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《华中科技大学》 2011年
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复方金刚藤胶囊的临床前研究

叶茂  
【摘要】:盆腔炎性疾病后遗症(sequelae of pelvic inflammatory disease, SPID),也称为慢性盆腔炎,是妇产科的常见病,具有病程长、病情顽固、难愈、复发率高的特点,严重影响患者的生活质量。治疗该病的化学药物主要是各类抗生素,这些抗生素对于SPID的盆腔脏器组织破坏、充血水肿、广泛粘连、增生及瘢痕等一系列症状的改善作用不明显。近年来,中医药在防治慢性盆腔炎方面取得了很大的进展,临床效果显著。 金刚藤胶囊(Jingangteng Capsule, JC)是中华中医药学会和中华医学会妇科分会推荐的治疗SPID的首选用药。具有清热解毒,化湿消肿的功能。用于治疗湿热下注所致的带下量多、黄稠,经期腹痛,盆腔炎症或炎性包块见上述证候者,临床疗效肯定。但是,在长期的临床使用中,发现其在治疗患者久病体虚、疼痛症状方面功效较弱。因此,为完善其适应症,创制更适合于治疗SPID复杂病情的新药,本课题开展了从中医处方筛选、制备工艺路线选择、质量评价体系的建立,到药效学评价和作用机制探讨的系统研究。开发出了一个有效物质明确、作用机理清楚、安全有效、质量稳定可控的创新中药复方制剂—复方金刚藤胶囊(Compound Prescription Jingangteng Capsule, CPJC)。 第一部分CPJC的中医处方筛选 处方组成选择:为完善JC的适应症,必须选择适合的中药,与菝葜配伍应用,开发成复方。本研究首先在中医药理论指导下,根据“理法方药”组方规律,以及中成药精炼中医处方的实际需求,在固定君药(菝葜90g)为基本组成的前提下,通过正交试验,采用与本病证相关的药理指标,对临床上常与菝葜配伍的中药醋延胡索、丹参、黄芪、白芍等进行了筛选。发现四药对抗炎作用(抗足肿胀、抗肉芽肿)的影响顺序从大到小依次为:白芍黄芪醋延胡索丹参和白芍醋延胡索黄芪丹参,四药对镇痛作用的影响顺序从大到小依次为:醋延胡索白芍黄芪丹参。四药对免疫增强作用的影响顺序从大到小依次为:醋延胡索黄芪白芍丹参。由于白芍和黄芪在本方中的功效是以扶正补虚为主,因此新处方挑选醋延胡索和黄芪协同菝葜的作用。 处方验证:对新复方的抗炎、免疫、镇痛效果进行了验证,证明其镇痛和免疫增强作用均明显强于JC(P0.01);对新复方治疗SPID的临床疗效进行了验证,证明其临床疗效肯定,总有效率为83%,比JC更有利于治疗SPID。最终确定复方金刚藤处方为菝葜90g,醋延胡索20g,黄芪20g。 第二部分CPJC原料药制备工艺研究 在确定了中医处方后,为将其开发成中成药,本研究分别采用正交和单因素试验,结合化学成分转移率和药效两套评价体系,开展了提取物原料药的制备工艺研究,包括提取、纯化、干燥工艺。经反复实验室和中试放大验证,确定出的制备路线为:三药分别提取、纯化、干燥。 菝葜提取物的制备:取菝葜饮片,用60%乙醇回流提取2次,合并滤液,减压浓缩至无醇味(相对密度1.00-1.01,70℃测),再过滤,加蒸馏水制备成浓度为0.2g/mL的溶液,上AB-8大孔吸附树脂柱(树脂:药材=1:1.8,径高比1:6),静置2-3h,用蒸馏水洗脱5-6柱体积(bed volume, BV),再用20%乙醇淋洗6BV,最后用70%乙醇洗脱3-4BV,收集70%乙醇洗脱液,减压浓缩至药液密度1.08-1.10(70℃测),喷雾干燥,即得。 醋延胡索提取物的制备:取醋延胡索饮片,用60%乙醇回流提取2次,合并滤液,减压浓缩至无醇味(相对密度1.25,70℃测),再过滤,加蒸馏水制备成浓度为0.4g/mL的溶液,上AB-8大孔吸附树脂柱(树脂:药材=1:4,径高比1:6),静置2-3h,用蒸馏水洗脱2-3BV,再用10%乙醇淋洗2BV,最后用70%乙醇洗脱4.5-5BV,收集70%乙醇洗脱液,浓缩至药液密度1.003-1.015(70℃测),添加5%(g/mL)糊精,喷雾干燥,即得。 黄芪提取物的制备:取黄芪饮片,用蒸馏水加热提取2次,合并滤液,减压浓缩至浓度略大于0.2g/mL(相对密度1.005,70℃测),再过滤,加蒸馏水制备成浓度为0.2g/mL的溶液。上AB-8大孔吸附树脂柱(干树脂:药材=1:1.6,径高比1:6),静置2-3h,用蒸馏水洗脱4.5-5BV,再用70%乙醇洗脱3.5-4BV,收集70%乙醇洗脱液,减压浓缩至药液密度1.08-1.10(70℃测),喷雾干燥,即得。 第三部分CPJC制剂工艺研究 提取物原料药用量的配比:采用均匀设计实验,对菝葜、醋延胡索、黄芪提取物的不同配比进行了多效应的药效学比较研究,结果表明提取物用量按投料药材算,在均匀设计回归方程提示的“组方最佳配比范围”内,即与中医处方(菝葜90g,醋延胡索20g,黄芪20g)用量一致。确定提取物(中试产品,批号100301)的日服用剂量为菝葜2.7g,黄芪0.438g,醋延胡索0.1814g。这个结果再一次验证了中医处方用量的合理性,也验证了整个原料药处理工艺的科学性。 制剂成型工艺研究:根据原料药用量和性质,以及临床用药需要,确定剂型为胶囊剂。采用单因素实验筛选辅料的种类与用量,优化干法制粒工艺参数。经反复实验室和中试放大验证,确定出制备路线为:取按一定量混合的提取物(制剂处方量的62%),与适量MCC(22%)、CaC03(5%).SiO2(1%)、CMS-Na(3%)混匀,1.5 MPa压力下干法制粒,再加入适量CCMC-Na(5%)和SiO2(2%),混匀,装入胶囊,即得。 第四部分CPJC质量标准研究 对复方金刚藤胶囊中试产品进行了质量控制。采用薄层色谱法对制剂中菝葜和黄芪进行定性鉴别,结果斑点均清晰可见,阴性无干扰,易于判别;采用HPLC法对处方中的白藜芦醇含量进行了检测,暂定本品每粒含白藜芦醇不得少于1.96mg。同时对含量测定方法进行了方法学验证,结果显示,试验所采用的方法专属性强、简便准确。依据《中国药典》(2010版一部附录I L)胶囊剂通则对装量差异、崩解时限、水分、微生物限度进行了检查,结果均符合规定。用顶空进样气相色谱法对CPJC中树脂有机残留物进行了检测,样品中未检出正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯和二乙烯基苯等残留物,参照2007年国家食品药品监督管理局药品审评中心发布的“大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技术要求(试行)”制定本品的残留物限度。 第五部分CPJC主要药效学与作用机理研究 主要药效学研究:发现CPJC在0.630、1.260g/kg剂量(临床等效剂量的1、2倍)下能显著改善大鼠SPID病变(P0.05)。主要表现在抑制子宫肿胀、盆腔粘连和腔壁组织结构病变。CPJC在0.315、0.630、1.260g/kg剂量(临床等效剂量的0.5、1、2倍)下可抑制由致炎物质引起的大鼠足肿胀(P0.05或P0.01);在0.450、0.900、1.800g/kg剂量(临床等效剂量的0.5、1、2倍)下可抑制由致炎物质引起的小鼠耳肿胀(P0.05),证明其对抗炎症早期的作用;在0.450、0.900、1.800g/kg剂量(临床等效剂量的0.5、1、2倍)下可减少白细胞向炎症部位迁移(P0.05或P0.01),证明其对抗炎症中期的作用;在1.260g/kg剂量(临床等效剂量的2倍)下可抑制肉芽组织增生(P0.05),证明其对抗炎症后期的作用。其抗炎作用在同等剂量下,比JC更有优势。CPJC在0.900、1.800g/kg剂量(临床等效剂量的1、2倍)下,有显著的镇痛作用(P0.01或P0.05),并显著优于JC(P0.01),因此CPJC对临床上缓解SPID炎症疼痛具有治疗价值。在0.450、0.900、1.800g/kg剂量(临床等效剂量的0.5、1、2倍)下,能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞(macrophages, M)吞噬指数(P0.01或P0.05),并显著优于JC(P0.01或P0.05),证明CPJC具有免疫增强作用。因此本品在临床上治疗SPID能起到标本兼治的效果。 机理研究:在了解了CPJC的药效学活性的基础上,对其可能的作用机理进行了初步探究。NF-κB信号转导途径是一条重要的炎性细胞信号转导途径。本研究表明,CPJC能显著降低大鼠血清中TNF-a和IL-1β水平,抑制大鼠子宫组织NF-κB的活性(包括蛋白和核酸水平),减少下游因子COX-2和iNOS的释放。可见,CPJC可能是通过抑制NF-κB的过度活化,下调多种促炎介质的表达,降低炎症病理损害,从而发挥治疗作用。 第六部分综述 本部分对组成CPJC的三味中药的化学成分、药理作用及质量控制的研究进展进行了概述。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R286

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4 谭华;黄芪总苷和三七总皂苷配伍对脑缺血再灌注后早期损伤相关因素影响的研究[D];湖南中医药大学;2010年
5 韩佳;黄芪总苷对实验性糖尿病动物心肌的保护作用及机理研究[D];安徽医科大学;2012年
6 张建飞;黄芪对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中STAT-1及ICAM-1蛋白表达的影响[D];山西医科大学;2012年
7 胡敏;日本血吸虫可溶性虫卵抗原体外诱导巨噬细胞分泌TNF-α活化肝星状细胞及黄芪总苷对其影响[D];安徽医科大学;2007年
8 张岩平;小鼠血吸虫病肝组织中内皮细胞特异性分子-1的表达及黄芪总苷对其影响[D];安徽医科大学;2008年
9 陈根林;芍芪多苷的解热镇痛作用[D];安徽医科大学;2008年
10 李菁菁;等效剂量的不同升压药物对于剖宫产术母体和胎儿的影响[D];吉林大学;2010年
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