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《武汉大学》 2004年
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轻度修饰低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡机制的研究

王韻  
【摘要】:细胞凋亡是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变的主要病理特征之一,在AS的发生、发展中具有重要的作用。血管内皮细胞凋亡是AS发生的始动环节,对于内皮细胞凋亡机制的研究将有助于更好地防治AS。大量研究证实,氧化修饰低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)能诱导血管壁细胞凋亡,但其致凋亡的信号通路与AS病变演化间的关联仍不清楚,因为以往多数实验采用的都是LDL经铜离子氧化形成的重度氧化修饰LDL(extensively modified oxidized LDL,ox-LDL),它并不存在于早期AS斑块中。与之相反,LDL经铁离子氧化修饰后形成的轻度修饰LDL(minimally modified LDL,mm-LDL),与AS起始阶段动脉壁中发生修饰的LDL具有很多相似的特征,在AS病变的多种环节中发挥重要作用。目前认为,早期AS损伤处发生凋亡的细胞不是暴露于ox-LDL,而是mm-LDL。因此,本课题以mm-LDL为研究对象,观察其能否诱导血管内皮细胞凋亡,并初步探讨了mm-LDL致血管内皮细胞凋亡过程的信号转导机制。研究内容主要包括以下几个方面: 一.以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作为实验对象,观察mm-LDL能否诱导HUVECs凋亡。 采用胰蛋白酶消化法由新生儿脐静脉获得HUVECs。两步超速离心法分离血浆LDL,亚铁离子氧化法制备mm-LDL。以不同浓度LDL和mm-LDL分别作用于HUVECs,孵育不同时间后,以MTT法检测细胞存活率。利用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化。采用流式细胞术测定细胞凋亡率。 实验结果表明,mm-LDL(100lμg/ml~300μg/ml)与HUVECs分别作用12h、24h和48h后,能以浓度依赖性和时间依赖性的方式降低HUVECs存活率。300μg╱mlmm-LDL作用48h时抑制作用最强达59.3%;相反,300μg/ml n-LDL对细胞存活率无显著影响。细胞经DNA染料Hoechst 33258染色后,镜下可见正常HUVECs胞核内染色质分布均匀;而经300μg/ml mm-LDL作用48h后的HUVECs细胞明显变小、变圆,染色质凝聚及核碎裂。透射电镜显示,正常HUVEC细胞核染色质均匀而分散,线粒体丰富;mm-LDL作用后的细胞则表现为核染色质浓缩,核固缩、核碎裂,并出现线粒体肿胀,胞浆空泡化等改变.流式细胞术分析显示,mm-LDL处理组细胞的DNA直方图上出现亚G1峰。mm-LDL(100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml)作用48h
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R543.5

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