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黄芪对压力致兔纤维环细胞损伤的保护作用

黄吉军  
【摘要】:目的:①比较持续气压静压力与白介素-1β(IL-1β)诱导藻酸盐凝胶培养兔纤维环细胞损伤模型的效果。②探讨黄芪对压力损伤的兔纤维环细胞增殖、凋亡及细胞质骨架微丝结构的影响。 方法:构建体外兔纤维环细胞凝胶三维培养模型,①将其分入5组:A组(设为空白对照组),B组(IL-1β10ng·mL-1,干预24h),C组(IL-1β10 ng·mL-1,干预48h),D组(1Mpa气压静压力,持续24h),E组(1Mpa气压静压力,持续48h)。CCK-8法及Annexin V-PI染色检测细胞增殖及凋亡情况;RT-PCR法检测I、II型胶原、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达情况。②将细胞分为5组,以1Mpa持续气压静压力诱导纤维环细胞损伤,在培养基内分别加入10、50、100、500、1000μg·mL-1的黄芪注射液。培养48h后CCK-8法检测细胞增殖情况,Annexin V-PI染色检测细胞凋亡情况;同时将细胞在无压力损伤条件下,平面培养24小时,绿色微丝荧光探针显示细胞质微丝的结构。 结果:持续压力与IL-1β诱导纤维环细胞损伤模型比较:①两种方法均能使纤维环细胞增殖减缓及凋亡增加,在D、E两组中这种作用更为明显;②RT-PCR结果显示,两种方法均使得I、II型胶原表达减弱,其中E组较A组II型胶原表达下降大约75%(p0.01),最为显著;随着干预时间的延长,两种方法均使MMP-3的表达增强;两种损伤模型中,TIMP-1表达在干预24h后均出现降低,而干预48h后又有所回升。黄芪对压力致损伤的纤维环细胞作用:①CCK-8显示,上述各浓度的黄芪注射液能促进纤维环细胞的增殖,其中50μg·mL~(-1)黄芪注射液的作用最显著(与空白对照相比p0.01)②Annexin V-PI染色显示,50μg·mL-1黄芪注射液降低纤维环细胞凋亡率的作用最为显著(与空白对照相比p0.01),但当浓度增加至1000μg·mL~(-1)时,凋亡率虽较空白对照有所降低,但没有统计学意义(p0.05)。③微丝荧光染色显示,黄芪注射液能减轻压力对纤维环细胞微丝网络结构的破坏,在损伤因素祛除的条件下,纤维环细胞显示较强的恢复能力。 结论:①体外持续气压静态压力能诱发与IL-1β干预相似的兔纤维环细胞的损伤,可逐步发展为构建体外纤维环细胞损伤模型的常规方法。②黄芪对损伤的纤维环细胞有促进增殖和抑制凋亡作用,其对凋亡的抑制作用可能通过保护微丝网络结构途径,因而具备用于纤维环细胞保护的潜力。


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