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《武汉大学》 2005年
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脂肪干细胞作为血友病A基因治疗靶细胞可能性的研究

李银华  
【摘要】:目的:探索脂肪干细胞作为血友病A基因治疗靶细胞的可能性。 方法:实验于2004.1-2004.6在武汉大学医学院病理生理学实验室完成。先将重组质粒表达载体pRC/RSV-FⅧBD扩增、纯化和鉴定。取大鼠的腹腔和肾后脂肪组织,分离出脂肪干细胞。当培养细胞生长至80%融合时,将重组质粒表达载体和阳离子脂质体Lipofectamine(Lipofectamine转染试剂)以0.5:1,1:1,1.5:1三种不同的质量比混合后转染大鼠的脂肪干细胞。培养36小时后分别采用比色法和半定量PCR(半定量多聚酶链式反应)方法检测培养细胞上清中人FⅧ的凝血活性和脂肪干细胞的外源基因转化效率。 结果:质量比为1.5:1时转染效率比质量比为0.5:1时约高5%,质量比为1:1时转染效率最高,约比质量比为0.5:1时高50%。转化36h后检测脂肪干细胞上清中的人FⅧ活性,结果显示:①表达载体与阳离子脂质体质量比为0.5:1时,人FⅧ活性0.2%;②表达载体与阳离子脂质体质量比为1:1时,人FⅧ活性1.6%;③表达载体与阳离子脂质体质量比为1.5:1时,人FⅧ活性0.4%。没有表达载体转染的脂肪干细胞上清中人FⅧ活性为0。 结论:外源基因pRC/RSV-FⅧBD能成功转染鼠脂肪干细胞,转化后脂肪干细胞能够表达该外源性基因。脂肪干细胞可能成为血友病A基因治疗的理想靶细胞。
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R554

【参考文献】
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