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抑制趋化因子受体CCR5保护小鼠及灵长类动物同种异体移植心脏的实验研究

李军  
【摘要】:第一部分CCR5单克隆抗体延长小鼠异位移植心脏存活时间的研究 目的:研究抑制趋化因子受体CCR5对小鼠异位移植心脏的保护作用。 方法:近交系BALB/c小鼠做为供体,近交系C57小鼠做为受体建立小鼠腹部异位心脏移植模型,将其随机分为4组:CCR5 mAb+环孢素组(16只),CCR5 mAb组(8只),环孢素组(8只),空白对照组(8只)。联合治疗组于术后第18天处死8只小鼠,取出异位心脏,其他小鼠于异位移植心脏功能丧失时取出心脏。流式细胞术检测各组异位移植心脏内Treg细胞水平;实时荧光定量法检测各组异位移植心脏内Foxp3以及细胞因子IL-2、IL-10、TGF-β、INF-γmRNA的表达水平;免疫组化方法检测各组异位心脏内CCR5+、CD4+、CD8以及CD4+CD25+Foxp3+ T细胞的浸润情况;HE/EvG染色观察各组异位心脏急慢性排斥反应的程度。 结果:CCR5 mAb联合环孢素组可以明显延长异位移植物存活时间(90d,P0.001),减少移植物内CD4+和CD8+T细胞的数量(P0.005),增加CD4+CD25+Foxp3+ T细胞的比例(23.98±1.55%vs 6.30±0.57%,P0.005)。同时,CCR5 mAb联合环孢素组还可以降低移植物内IL-2,INF-γmRNA的水平,增加IL-10和Foxp3 mRNA的水平,TGF-βmRNA的水平在联合治疗组第18天明显升高,但在第90天又降至对照组水平。过继性输注Treg细胞可以明显延长移植物存活时间。 结论:CCR5 mAb联合环孢素可以有效的减轻急慢性排斥反应,保护异位移植心脏。 第二部分CCR5拮抗剂Maraviroc保护灵长类动物异位移植心脏的研究 目的:研究CCR5拮抗剂Maraviroc对灵长类动物异位移植心脏的保护作用 方法:建立灵长类动物恒河猴腹部异位心脏移植模型,将其随机分为4组:MVC+CsA组(MVC/CsA), MVC组,CsA组和对照组。MVC/CsA组分别于术后第9,30,45行直视下心内膜活检,并于第240天取出异位心脏。MVC组和CsA组于术后第9天行直视下心内膜活检,并于异位移植心脏功能丧失时取出心脏。利用组织化学的方法检测异位移植心脏内C3d, CCR5, CD4, CD8, CD68, Arg1, Mrc1 and PPARy的表达情况,同时应用流式细胞术检测不同时间点受体外周血T细胞亚类包括Thl, Th2, Th17 and Treg的表达情况。 结果:MVC/CsA组可以明显延长异位移植物存活时间至240天(P0.001)。同时MVC/CsA还可以延缓受体体内抗供体抗体的产生,减少移植物内CCR5+, CD4+, CD8+和CD68+细胞的数量(P0.005),减少Th1,Th17细胞的浸润,增加Th2, Treg细胞的聚集。另外MVC/CsA还可以增加受体外周血及异位心脏内AAM以及PPARy的表达。 结论:CCR5拮抗剂Maraviroc联合环孢素可以有效地抑制排斥反应,从而保护灵长类动物异位移植心脏。 第三部分MVC/CsA通过PPARγ信号通路激活AAM 目的:探讨MVC/CsA与AAM以及PPARγ之间的相互关系 方法:在体外淋巴细胞混合实验中,加入CCR5拮抗剂Maraviroc以及环孢素,观察AAM表面标志Argl和Mrc1 mRNA的表达情况,对照组除了加入MVC/CsA外,还加入特异性的PPARγ抑制剂BADGE,然后观察Argl和Mrc1 mRNA的表达情况。体内实验进一步观察PPARγ抑制剂BADGE对异位移植心脏内Arg1和Mrc1表达情况的影响。进而,我们通过体内淋巴细胞混合实验观察CCR5拮抗剂Maraviroc对Th2类细胞因子表达的影响,体外实验观察Th2类细胞因子IL-4和IL-13对PPARγ以及Arg1和Mrc1表达情况的影响。 结果:体外淋巴细胞混合实验及体内实验均证明MVC/CsA可以有效促进Arg1和Mrc1mRNA的表达,而应用PPARγ抑制剂BADGE后,Arg1和Mrc1 mRNA的表达水平也受到明显的抑制。另外,MVC/CsA可以促进Th2类细胞因子IL-4和IL-13的释放,而IL-4和IL-13可以有效的促进PPARγ以及Arg1和Mrc1表达。 结论:MVC/CsA可以通过促进Th2类细胞因子IL-4和IL-13的释放,进而激活PPARγ,促进AAM的分化和成熟。


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