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《华中科技大学》 2010年
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雷帕霉素抑制人骨肉瘤MG-63细胞周期及Cyclin D1表达的实验研究

高翔  
【摘要】:目的:观察雷帕霉素对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖、周期及Cyclin D1基因表达的影响,探讨雷帕霉素抑制骨肉瘤细胞周期的可能机制。 方法:体外培养人骨肉瘤MG-63细胞,用不同浓度的雷帕霉素(1nmol/L、10nmol/L、25nmol/L)干预MG-63细胞。采用CCK-8试剂盒,运用水溶性四唑盐WST-8比色法检测各实验组MG-63细胞增殖的变化,计算细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测MG-63细胞周期;RT-PCR及免疫细胞化学SABC法检测MG-63细胞Cyclin D1基因表达的变化。结果: CCK-8检测结果显示雷帕霉素能显著抑制MG-63细胞增殖,呈时间依赖性, 药物作用时间越长,细胞增殖抑制率越高,差别有显著性意义(P 0.05),但各浓度雷帕霉素组间细胞增殖抑制率差异无显著性意义(P 0.05);流式细胞分析结果显示雷帕霉素能显著抑制细胞周期,各浓度雷帕霉素组与对照组相比G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,差别有显著性意义(P 0.05);RT-PCR检测显示各浓度雷帕霉素组与对照组相比MG-63细胞Cyclin D1 mRNA的表达差异无显著性意义(P 0.05),雷帕霉素对MG-63细胞Cyclin D1 mRNA表达无明显影响;免疫细胞化学分析结果显示雷帕霉素能显著抑制Cyclin D1蛋白的表达,呈浓度依赖性,差别有显著性意义(P 0.05)。 结论:雷帕霉素能显著抑制MG-63细胞增殖及细胞周期,下调MG-63细胞Cyclin D1蛋白的表达,但对MG-63细胞Cyclin D1 mRNA的表达无明显影响。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R738

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