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《华中科技大学》 2011年
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脂肪因子Chemerin对THP-1源性泡沫细胞胆固醇蓄积的影响及其机制的研究

谢霆  
【摘要】:第一部分冠心病与非冠心病患者的脂肪组织中Chemerin、Adiponectin以及TNFαmRNA表达水平 目的检测冠心病患者的心外膜脂肪及非冠心病患者心外膜脂肪Chemerin、adiponectin以及TNFαmRNA表达水平的变化,对比检测冠心病患者与非冠心病患者胸前皮下脂肪的chemerin mRNA表达变化以及冠心病患者大隐静脉皮下脂肪中chemerin mRNA表达。分析探讨Chemerin mRNA表达与冠心病的相关性。 方法收集2010年12月至2011年6月期间我院心脏外科行开胸手术患者的心外膜、胸前皮下以及大隐静脉处皮下脂肪组织标本,其中冠心病患者15例,非冠心病患者13例,采用实时定量PCR方法检测冠心病患者的心外膜脂肪及非冠心病患者心外膜脂肪Chemerin, adiponectin以及TNFα的mRNA表达水平的变化,对比检测冠心病患者与非冠心病患者胸前皮下脂肪的chemerin mRNA表达变化以及冠心病患者大隐静脉皮下脂肪中chemerin mRNA的表达。 结果与非冠心病患者相比,冠心病患者中心外膜脂肪组织中的Chemerin mRNA表达均上调,脂联素表达降低,而TNFα表达升高差异有统计学意义(p0.05)。在同一患者中,无论是冠心病患者还是非冠心病患者,心外膜脂肪组织Chemerin mRNA表达较胸前皮下脂肪组织增加,差异有统计学意义(p0.05)。冠心病患者胸前皮下组织与大隐静脉处皮下脂肪组织Chemerin mRNA表达相比,差异无统计学意义(p0.05)。 结论冠心病患者心外膜Chemerin mRNA表达较非冠心病人增加。 第二部分THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞构建及OX-LDH对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡和胆固醇蓄积影响的检测 目的构建THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,探索OX-LDL诱导泡沫细胞的合适浓度。 方法佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h后,观察细胞形态学和细胞外观表型的变化,检测其CD68表达,油红O染色法检测细胞内脂滴。在不同浓度的氧化型低密度脂蛋白溶液内孵育48 h,采用酶比色法测定细胞内总胆固醇的含量,流式细胞术检测细胞凋亡水平。 结果在PMA诱导下THP-1细胞出现巨噬细胞伪足样变化,巨噬细胞分子标记CD68表达阳性。油红O染色发现细胞内大量脂滴存在。氧化型低密度脂蛋白浓度范围为25~50ug/mL时,细胞无明显凋亡,随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增高,细胞凋亡率和坏死率也逐渐增加。采用ELISA法检测细胞内总胆固醇的含量发现,氧化型低密度脂蛋白浓度在25 ug/mL至50ug/mL时,细胞内总胆固醇的含量增加,浓度达到100ug/mL则开始下降。 结论:THP-1巨噬细胞源性的泡沫细胞呈巨噬细胞伪足样变化,CD68表达阳性,油红O染色显示细胞内存在大量脂滴。氧化型低密度脂蛋白浓度在50ug/mL构建的巨噬泡沫细胞内总胆固醇含量适度,细胞凋亡低,此为诱导最佳浓度。 第三部分Chemerin对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ABCA1及炎症因子TNFα表达和细胞内胆固醇蓄积的影响 目的:不同浓度脂肪因子chemerin对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1, ABC A1)及炎症因子TNFα表达影响及细胞内胆固醇蓄积的变化,探讨chemerin调节细胞内胆固醇蓄积的可能机制。 方法:不同浓度的Chemerin联合相同浓度(50ug/mL)氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬源性泡沫细胞处理24h,检测细胞内总胆固醇的含量,实时RT-PCR和WesternBlot检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA检测培养液中TNFα的浓度。 结果:不同浓度Chemerin刺激后细胞内总胆固醇的含量增加,CD36和ABCA1 mRNA及蛋白表达下调,培养基中TNFα浓度升高。 结论:Chemerin可能通过下调ABCA1基因的mRNA和蛋白的表达降低胆固醇的外流作用强过CD36下凋抑制胆固醇的吸收,上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后脂质的蓄积,而ABCA1和CD36的表达下调可能与Chemerin刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞促炎因子TNFα释放增加有关。 第四部分Chemerin对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ABCA1及炎症因子TNFα表达和细胞内胆固醇蓄积的影响 目的:检测THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在不同浓度Chemerin干预下,细胞内NF-κB, LXRα、PPARγ信号分子蛋白水平,探讨Chemerin抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的可能机制。 方法:不同浓度Chemerin孵育THP-1源性泡沫细胞胞24h, Western Blot检测细胞核和胞浆内NF-κB (P65)的含量,细胞总蛋白中LXRα、PPARγ的蛋白含量。 结果:Chemerin刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,泡沫细胞细胞核内NF-κB(p65)蛋白增加和胞浆内NF-κB (p65)蛋白降低,细胞PPARγ, LXRα蛋白表达无明显变化。 结论:Chemerin刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞抑制ABCA1 mRNA表达,可能与NF-κB信号途径激活有关。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R541.4

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