收藏本站
《华中科技大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

丙炔苯丙胺对MPP~+诱导的帕金森病PC12细胞模型的保护机制研究

肖海兵  
【摘要】:第一部分丙炔苯丙胺通过上调抗氧化蛋白NQ01表达保护1-甲基-4-苯基吡啶离子所致PC12细胞损伤 目的本部分研究旨在帕金森病(Parkinson's disease, PD)的PC12细胞模型中证实丙炔苯丙胺的神经保护作用,并对其保护机制进行初步探索。 方法应用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞制备PD的细胞模型。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)、细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量检测、活性氧蔟(ROS)含量检测、四唑氮蓝/甘氨酸盐法行醌结合蛋白检测、Western Blots等方法检测丙炔苯丙胺对MPP+所致PC12细胞损伤的保护作用,初步探索丙炔苯丙胺是否通过间接的抗氧化作用发挥细胞保护效应。 结果MTT法和LDH释放量检测均显示,不同浓度丙炔苯丙胺预处理可以显著减轻MPP+导致的PC12细胞损伤。ROS含量测定以及四唑氮蓝/甘氨酸盐法醌蛋白浓度检测的结果显示,不同浓度丙炔苯丙胺预处理明显地逆转了MPP+导致的氧化应激标志物增高。Western blots检测细胞内辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达及二氯靛酚反应法测定NQO1活性的结果显示,不同浓度的丙炔苯丙胺可以导致该抗氧化蛋白的表达量和酶活性均呈现出剂量依赖式的增高。另外,LDH释放量检测结果显示,双香豆素抑制NQO1后,丙炔苯丙胺对细胞的保护作用被逆转了。 结论丙炔苯丙胺可以通过上调抗氧化蛋白NQO1的表达和活性,减少氧化应激损伤标志物的生成,发挥对MPP+所致的PC12细胞损伤的保护作用。 第二部分丙炔苯丙胺通过促进Nrf2核转位介导PC1 2细胞抗氧化蛋白NQ01表达和活性增高 目的验证丙炔苯丙胺是否通过促进核因子红系2相关因子2(Nrf2)核转位介导PC12细胞抗氧化蛋白NQO1表达和酶活性增高。 方法应用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒分别提取PC12细胞的胞浆胞核蛋白,再采用Western blots技术检测胞浆胞核中Nrf2的蛋白含量变化;采用Nrf2小分子干扰RNA (SiRNA)转染技术,进一步验证Nrf2在丙炔苯丙胺诱导NQO1酶活性上调过程中的作用。 结果Western blots结果表明,在MPP+的单独处理下,PC12细胞胞浆和胞核的Nrf2含量都出现了减少。而丙炔苯丙胺预处理可以有效地减少胞浆内的Nrf2含量,增加核内Nrf2的含量,且其胞浆内Nrf2的相对表达水平比MPP+单独处理时还要低,差异均有统计学意义。在转染了Nrf2 SiRNA的PC12细胞中,NQO1的活性出现了明显降低。另外,在Nrf2基因被沉默后,丙炔苯丙胺所导致的NQO1酶活性上调也消失了 结论丙炔苯丙胺所导致的抗氧化蛋白NQO1酶活性增强是通过促进Nrf2核转位,从而驱动NQO1转录增强这一途径完成的。 第三部分Akt和Erk信号通路在丙炔苯丙胺抗氧化应激介导的PC12细胞保护机制中的作用 目的本部分研究旨在探索丙炔苯丙胺促进Nrf2核转位的上游激酶调控通路,并观察丙炔苯丙胺对B型单胺氧化酶(MAOB)勺抑制作用是否也参与了Nrf2的激活过程。 方法应用Western Blots方法检测PC12细胞中Akt和细胞外信号调节激酶(Erk)等激酶的磷酸化水平变化,并应用各种激酶抑制剂处理PC12细胞观察各个激酶对Nrf2和NQO1的调控作用。另外,我们应用MAOB和Nrf2 SiRNA转染,来分析丙炔苯丙胺对MAOB抑制作用是否影响了Nrf2介导的抗氧化反应。 结果经过Western blots法检测,我们发现,丙炔苯丙胺处理PC12细胞可以诱导Akt和Erk的磷酸化水平呈时间依赖性增高。另外,丙炔苯丙胺介导的Nrf2核转位和NQO1表达增高被可以被PD98059部分阻断,而P13K的抑制剂LY294002几乎完全地取消了丙炔苯丙胺导致的Nrf2核转位和NQO1表达增高。对SiRNA转染的PC12细胞的ROS测定表明,MAOB基因沉默可以使ROS含量出现少量的下降,但并不影响丙炔苯丙胺的抗氧化活性。而且,无论MAOB基因沉默与否,Nrf2 SiRNA转染的PC12细胞清除ROS的能力都受到了显著损伤。 结论丙炔苯丙胺可以通过激活PI3K/Akt和Erk两条激酶通路,促进Nrf2核转位发挥抗氧化效应,实现对MPP+导致PC12细胞损伤的保护作用。这种机制与丙炔苯丙胺对MAOB的抑制作用是并行的。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R965

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 扈启宽;李美育;徐方;;利用RNA干扰技术抑制单胺氧化酶B基因的表达[J];宁夏医科大学学报;2009年02期
2 曹旭;孙圣刚;曹学兵;徐丽;;过氧化氢对多巴胺神经元的选择性损伤作用[J];卒中与神经疾病;2006年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李格;孙圣刚;;促红细胞生成素对MPP~+诱导的PC12细胞损伤的保护作用[J];神经损伤与功能重建;2008年02期
2 张丽慧;赵建波;;小胶质细胞激活在多巴胺神经元变性损伤中的作用[J];健康研究;2011年01期
3 蒋天放;陈生弟;;多巴胺转运蛋白在帕金森病诊断与治疗中的应用[J];神经病学与神经康复学杂志;2010年03期
4 束金莲;潘瑜;刘晓莉;高丰厚;金惠敏;;重组人促红细胞生成素对3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体表达及下游信号通路的影响[J];上海交通大学学报(医学版);2012年04期
5 ;Oxidative stress in neurodegenerative diseases[J];Neural Regeneration Research;2012年05期
6 陈妍;白洁;;糖原合酶激酶-3β与帕金森病的发生及治疗[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年12期
7 孔屏;帕金森病病因和发病机制研究进展[J];天津医科大学学报;2001年03期
8 关榆根;张建鹏;;JNK信号通路的激活在帕金森病发病机制中的作用[J];生物技术通讯;2012年06期
9 葛全兴;陈垦;龙友明;王晖;;EPO/EPOR及其信号转导机制研究进展[J];国际病理科学与临床杂志;2009年05期
10 张琪林;罗蔚锋;王恒会;叶艳;朱婷鸽;刘春风;;N-乙酰半胱氨酸拮抗6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用(英文)[J];中国组织工程研究;2012年06期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 钱霞;K-ATP通道与帕金森病的相关性研究[D];南京医科大学;2010年
2 王艳萍;阿司匹林诱生型脂氧素A_4对脂多糖诱导小胶质细胞炎症反应的影响[D];华中科技大学;2011年
3 肖海兵;丙炔苯丙胺对MPP~+诱导的帕金森病PC12细胞模型的保护机制研究[D];华中科技大学;2011年
4 王艳萍;阿司匹林诱生型脂氧素A_4对脂多糖诱导小胶质细胞炎症反应的影响[D];华中科技大学;2011年
5 王顺;头部电针透穴疗法治疗帕金森病的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2003年
6 宫萍;6-OHDA诱导大鼠帕金森病模型的差异蛋白质组学研究[D];吉林大学;2006年
7 史雪茹;Kir6.2基因敲除对MPTP所致C57BL/6J鼠神经毒性的影响[D];南京医科大学;2008年
8 原相丽;PINK1基因突变与氧化应激、线粒体功能障碍在帕金森病发病机制中的作用研究[D];中南大学;2008年
9 徐俊杰;小分子人源抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶的研究[D];吉林大学;2009年
10 胡丹;鱼藤酮诱导α-突触核蛋白聚集及其机制的研究[D];华中科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 谢娟;开放Kir6.2-K_ATP通道对MPP~+所致中脑神经元损伤的保护作用及其机制研究[D];南京医科大学;2009年
2 李力;慢性心衰急性失代偿的分子机制与治疗的分子基础[D];河北北方学院;2011年
3 罗常月;重组人促红细胞生成素(rhEPO)对帕金森病大鼠模型小胶质细胞活化及炎症因子表达的影响[D];郑州大学;2011年
4 陶丽珍;二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡[D];第四军医大学;2011年
5 严通海;核蛋白SET丝氨酸9位点模拟磷酸化对PP2A的抑制作用[D];华中科技大学;2011年
6 贾敏;丁基苯酞对鱼藤酮帕金森病模型保护作用的实验研究[D];华中科技大学;2011年
7 姚晓艳;促红细胞生成素对神经血管单元缺血缺氧损伤后的血管新生和神经保护作用研究[D];华中科技大学;2011年
8 柯国秀;自噬的增龄性改变与Rotenone致大鼠DA能神经毒性的关系[D];苏州大学;2008年
9 徐丽;人参皂甙Rg1对去卵巢帕金森病模型大鼠黑质纹状体系统的保护作用及其机制探讨[D];青岛大学;2007年
10 葛科立;人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt与ERK信号通路对抗6-OHDA的毒性作用[D];青岛大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 曹学兵,孙圣刚,吴秀枝,徐岩,杨卉;帕金森病大鼠黑质Nurrl mRNA表达的动态变化[J];卒中与神经疾病;2002年04期
2 曹学兵,孙圣刚,杨卉,徐岩,童萼塘;铁离子对黑质纹状体多巴胺神经元毒性作用的实验研究[J];卒中与神经疾病;2003年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈静,唐小卿,胡志苹,潘渊明,冯鉴强,钟女奇,余惠旻,陈培熹;姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的影响[J];中国药理学通报;2005年03期
2 季清洲,茹柄根;神经生长抑制因子在体外可抑制嗜铬细胞瘤株PC12[J];科学通报;2001年19期
3 魏东,万琪,孙文萍,李珂,张瑞国;缺血再灌注损伤中PC12细胞胞质Ca~(2+)浓度变化和NF-κB的表达[J];第四军医大学学报;2004年12期
4 胡建国,富赛里,李莹,徐晓明,陆佩华;GAP-43干扰RNA表达载体的构建与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年06期
5 康静琼,阮旭中,王开颜,王伟,张苏明,朱遂强;c-fos反义寡核苷酸对谷氨酸诱导PC12及海马神经元凋亡的影响[J];卒中与神经疾病;2001年04期
6 宁玉萍,李宝芹,谢安木,王玉凯,刘焯霖;parkin基因的表达与PC12细胞凋亡的关系[J];中华神经科杂志;2004年04期
7 王泽剑,陈红专,陆阳;人参炔醇对神经细胞的营养和保护作用[J];中国药学杂志;2005年14期
8 张磊;陈秋惠;常明;侯澍;李红杰;朴燕洁;胡林森;;蛋白酶体抑制剂诱导PC12细胞凋亡作用的研究[J];中国老年学杂志;2006年12期
9 李朝晖;王芬;刘水平;刘艳艳;竞花兰;;过氧化氢诱导PC12细胞损伤的模型的建立[J];法医学杂志;2007年03期
10 周进;罗晓光;张朝东;;Transwell培养体系中受损PC12细胞促进骨髓间质干细胞向神经元样细胞的转分化(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年37期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张世平;杜新刚;蒲小平;;3-0-去甲紫药双口山酮甙对MPP+致PC12细胞损伤的神经保护作用研究[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年
2 陈静;;姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用及其机制[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
3 宋超;姜宁;张勇;;不同自噬水平对MPP+诱导的PC12细胞PD模型中对抗氧化能力的影响[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年
4 张华;晏宁;代政伟;孟涛;晏勇;;胰岛素样生长因子-1对PC12细胞β-淀粉样前体蛋白裂解酶1的影响[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
5 张卫芳;胡长平;;Selaginellin保护高糖诱导的PC12细胞损伤和凋亡[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
6 王洪彬;王潇;王海龙;邓玉林;;PC12细胞重离子辐射生物学效应的比较蛋白质组学研究[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
7 ;Rosmarinic acid antagonized 1-methyl-4-phenylpyridinium(MPP~+)-induced neurotoxicity in MES23.5 dopaminergic cells[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
8 ;自噬改变在锰诱导的PC12细胞毒性中的作用[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
9 邹莉波;王力华;纪雪飞;杨柏珍;迟天燕;汪毅;魏末;;文冠果壳苷对同型半胱氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用研究[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
10 徐婉婷;曹兰芳;孔宪明;;自然杀伤细胞亚型在儿童MPP伴特应质患儿中的变化研究[A];中华医学会2011年全国变态反应学术会议论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 快乐时光;金秋巧购机[N];中国计算机报;2002年
2 ;Kingston[N];中国计算机报;2002年
3 邱邱;春天的盛会[N];电脑报;2002年
4 本期专家:阿龙 Bill;专家坐堂之硬件篇[N];电脑报;2003年
5 齐继成 编译;Amarin公司的Zelapar获FDA批准[N];医药经济报;2003年
6 罗玲;帕金森病的神经保护治疗研究[N];中国医药报;2004年
7 徐述湘;集思广益 谨慎前行[N];中国医药报;2004年
8 辛冰、孟繁修;山东:IT服务在练内功[N];中国计算机报;2002年
9 太极链 梁俊清;精挑细选话内存[N];中国计算机报;2000年
10 李友元;老年痴呆早期用药有疗效[N];大众卫生报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 肖海兵;丙炔苯丙胺对MPP~+诱导的帕金森病PC12细胞模型的保护机制研究[D];华中科技大学;2011年
2 肖海兵;丙炔苯丙胺对MPP~+诱导的帕金森病PC12细胞模型的保护机制研究[D];华中科技大学;2011年
3 黄金忠;PC12细胞中MPP~+诱导的α-synuclein聚集和自噬对其降解机制研究[D];苏州大学;2010年
4 莫镇涛;β-细辛醚对缺糖缺氧PC12细胞自噬的影响[D];广州中医药大学;2012年
5 刘炎;Grp75细胞保护效应的机制研究[D];复旦大学;2003年
6 郭丽萍;胰岛素可抵抗MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡及其机制研究[D];复旦大学;2004年
7 刘雯;grp75的表达调控及作用机制[D];复旦大学;2005年
8 刘莉;几种小分子对NGF诱导的PC12细胞轴突生长作用的研究[D];西北农林科技大学;2012年
9 侯澍;NGF诱导PC12细胞分化的蛋白质组学研究[D];吉林大学;2006年
10 刘国强;尾加压素Ⅱ在嗜铬细胞瘤发病机制中的作用[D];中国协和医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李晓峰;红景天苷通过抑制一氧化氮通路对抗MPP~+诱导的PC12细胞凋亡[D];第四军医大学;2010年
2 黄露麒;IGF-1对Mpp~+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制的研究[D];华中科技大学;2010年
3 徐先结;EGCG对MPP~+诱导的PC12细胞模型的抗氧化作用及其分子机理[D];福建医科大学;2011年
4 孙欣;二苯乙烯苷通过下调p38MAPK-p53通路保护MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡[D];第四军医大学;2010年
5 叶林峰;EGCG通过SIRT1/PGC-1α通路拮抗MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤[D];福建医科大学;2011年
6 李玉娟;ADMA对MPP~+损伤PC12细胞的拮抗作用及机制[D];南华大学;2010年
7 任衍开;硫化氢对甲醛损伤PC12细胞的保护作用及其机制[D];南华大学;2011年
8 仇海燕;Dok5促进GDNF诱导PC12-GFRa1-RET细胞分化[D];青岛大学;2004年
9 李晓冰;二苯乙烯苷通过调节ROS相关的JNK及线粒体通路减轻MPP+诱导的PC12细胞凋亡[D];第四军医大学;2010年
10 张建峰;睾丸酮对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡保护机制的研究[D];复旦大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026