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《武汉大学》 2005年
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当归多糖对乙肝病毒转基因小鼠树突状细胞功能影响的实验研究

李声方  
【摘要】:背景:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是导致慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化、原发性肝癌(HCC)的重要原因之一。在我国,乙肝病毒无症状HBV携带者(ASC)约1.2亿,乙肝患者约2800万人,其临床治疗现状并不令人满意。树突状细胞(DC)作为体内最重要的抗原递呈细胞(APC),近年来研究发现其功能缺陷可能是导致HBV慢性感染的重要原因。中药多糖具有稳定的增强机体免疫功能的作用,可通过诱导机体多种细胞因子的产生来增强免疫,而当归多糖对慢性乙肝患者DC有何作用及是否通过诱导机体产生促DC增殖、成熟的细胞因子来增强机体抗病毒能力等尚未见有关报道。 目的:通过实验的方法研究当归多糖对HBV转基因小鼠DC的功能状态(成熟状态、表面协同刺激分子表达能力、刺激同种异体淋巴细胞增殖能力、分泌细胞因子水平等)及抗病毒免疫能力(血清HBsAg滴度变化)的影响,初步探讨其作用机制。 方法:无菌条件下取当归多糖处理和未处理的转基因小鼠脾脏制备获得单个核细胞,以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)和RPMI1640完全培养液培养诱导DC,显微镜下观察DC形态,流式细胞仪检测DC表面协同刺激分子(CD_(80),CD_(86))的表达,MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力并计算刺激指数(SI),ELISA法测定混合淋巴细胞反应(MLR)上清液中IL-12、r-IFN水平及血清HBsAg、HBeAg滴度变化等方法进行研究。并与正常小鼠对比。 结果:无菌条件下取脾制备单个核细胞,以细胞因子rmGM-CSF、rmIL-4和RPMI1640完全培养液诱导培养可产生成熟DC,相差显微镜下见较多呈短棒状、梭形细胞,聚集成团,并有毛刺样细胞突起,长短不一,呈比较典型的DC特征。电镜下可见细胞表面有皱褶及树枝状突起,胞内有空泡,核细胞染色深,形状不规则,偏于一侧。 流式细胞仪检测发现,当归多糖处理组小鼠DC表面协同刺激分子CD_(80)、CD_(86)的表达率分别为6.1±1.21%、12.3±3.07%,对照组两分子表达率为2.1±0.12%、2.63±0.02%,处理组小鼠DC表面CD_(86)的表达明显增加(P0.05)。正常小鼠两分子表达率为20.7±1.94%、31.2±1.82%,较转基因小鼠值明显为高(P0.05)。 MLR发现,DC与异体淋巴细胞在1∶10、1∶50和1∶100比例混合时,当归多糖
【学位授予单位】:武汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
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