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泽泻防治泌尿系结石新药临床前研究

区淑蕴  
【摘要】:目的:在前期实验研究的基础上,进行泽泻防治泌尿系结石有效部位的临床前研究:进一步确认泽泻防治泌尿系结石的有效部位,并对其制备工艺进行优化;通过主要药效学实验,进一步确认泽泻防治泌尿系结石的活性成分;对泽泻防治泌尿系结石有效部位提取物进行质量标准研究,为下一步制剂研究奠定基础。 方法与结果: 1.体外药理实验进一步确认泽泻防治泌尿系结石的有效部位:制备泽泻总三萜提取物、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部位提取物及泽泻生物碱、挥发油粗提物,利用种晶技术,测定不同提取物在体外对一水草酸钙(CaOx)晶体的生长抑制指数。结果显示总三萜提取物及乙酸乙酯部位在体外对一水CaOx晶体的生长抑制指数较高,分别为124.50%及121.53%,与空白对照组差异显著。其余各提取物组与空白对照组比较均无显著性差异。说明泽泻乙酸乙酯部位及总三萜在体外具有抑制CaOx晶体的生长的作用,进一步确认乙酸乙酯部位为泽泻防治泌尿系结石的有效部位,总三萜是泽泻防治泌尿系结石的有效成分。 2.对23-乙酰泽泻醇B的HPLC-ELSD含量测定条件进行优化,色谱条件为以乙腈—水(65:35)为流动相,方法学考察表明23-乙酰泽泻醇B进样量在0.544~2.720μg范围内线性关系良好,精密度RSD为2.10%,平均回收率101.34%,可用于有效部位中23-乙酰泽泻醇B的含量测定。实验考察系列浓度乙醇对泽泻总三萜及标示成分23-乙酰泽泻醇B的提取效率,综合提取物中总三萜及23-乙酰泽泻醇B的含量,决定改用60%乙醇作为提取溶剂以优化制备工艺。 3.采用乙二醇及阿法骨化醇诱导雄性SD大鼠泌尿系CaOx结石形成,造模时同时给药,考察泽泻总三萜提取物(TTE)对大鼠血生化指标、尿液指标、肾脏指标、肾组织CaOx晶体沉积及肾组织结构的影响。结果显示泽泻总三萜提取物能降低泌尿系结石大鼠的血BUN、肌酐、24h尿Ca~(2+)含量、肾Ca~(2+)含量及右肾系数水平,增加24h尿量及肾组织Mg~(2+)含量。肾组织病理学检查可知泽泻总三萜能减少大鼠肾组织内CaOx晶体的沉积,减轻肾小管扩张及肾脏肿胀的情况,改善肾脏组织的损伤情况。说明泽泻总三萜在体内能抑制大鼠泌尿系CaOx结石的形成。 4.按照《中国药典》2005版一部的相关规定,对泽泻防治泌尿系结石有效部位提取物进行鉴别、检查、含量测定等的质量标准研究。综合多批药材有效部位提取物的测定数据,规定有效部位提取物中总三萜含量不得低于55%,标示成分23-乙酰泽泻醇B含量不得低于1.10%,含水量不得超过9%,炽灼残渣不得超过0.5%,重金属含量不得高于百万分之二十,砷盐含量不得高于百万分之二。 结论:泽泻总三萜提取物可以有效抑制乙二醇及阿法骨化醇诱导的大鼠泌尿系CaOx结石的形成,是泽泻抗泌尿系结石的活性成分,可用于泌尿系结石的治疗,特别是结石病复发的预防治疗。泽泻总三萜的抗泌尿系结石的作用机制有待进一步研究。


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