自然科学版);2009年04期
8 安林坤;全军民;;固定化酪氨酸酶处理含酚废水的研究[J];中山大学研究生学刊(自然科学版);1999年02期
9 邱龙新,黄浩,陈清西;鞣酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用[J];厦门大学学报(自然科学版);2005年06期
10 徐亮;;酪氨酸酶催化的3,4二羟基苯基丙氨酸氧化反应的动力学分析(英文)[J];四川大学学报(自然科学版);2005年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周妙妮;关翠萍;洪为松;许爱娥;;白癜风患者病程与抗酪氨酸酶抗体的关联分析[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
2 杨希鏸;章晓鹰;董惠芳;杨懿萍;杨红;;止血环酸抑制黑色素合成的实验研究[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年
3 曹亚;李根喜;;芥子酸及其衍生物对酪氨酸酶抑制作用的电化学研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
4 魏海柳;穆燕;姜锐;邱俊;李琳;张喜梅;胡松青;;超声辅助提取白附子酪氨酸酶抑制剂的研究[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
5 王莒生;王辉;王萍;陶毅;蔡念宁;张广中;郭念筠;郁卫东;杨立新;陈清轩;;滋补肝肾方对鼠黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA基因表达的影响[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年
6 李廷慧;高天文;李春英;王秋枫;孙东杰;;酪氨酸酶蛋白在巴氏毕赤酵母表达的初步研究[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
7 王倩;蔡念宁;;中西药对酪氨酸酶的影响在白癜风发病机制中的研究现状[A];2006中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2006年
8 郭云集;李文岗;韩鹏;李智聪;庄江兴;陈清西;;苯丙烯酸衍生物的合成及其对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用[A];第九届全国酶学学术讨论会暨邹承鲁诞辰85周年纪念会论文摘要集[C];2008年
9 陈俊杰;于淼;黄姗姗;郑忠辉;张连茹;;酪氨酸酶与2个小分子抑制剂的分子对接[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
10 谭城;朱文元;鲁严;刘栋;;芦荟素、肉桂酸、苦参碱对酪氨酸酶的抑制作用[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘远达;我科学家揭开白猴白化之迷[N];新华每日电讯;2000年
2 本报记者 胥晓琦;四种皮肤病治疗 新进展[N];中国中医药报;2002年
3 金霖;各种美白组分开发热度不减[N];中国化工报;2002年
4 四川农业大学 严梦 王之盛 周安国;专家警示:仔猪皮红毛亮不一定就是健康[N];中国畜牧报;2004年
5 玉花;蘑菇[N];民族医药报;2000年
6 刘铜华;维吾尔医药治疗白癜风浅谈[N];中国中医药报;2003年
7 冬梅;何谓“肝病面容”?[N];大众卫生报;2004年
8 ;面部色斑产生的原因[N];大众科技报;2004年
9 蔡长瑞;黄褐斑的食疗[N];科技日报;2000年
10 潘祥龙(上海中医药大学附属曙光医院 副主任医师);治疗黄褐斑选药有讲究[N];上海中医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 穆燕;千日红酪氨酸酶抑制剂的分离纯化及其抑制机理研究[D];华南理工大学;2012年
2 黄晓伟;三种植物挥发油的化学成分、酪氨酸酶抑制能力及抗氧化活性的研究[D];华中科技大学;2013年
3 徐学涛;二苯烯酮类化合物的合成及其荧光性能研究[D];广东工业大学;2011年
4 白明慧;联邻苯二酚结构的DNA交联剂的设计合成研究及其对黑素肿瘤细胞的选择性杀伤作用[D];武汉大学;2011年
5 陈菊萍;马拉色菌对培养人黑素细胞代谢及酪氨酸酶基因表达的影响[D];四川大学;2005年
6 刘楠;苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶纯化、性质研究及其mel基因的克隆和表达[D];武汉大学;2004年
7 张永兵;竹叶提取物对酪氨酸酶和黑色素瘤细胞的影响[D];中国林业科学研究院;2009年
8 庄江兴;α-synuclein蛋白及抑制剂对酪氨酸酶的调控机制[D];厦门大学;2009年
9 张建友;竹子精华水的成分分析及生物学活性研究[D];浙江大学;2010年
10 崔凤霞;海参胶原蛋白生化性质及胶原肽活性研究[D];中国海洋大学;2007年
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1 修妍伟;盐地碱蓬酪氨酸酶酶学特性及其基因克隆[D];山东师范大学;2010年
2 汪雯;酪氨酸酶七肽抑制剂的筛选及其柔性脂质体的制备[D];东华大学;2012年
3 余霞;续随子种子化学成分的酪氨酸酶抑制性和抗氧化性研究[D];南京师范大学;2011年
4 李超;与酪氨酸酶相互作用蛋白的鉴定和作用机制研究[D];苏州大学;2014年
5 郭守娇;基于生物酶的真丝功能改性[D];苏州大学;2013年
6 裴超俊;天麻素对酪氨酸酶的抑制作用及黑色素生成的影响[D];苏州大学;2013年
7 邢珍珍;新疆藁本中酪氨酸酶抑制成分的高效液相色谱筛选研究[D];塔里木大学;2013年
8 姚尧;石胆草的化学成分及酪氨酸酶抑制活性研究[D];昆明理工大学;2012年
9 陈玲娟;新型酪氨酸酶抑制剂筛选及其活性测试[D];中南林业科技大学;2012年
10 商飞;羽藻和缘管浒苔提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究[D];中国海洋大学;2011年
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