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《华中科技大学》 2011年
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GSK-3β稳定错配修复蛋白PMS2抑制卵巢癌的探索

韩方  
【摘要】:目的 检测PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中的表达与相互关系及意义。 方法 1.实时荧光定量PCR法检测PMS2和GSK-3βmRNA水平在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞及正常卵巢组织中的表达。 2. Western blot免疫印迹法检测PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白水平在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞中的表达。 3.免疫组化双染法检测卵巢组织中PMS2和p-GSK-3β的表达。 4.分析PMS2与GSK-3βmRNA水平的相关性和PMS2与GSK-3β磷酸化水平(p-GSK-3β/GSK-3β)的相关性。 5. MTT法检测LiCl阻断GSK-3β活性后,细胞增殖的改变。 结果 1. PMS2 mRNA在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞的表达相对量分别为正常卵巢组织的74.59±41.376,1.85±0.369,50.16±30.316,1.65±0.901,3.04±0.887倍;GSK-3βmRNA在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞的表达相对量分别为正常卵巢组织的54.27±32.137,0.47±0.010,92.04±30.316,17.44±2.621,5.08±0.256倍。 2. PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中均有表达。 3. PMS2和GSK-3βmRNA在人卵巢癌细胞株和正常卵巢组织中的表达呈正相关性,R=0.853,P0.001;PMS2与p-GSK-3β呈负相关,R=-0.402, P0.001。 4.不同浓度的LiCl作用于卵巢癌细胞株后,细胞增殖被抑制,且抑制率呈LiCl的浓度依赖性。 结论 PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中均有表达,PMS2的表达可能受GSK-3β的调控。 目的检测GSK-3β能否稳定PMS2的表达。 方法 1. Western blot免疫印迹法检测不同浓度LiCl作用于卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3后,PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β蛋白水平的改变。 2. LiCl处理细胞后,用放线菌酮抑制蛋白合成,检测PMS2蛋白的半衰期改变。 3.免疫共沉淀的方法检测PMS2和GSK-3β在自然状态下是否结合。 结果 1. LiCl抑制GSK-3β活性后,卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中PMS2的表达明显下降,并呈LiCl剂量依赖性。 2. LiCl抑制GSK-3β活性后,PMS2的半衰期约为2h,而对照组PMS2在2.5h内相对稳定。 3.用GSK-3β抗体沉淀下来的免疫复合物中可以检测到PMS2的存在;相应用PMS2抗体沉淀下来的免疫复合物中也可检测到GSK-3β的存在。 结论 GSK-3β可与PMS2相结合并稳定PMS2的表达。 目的 探讨LPS在诱导肿瘤细胞增殖与迁移中的作用及作用机制,并明确PMS2在其中的作用。 方法 1. MTT法检测不同浓度LPS作用于卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3,对细胞增殖的影响。 2. Transwell小室法检测LPS对肿瘤细胞迁移的影响。 3. Western blot法检测LPS刺激后,TLR4,MyD88,PMS2,GSK-3β等基因蛋白水平的改变。 结果 1. LPS刺激可以诱导人卵巢癌细胞A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3的增殖,并且这种作用可以被siTLR4所抑制。 2. LPS促进人卵巢癌细胞A2780,Angle,Caov3,SKOV3的迁移,并且这种作用可以被siTLR4部分抑制。 3. LPS刺激细胞后,TLR4,MyD88,NFκB的表达增强,而PMS2,IκB的表达下降。 结论 PMS2可能参与LPS诱导的肿瘤细胞增殖和迁移。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R737.31

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