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《华中科技大学》 2011年
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二苯乙烯苷对炎症性肠病的作用:诱导PPAR-γ和抑制NF-κB及其炎症通路

曾诚  
【摘要】:第一部分THSG的含量测定及初步探讨其时效及量效关系 背景和目的:何首乌(Polygonum multiflorum Thunb, PM)作为传统的中草药,用于滋补及抗衰老已上千年,同样也用于润肠通便、消痈和乌须发等多个方面。二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside, THSG),是从PM中提取出的具有多酚类结构的水溶性活性成分,已证实其具有抗氧化和抗炎的作用。本文第一部分旨在测定从PM中提取的THSG的含量并就其抗结肠炎的时效和量效关系做初步研究。 方法:采用高效液相色谱(HPLC)测定THSG的含量,采用HE染色观察小鼠肠道粘膜的病理改变,运用生化的方法检测髓过氧化物酶(MPO)及丙二醛(MDA)的含量。 结果:经筛选色谱条件以Hypersil ODS-C18 (5μm,4.6×250 mm)为固定相,甲醇-水(4:6)为流动相,检测波长以310 nm为最佳。样品在4.224~132μg/mL范围内线性关系良好(n=3),回归方程为:Y=19087X-19466,r=0.970。结果表明自制THSG含量高达99.90%。在整体水平上建立乙酸诱导的结肠炎模型后,连续给药5、7、10天后,与正常组小鼠比较,模型组小鼠体重明显降低。THSG (10、30、60 mg/kg)能剂量依赖性改善小鼠体重的降低,60和120 mg/kg THSG均能明显改善小鼠体重的降低,但两者之间比较,没有统计学差异。不同剂量的THSG(10、30、60和120 mg/kg)给药5、7、10天后,HE染色显示:与乙酸模型组比较,THSG明显减少炎性细胞浸润,降低粘膜及粘膜下水肿,改善上皮细胞的坏死脱落及溃疡形成。连续给药5、7、10天后,THSG 10、30、60 mg/kg能剂量依赖性减少MPO的含量;60和120 mg/kg THSG均能降低MPO的含量,但两者之间比较,没有显著性差异。THSG 10、30、60 mg/kg能剂量依赖性减少MDA的含量;60和120 mg/kg THSG均能降低MDA的含量,但两者之间比较,没有显著性差异。 结论:含量测定结果表明自制THSG含量高达99.90%,达到单体物质质量要求。在10~60 mg/kg的范围内以上效应存在剂量依赖关系,而在60~120 mg/kg的范围内,其作用没有显著性差异,可能是到达了药效的平台期。 第二部分THSG对炎症性肠病治疗作用及其机制研究 背景与目的:炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)在降低患者生活质量的同时,也给社会带来极大的经济压力。研究表明,IBD的发生与过氧化物酶体增生物活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ, PPAR-γ)的缺陷密切相关。在炎症级联反应过程中,核转录因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)被激活,诱导肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)等炎性介质的表达增加,从而导致活性氧/氮族(reactive oxygen/nitrogen species, ROS/RNS)的过度产生,进一步造成组织损伤,并形成完整的炎症与氧化应激反应的正反馈通路。二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside, THSG),是从何首乌(Polygonum multiflorum Thunb, PM)中提取出的具有多酚类结构的水溶性活性成分,已证实其具有抗氧化和抗炎的作用。本课题组已经证实THSG对炎症性肠病的治疗作用与降低ROS/RNS水平、下调诱导性一氧化氮合酶(induced metric oxide synthase, iNOS)有关。本研究旨在考察二苯乙烯苷(THSG)对炎症性肠病(inflammation bowel disease, IBD)的作用及其与PPAR-γ和NF-κB介导的炎症信号通路的关系。 方法:在整体水平上建立乙酸诱导的结肠炎模型,采用RT-PCR技术测定PPAR-γ在mRNA水平的表达。采用免疫印迹技术(western blotting)技术检测NF-κB、TNF-α、IL-6、COX-2和PPAR-γ蛋白水平的表达。 结果:不同剂量的THSG(10、30和60 mg/kg)给药7天后剂量依赖性降低炎性介质TNF-α、IL-6和COX-2蛋白的表达。60 mg/kg时使TNF-α的表达降低至正常组的120.88±4.45%;同样,60 mg/kg THSG降低IL-6蛋白表达,其作用强度优于5-氨基水杨酸。THSG(10、30和60 mg/kg)依量减少COX-2蛋白的表达,分别至正常组的200.3±6.67%、142.28±7.46%和118.56±5.59%。THSG(10、30和60 mg/kg)降低NF-κB p65蛋白的表达,分别为正常组的186.57±4.12%、171.3±6.94%和91.51±3.67%。THSG(10、30和60 mg/kg)剂量依赖性的增加PPAR-γ在基因及蛋白水平的表达,THSG 60mg/kg的作用强度优于5-氨基水杨酸。 结论:二苯乙烯苷通过上调PPAR-γ基因及蛋白水平的表达,抑制NF-κB及炎性介质TNF-α、IL-6、COX-2的表达,减少脂质氧化产物MPO、MDA的产生而发挥对IBD的保护作用。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285

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