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《华中科技大学》 2011年
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腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养及其增殖与凋亡的相关研究

肖芃  
【摘要】:第一部分腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养 目的探讨腺性肥大乳房乳腺上皮细胞(hMEC-GAHB)的原代培养方法,了解该原代细胞的形态学及生物学特点。 方法采用0.25%胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶混合液,结合长时间4℃和短时间37℃消化,配合低转速离心的方法,从10例腺性乳房肥大症和10例正常体积乳房患者的乳腺组织中消化获取乳腺上皮细胞并进行原代培养,同时传代培养人正常乳腺上皮细胞株HBL-100,评价获取原代细胞的效果,观察各组细胞的形态学特点,采用多抗体免疫细胞化学法(MICC)鉴定原代细胞种属,并采用PI染色法、MTT法和流式细胞术等方法对各组细胞的细胞周期和体外增殖及凋亡等生物学特点等进行分析。 结果每克乳腺组织可获取细胞数约为5×106个,细胞存活率约为70%,接种后48h细胞贴壁率约为60%,贴壁细胞活性良好,接种后约72h胞质展开,约120h相互融合。细胞增殖明显,未见明显凋亡。hMEC-GAHB与另两组细胞在细胞形态学上无明显差异,且正常表达典型的上皮细胞骨架蛋白(CK8/CK14/CK18/a-SMA等)。在含有相同浓度的17β-雌二醇的体外环境中,处于对数生长期的hMEC-GAHB的群体倍增率(PDR)及G2/M期与G0/G1期细胞数比值均高于同期正常体积乳房乳腺上皮细胞(human mammary epithelial cells of normal volumn breast, hMEC-NVB),两者间存在统计学差异(P0.05)。hMEC-GAHB连续传代3-4次后,逐渐进入衰退期。 结论采用改良的酶消化法可获得较满意的细胞数和细胞活性。hMEC-GAHB具有典型上皮细胞的形态学及生物学特点,在含有雌激素的体外环境中, hMEC-GAHB相比hMEC-NVB具有更强的增殖活力,并具有正常的细胞衰退期。 第二部分腺性肥大乳房乳腺组织和上皮细胞中雌激素受体alpha的定位和表达 目的研究雌激素受体alpha(ERa)在腺性肥大乳房乳腺组织和上皮细胞中的定位和表达,探讨其在腺性乳房肥大症病因学上的意义。 方法对10例腺性乳房肥大症患者和正常体积乳房乳腺上皮细胞进行原代培养,同时传代培养人正常乳腺上皮细胞株HBL-100和人乳腺癌上皮细胞株MCF-7(ERα+),采用免疫组织化学法(IHC)、免疫荧光组织化学法(IFHC)和蛋白质印迹法(western blot)等对乳腺组织病理学特点和组织及细胞中ERα的表达进行定性和定量分析。 结果ERα表达于导管和小叶的腔上皮细胞内,在肌上皮细胞和间质细胞等细胞内几乎不表达,且腺性肥大乳房乳腺组织导管上皮处ERα+细胞数多于小叶,两者比例较为恒定(1.7:1)。ERα+细胞在腺性肥大乳房和正常体积乳房乳腺组织中的阳性表达率(positive expression rate, PER)分别为17.25%和6.13%。腺性肥大乳房、正常体积乳房、正常乳腺上皮细胞株和乳腺癌上皮细胞株中的ERα蛋白表达值(protein expression value, PEV)分别为1.965、1.002、0.060和2.338。腺性肥大乳房乳腺组织中PER和ERαPEV与正常体积乳房及正常乳腺上皮细胞株间均存在明显统计学差异(P0.05),且PER和ERαPEV与乳房肥大的严重程度呈正相关。乳腺癌乳腺上皮细胞株组各数值与其他各组均存在明显差异(P0.05)。 结论ERa在乳腺组织内的表达定位具有特征性。与正常体积乳房乳腺上皮细胞(hMEC-NVB)相比,腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的阳性表达率(PER)和ERa蛋白表达值(PEV)均明显增高,且ERa表达情况的高低与乳房肥大的严重程度成正相关。由此推测,腺性乳房肥大症的发生与乳腺组织内ERa的分布特点和上皮细胞内ERa表达增多有密切关系。 第三部分他莫昔芬对腺性肥大乳房乳腺上皮细胞增殖与凋亡的影响 目的探讨选择性雌激素受体调节剂他莫昔芬(tamoxifen)对腺性肥大乳房乳腺上皮细胞体外增殖和凋亡的影响,并分析其作用机制。 方法在含有相同浓度17p-雌二醇的体外环境中,给予他莫昔芬分别对腺性肥大乳房乳腺上皮细胞(hMEC-GAHB) (M1组)、正常乳腺上皮细胞株HBL-100(N’组)和乳腺癌上皮细胞株MCF-7(ERα+)(C组)进行干预,并设立hMEC-GAHB对照组M2组,采用PI染色法检测细胞周期,免疫细胞荧光法(IFCC)、MTT法和Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒检测各组细胞增殖和凋亡情况,同时采用蛋白质印迹法(western blot)和real-time RT-PCR技术对干预后hMEC-GAHBERa的蛋白表达变化和ERαmRNA的扩增变化进行定性和定量分析。 结果干预后,镜下见hMEC-GAHB小部分细胞的细胞核固缩、碎裂,凋亡小体及微核出现。随时间的变化,hMEC-GAHB干预组M1组的群体倍增率(PDR)明显下降,凋亡细胞数增多,其细胞凋亡率介于正常乳腺上皮细胞株和乳腺癌上皮细胞株之间。G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例上升,细胞周期阻滞在G0/G1期。ERa蛋白表达减少,ERαmRNA扩增倍数减小,基因表达下调。而hMEC-GAHB对照组M2组ERa的蛋白表达值和ERαmRNA基因扩增倍数增加。 结论他莫昔芬能阻断雌激素对ERa+细胞的激动作用,诱导ERα+细胞凋亡,明显抑制肥大乳房乳腺上皮细胞的生长增殖,减少细胞内ERa的表达,下调ERamRNA的基因表达,且诱导凋亡作用呈现时间依赖性。而对ERa-细胞无明显影响。由此推测他莫昔芬可竞争性拮抗雌激素与ERa的结合,其诱导凋亡靶细胞主要为ERα+乳腺上皮细胞,其机制可能是通过对ERa基因水平的调控发挥作用。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R737.9

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陶谦;SV40与细胞永生性转化[J];癌症;2001年03期
2 黄自明,张林,袁惠玲,冯永东,陶德定,吴亚群;他莫昔芬诱导体内外雌激素受体阳性乳腺癌细胞凋亡的周期特异性研究[J];中国医师杂志;2005年04期
3 叶媚娜;陈红风;;正常人乳腺上皮细胞的原代培养[J];基础医学与临床;2007年01期
4 袁霞,马丽;他莫昔芬在雌激素受体阳性人乳腺癌细胞中的抗氧化活性的实验研究[J];锦州医学院学报;2005年04期
5 秦映芬,沈寒蕾,黄松,韦敏怡;巨乳症的临床与病理学观察[J];临床与实验病理学杂志;2004年03期
6 安胜军,张永祥;雌激素受体亚型及其配体调节基因转录机制的研究[J];生理科学进展;2002年04期
7 程龙;黄翠芬;叶棋浓;;乳腺癌中雌激素受体α表达水平调节的分子机制[J];遗传;2010年03期
8 贵春山,沈建华,罗小民,朱维良,沈旭,蒋华良;雌激素受体和选择性雌激素受体调节剂的研究进展[J];中国药物化学杂志;2005年05期
9 乔群;凌诒淳;周刚;岑波;宋儒耀;;中国125名青年女性乳房体积测量[J];中华整形烧伤外科杂志;1991年01期
10 孙家明,乔群,戚可名;肥大乳房和小乳房乳腺组织中雌激素受体的表达[J];中华整形外科杂志;2004年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱启星;马泰;涂登云;沈彤;丁锐;;银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞NO合成的影响[J];癌变.畸变.突变;2006年06期
2 刘家仁,庞永珣,张尤恩,范春,王贤珍,朱振岗;用细胞转化实验检测S江有机污染致癌危险性[J];癌变.畸变.突变;1999年04期
3 胡秀彩;吕爱军;陈宏;;产色素温和气单胞菌的特性及其外膜蛋白型研究[J];安徽农业科学;2008年08期
4 李春香;;尖海龙提取物对淋巴细胞的作用[J];安徽农业科学;2009年03期
5 吴娟;王凤龙;王申元;;奶牛乳腺上皮细胞的原代培养[J];安徽农业科学;2009年06期
6 朱祖俊;2167例乳腺肿块的临床病理分析[J];安徽医学;2005年04期
7 丁锐,童钟,沈宁;乳腺癌的诊治体会[J];安徽医学;2005年05期
8 王同;梅晓冬;徐晓玲;包明红;李秀;李庆;;多药耐药细胞系A_(549)/ADM的建立及部分特性[J];安徽医学;2006年01期
9 汪雁;朱唯力;潘勇;林渊;孙健宇;;乳腺叶状肿瘤的诊治与预后:附1例巨大叶状肿瘤报道[J];安徽医药;2009年05期
10 范国昌,吴祖泽,王艳飞,吴世凯,邱兆华;重组腺病毒介导入野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响[J];癌症;2000年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘俊;赵荣祥;丛品;洪钱江;;哺乳动物内耳再生毛细胞前体细胞来源的研究[A];中华中医药学会耳鼻喉科分会第15届学术交流会论文集[C];2009年
2 冯婷;涂文伟;黄娟;李晋蓉;殷仲伟;范营营;李虹;;流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
3 黄婉文;杨海燕;;浅谈乳腺纤维腺瘤术后药物干预性治疗的思路[A];第十二次全国中医、中西医结合乳房病学术会议论文集[C];2011年
4 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
5 邵志敏;;乳腺癌的规范化治疗[A];山东抗癌协会普外肿瘤专业委员会第三次学术会议论文汇编[C];2006年
6 吕洛;应康;魏少敏;林惠芬;马来记;毛裕民;;积雪草甙对真皮成纤维细胞胶原合成的诱导作用[A];2004年中国化妆品学术研讨会论文集[C];2004年
7 安立龙;效梅;张土保;董喜芳;许英梅;;不同浓度犊牛血清对三黄鸡原始生殖细胞生长、增殖的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第七届全国代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
8 田甜;李键;毕琳;梁天宇;王中乾;;激素和生长因子对牦牛乳腺上皮细胞生长的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会论文集[C];2009年
9 李广君;王树迎;王慧;侯衍猛;黄丽波;;济宁青山羊发情周期不同阶段LHR在输卵管中的分布及其mRNA表达[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
10 杨志辉;崔晓东;张智慧;;济南国棉一厂女工乳腺病调查[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年
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1 鲁志波;医学图像增强与插值的算法研究[D];解放军信息工程大学;2007年
2 莫雪安;同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠模型的实验研究[D];广西医科大学;2011年
3 王金霞;大型海藻微球体的生物反应器培养和应用基础研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
4 聂刚;乳腺癌分子亚型的相关研究:临床特点,危险因素及生存分析[D];吉林大学;2011年
5 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年
6 孟步亮;BDNF转基因成纤维细胞移植促进脊髓可塑性的分子信号通路研究[D];昆明医学院;2011年
7 韦霄;饮用水中碘乙酸和碘仿的检测识别、遗传毒性和潜在致癌性研究[D];复旦大学;2011年
8 朱杰昌;阻断CD40/CD40L共刺激通路联合FTY720在小鼠心脏移植中的抗排斥反应作用研究[D];天津医科大学;2009年
9 孙杰;奶山羊乳腺消减文库构建及差异表达基因的研究[D];石河子大学;2009年
10 张德福;猪体细胞核移植及其相关技术研究[D];南京农业大学;2008年
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1 高莉莉;NP方案在术后乳腺癌应用模型的探讨[D];南京医科大学;2009年
2 周凡;中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用的研究[D];安徽农业大学;2010年
3 曲歌;乳宁汤对乳腺癌患者术后化疗增效减毒作用的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 敏云馨;藏獒三种组织成纤维细胞系的构建及生物学研究[D];西北民族大学;2010年
5 阮小华;合作猪肾成纤维细胞系的构建及生物学鉴定[D];西北民族大学;2010年
6 王同;GRIM-19抑制肺腺癌细胞株SPC-A1生长及作用机制体内外实验研究[D];安徽医科大学;2010年
7 郑杜香;乳头溢液的中医辨证与乳管内窥镜下表现、细胞学改变相关性研究[D];山东中医药大学;2010年
8 谭乘方;选择性雌激素受体调节剂的筛选及其活性评价[D];华东理工大学;2011年
9 杜刚;乳管镜在乳头溢液疾病早期诊断的研究[D];山东大学;2010年
10 邢亚峰;填精补肾方预防三阴性乳腺癌术后复发转移的临床研究[D];成都中医药大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 杨梅英,叶常青,刘雷华;SV40T介导的人胎儿永生化气管成纤维细胞系的建立[J];癌变.畸变.突变;1999年01期
2 胡伯年,车张云,李忠鳞,董传昌,黄黎明,高原,傅燕萍,叶春辉,王伟;乳腺增生症针穿细胞雌激素受体和孕激素受体测定及三苯氧胺治疗的研究[J];医师进修杂志;1994年11期
3 乔群;凌诒淳;周刚;岑波;宋儒耀;;中国125名青年女性乳房体积测量[J];中华整形烧伤外科杂志;1991年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐则乔,徐卓群,仇学文,胡强,王志荣,阮钧,诸明;腺性膀胱炎30例诊断与治疗[J];中国现代医药杂志;2004年06期
2 沈文琪;腺性膀胱炎的膀胱镜下表现[J];中华消化内镜杂志;1994年06期
3 历金吉,林桂亭,赵明军;腺性膀胱炎6例报告[J];潍坊医学院学报;1996年02期
4 王中琨,邵国兴,石峻,宋海燕;窥镜下Nd-YAG激光治疗腺性膀胱炎9例[J];第四军医大学学报;1997年05期
5 廖继强,侯建平;丝裂霉素治疗腺性膀胱炎12例[J];山西医药杂志;2000年03期
6 丁华野,皋岚湘;囊-腺性膀胱炎的病理学诊断及鉴别诊断[J];中华病理学杂志;2001年06期
7 杨占斌,陈坚,莫曾南,黄伟华,白先忠,李盛宽;腺性膀胱炎50例临床分析[J];广西医科大学学报;2001年02期
8 吴慧玲,杜小文;腺性膀胱炎56例分析[J];浙江临床医学;2002年09期
9 陈光;腺性膀胱炎32例报告[J];广西医学;2003年06期
10 祖雄兵,齐范,齐琳;腺性膀胱炎的诊断与治疗[J];中国现代医学杂志;2003年08期
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1 周春华;陈小艳;刘玖玲;;女性腺性膀胱炎的护理[A];21世纪男科学——中华医学会第五次全国男科学学术会议论文集[C];2004年
2 冯蕾;;二维超声对腺性膀胱炎的诊断及鉴别诊断[A];中国医学影像技术学术研讨会论文集(下)[C];2004年
3 王宏伟;;乳腺错构瘤2例分析[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年
4 谢佩芬;;MSA統計方法於量測系統評估之應用[A];第五届海峡两岸计量与质量学术研讨会论文集[C];2004年
5 林永雅;黄良平;;解析度与灵敏度增强之核磁共振光谱[A];第八届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];1994年
6 陳振華;陳若華;;斜张桥风力作用下之非腺性动力分析[A];第十四届全国结构风工程学术会议论文集(中册)[C];2009年
7 邢金春;陈斌;王惠强;刘荣福;李伟;;NBI电子膀胱镜在膀胱肿瘤早期诊断和复发检测中的初步应用[A];第十六届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2009年
8 方雷;陈伟基;;倒立擺系统控制方法概述[A];1998年中国智能自动化学术会议论文集(上册)[C];1998年
9 陳彥良;张國明;劉惠中;;位移探頭校正系統之研究[A];第五届海峡两岸计量与质量学术研讨会论文集[C];2004年
10 钟羽翔;张少林;陈伯川;陈永华;白亮;黄剑华;;经尿道等离子体双极电切术治疗良性膀胱疾病49例报告[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年
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1 健康时报记者  郑帆影;腺性肠息肉易癌变[N];健康时报;2006年
2 钱虹;前列腺疾病 不只是男性的“专利”[N];中国人口报;2006年
3 北京朝阳医院西院泌尿外科医学博士 朱绪辉;女性也有“前列腺”[N];保健时报;2006年
4 储水鑫;苦参的临床应用[N];中国中医药报;2006年
5 林中;偎脓养肉辨[N];中国医药报;2002年
6 赵永春;女性也有“前列腺”[N];中国中医药报;2007年
7 ;营造先进文化培育“名牌”员工[N];中国铁道建筑报;2003年
8 张清泉 陈礼军;营造先进文化氛围 培育“名牌”员工队伍[N];工人日报;2002年
9 唐时奎;儿童肿瘤 白血病居首[N];健康报;2002年
10 张永琇;前列腺结构研究新进展[N];中国医药报;2000年
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1 肖芃;腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养及其增殖与凋亡的相关研究[D];华中科技大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 胡波勇;腺性膀胱炎临床诊治的报告[D];武汉大学;2004年
2 楼国光;P53、Bc1-2在腺性膀胱炎与膀胱癌中表达意义的研究[D];浙江大学;2001年
3 文前军;腺性膀胱炎54例临床病例分析[D];第三军医大学;2002年
4 邵继宏;P1GF在卵巢良恶性浆液性囊腺瘤中血管新生机制的初步探讨[D];大连医科大学;2006年
5 杜涌瑞;促腺性激素及细胞因子在卵巢癌发展中的作用[D];天津医科大学;2004年
6 陈文轩;细胞角蛋白20mRNA与核基质蛋白22在尿路上皮癌检测中的应用[D];天津医科大学;2003年
7 杨艳清;雌激素硫酸转移酶在肥大乳房乳腺组织中的表达及意义[D];华中科技大学;2010年
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