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《华中科技大学》 2009年
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肿瘤细胞诱导巨噬细胞产生促瘤功能

章良  
【摘要】:目的:研究与肿瘤细胞相互作用的巨噬细胞肿瘤微环境中的免疫细胞(巨噬细胞)的功能转变,与肿瘤细胞共培养后,巨噬细胞由对肿瘤的杀伤作用转变为对肿瘤细胞增殖的促进作用。并且进一步研究使巨噬细胞产生此种变化的诱因以及相关的分子机制。 方法:1.将肿瘤细胞与巨噬细胞共培养一段时间(72小时),此为巨噬细胞与肿瘤细胞初次共培养,将此与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞与肿瘤细胞再次共培养,对照组为肿瘤细胞单独培养组以及新鲜分离的巨噬细胞与肿瘤细胞共培养组,运用细胞计数学方法和流式细胞术方法检测经过与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞(以下称为“与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞”)对肿瘤细胞增殖的影响。2.巨噬细胞与肿瘤细胞两室共培养,观察在巨噬细胞和肿瘤细胞不接触时与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞是否具有促进肿瘤细胞增殖的能力。3.用这种与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞和肿瘤细胞混合后,接种入小鼠腿部肌肉,对照组为肿瘤细胞单独接种小鼠肌腿部肉以及新鲜分离巨噬细胞与肿瘤细胞混合接种小鼠腿部肌肉,观察实验组与对照组之间在肿瘤形成中作用的不同。4.将这种与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞接种到肿瘤小鼠肿瘤内部,对照组为肿瘤内部接种新鲜分离的巨噬细胞,观察实验组与对照组肿瘤生长的差别。5.采用细胞培养方法,在培养过程中加入肿瘤细胞冻融上清,模拟肿瘤微环境,流式细胞术检测经肿瘤冻融上清刺激的巨噬细胞对肿瘤细胞增殖的影响以及巨噬细胞表面标志的变化。6.在巨噬细胞生长的不同阶段加入肿瘤细胞冻融上清处理,RT-PCR检测处理后巨噬细胞基因表达的变化。 结果:1.结果显示,体外培养时,与空白培养的肿瘤细胞和新鲜分离巨噬细胞与肿瘤细胞共培养组相比,与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞可明显促进H22肿瘤细胞的增长。并且这种情况在将巨噬细胞与肿瘤细胞两室培养时同样成立。2.体内试验中,与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞和肿瘤细胞混合后接种小鼠,小鼠肿瘤生长速度比单纯接种肿瘤细胞以及新鲜分离巨噬细胞与肿瘤细胞混合接种组小鼠快。3.在同样大小的瘤中,瘤内接种与肿瘤细胞共培养后的巨噬细胞亦可以促进肿瘤的生长。4.流式细胞术的结果显示,加入肿瘤细胞冻融上清培养的巨噬细胞具有促进肿瘤细胞的增殖能力。5.腹腔分离巨噬细胞在体外培养时其表面标志Gr1,CD11b,F4/80的表达发生变化。6.加入肿瘤细胞冻融上清培养后的巨噬细胞VEGF和PDGF表达量增高。 结论:免疫细胞如巨噬细胞在体内微环境中与肿瘤细胞相互作用后,其功能发生改变,变成一种肿瘤生长的促进因子,帮助肿瘤细胞在机体中免疫逃逸。这种变化时由于肿瘤细胞与巨噬细胞相互作用的过程肿瘤细胞中释放出的物质,作用于巨噬细胞,改变了巨噬细胞的表型,巨噬细胞通过释放VEGF、PDGF等因子促进肿瘤细胞的增殖。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R730.2

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