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《华中科技大学》 2009年
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前体蛋白加工酶类ADAM17及PC7与肿瘤生长相关性的初步探讨

冯晓丰  
【摘要】:ADAMs(Disintegrin metalloproteases, ADAM)是近年来发现的一类与细胞膜结合的基质金属蛋白酶,迄今文献报道已有4 0多种ADAM s,其大部分成员都含有金属蛋白酶结构域,可加工TNF-a,所有的EGFR配体(EGF,HB-EGF等),TNF受体I和II、ErbB2、ErbB4的受体,APP等大量蛋白,在细胞外基质的降解、细胞-细胞的黏连、细胞-基质的黏连、细胞融合及信号转导等细胞活动中具有重要作用。已有的初步研究,ADAM10、17是以跨膜前体蛋白的形式定位于质膜和Glogi体的反面(trans face)膜表面,它们的激活也需要上游金属转换酶的加工。有研究显示A D A M l 0、17在一些肿瘤和组织细胞中高表达,ADAM17在神经胶质瘤细胞中有促细胞增殖作用,因此有必要研究在其它肿瘤细胞中,它是否也能发挥促细胞增殖的作用。 在2008年自然杂志的一篇综述文章专门阐述了ADAM家族成员可能在肿瘤发生及转移过程中所发挥的“信号通路剪刀”的作用。而ADAM l 0,17便是其主要成员,它们可通过水解加工活化表皮生长因子,转化生长因子等一些膜蛋白的胞外区,进而可能有促进肿瘤细胞增殖的作用。 真核细胞中许多具有生物活性的多肽和蛋白前体在分泌过程中需被加工激活成为成熟型的蛋白才能发挥作用。上游前体蛋白转化酶PCs(proprotein convertase)是胞浆内存在的一类具有加工功能的酶,其成员包括Furin,PC1/3, PC2, PC4, PC7/8/LPC, PACE, PC5/6等。其靶分子包括众多生长因子的受体如TGF-βR,体肝细胞生长因子HB-EGFR,PDGFR-A,PDGFR-B,胰岛素样生长因子受体等;降解ECM的酶MMP,MT-MMPs等及解整合素金属蛋白酶ADAMs,TADAMS等。 另外有研究表明Furin,PC7对ADAM10有加工作用,PC7能识别ADAM10的RKKR位点,释放N-端前肽序列,促使其前体成熟,故PC7可看作ADAM10的主要激活酶。因此,我们推测Furin,PC7可能通过对VEGF-C,IGF-I等蛋白加工的直接途径或通过对ADAM10,17加工的间接途径在肿瘤发生发展过程中发挥作用。目前已在乳腺癌,卵巢癌(9)等肿瘤组织中检测到ADAM10,17, PC7的高表达,但它在各种肿瘤发生及转移过程中是否发挥作用及如何发挥作用,都有待进一步研究。 因此我们拟探讨ADAM17及PC7与肿瘤细胞生长之间的关系,通过构建大鼠PC7的真核表达载体及利用已构建的ADAM17真核表达载体,瞬时转染对数生长期的肿瘤细胞;采用Western blotting检测ADAM17及PC7蛋白水平在肿瘤细胞中的表达情况; MTT法和FACS检测观察转染后对细胞生长的影响;RT-PCR检测PC7和ADAM10在基因水平上的表达。 酶切和基因测序结果证实含PC7目的基因的质粒构建成功;RT-PCR结果表PC7在mRNA水平上有表达;Western blotting显示转染细胞后ADAM17, PC7得到表达;但PC7在mRNA水平对ADAM10的表达影响不大;MTT和FACS检测结果说ADAM17对Hela细胞生长有促进作用, PC7可能对MCF-7和Hela细胞生长的没有影响。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R730.2

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【共引文献】
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