收藏本站
《华中科技大学》 2012年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

白花丹醌抑制NF-κB对人胃癌细胞的作用及机制

李静  
【摘要】:目的:观察白花丹提取物白花丹醌,对胃癌细胞凋亡、增殖、迁移、侵袭的影响,以及对相关蛋白和NF-κB通路的调控作用,初步研究其机制。 方法:我们以人胃癌SGC-7901细胞为模型,通过MTT法观察白花丹醌对SGC-7901细胞活性的影响;光学显微镜及DAPI染色后细胞形态及细胞核的变化;应用Annexin V-FITC/PI双标流式法进一步检测白花丹醌对细胞凋亡率影响;CCK-8法检测白花丹醌是否可以增加TNF-α、顺铂化疗敏感性;用克隆形成及EdU标记法观察药物对细胞增殖的影响;通过流式细胞仪PI单染法检测白花丹醌对细胞周期的影响;细胞划痕检测白花丹醌对胃癌细胞迁移能力的影响;Transwell小室进行体外侵袭实验;免疫共聚焦法检测白花丹醌对TNF-α诱导的NF-κB p65核移位的影响;采用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase3,以及TNF-α诱导的p65、IκBα、IKK的活化,NF-κB下游调节蛋白IAP1、XIAP、Bcl-xL以及转移相关蛋白VEGF. TF、ICAM-1的变化。 结果:MTT结果显示,白花丹醌不同浓度作用细胞24小时后IC50为19.12μmol/L。白花丹醌10μmol/L随着作用时间延长对细胞活性的影响增加,在作用24小时后抑制率是对照组的50.63±2.40%,白花丹醌可促进胃癌细胞凋亡,并且具有浓度和时间依赖性;随药物浓度的增加越来越多的细胞呈现典型的凋亡形态学改变:细胞皱缩、变圆、细胞破碎失去正常梭型形态,细胞核固缩、核裂解为碎块;Annexin V-FITC/PI双标流式法结果显示,白花丹醌0-20μM干预细胞12小时后细胞凋亡率分别为1.77%±0.31、8.00%±1.67、30.57%±1.25、35.33%±1.3,用药组与对照组相比差异明显(P0.05);CCK-8法结果显示,单独使用白花丹醌、TNF-α、顺铂对胃癌细胞诱导凋亡的能力都不及白花丹醌预先处理细胞后再使用TNF-α和顺铂的效果。与对照组、TNF-α单独作用组、顺铂单独作用组相比差异明显(P0.05);克隆形成与EdU标记实验结果:白花丹醌干预后处于增殖期的细胞明显减少,克隆形成率明显下降;流式细胞仪检测细胞周期结果显示,随着药物浓度的增加,处于G0/G1期细胞百分数减少,处于S-G2/M期的细胞百分比逐渐增加,与对照组相比差异明显(P0.05),说明白花丹醌能过造成胃癌细胞S-G2/M期阻滞;细胞划痕实验显示,白花丹醌干预细胞后与对照组相比划痕愈合速度减慢,愈合速度与药物浓度呈负相关;侵袭实验表明白花丹醌干预24小时后穿过人工基底膜的细胞数量明显减少,浓度越大穿过数量越少,与对照组相比差异明显(P0.05);免疫共聚焦法检测结果:TNF-α可诱导NF-κB p65由细胞质移位到细胞核内,白花丹醌可抑制TNF-α诱导的p65转位;免疫印迹结果显示,白花丹醌抑制蛋白Bcl-2、pro-caspase3表达,增加Bax、cleaved-caspase3的表达。抑制TNF-α诱导细胞核内p65磷酸化与总蛋白的表达。明显抑制细胞总蛋白质中IκBa磷酸化与降解,抑制IKKα磷酸化。同时白花丹醌可以抑制NF-κB下游调节蛋白IAP1、XIAP、Bcl-xL、VEGF、TF、以及ICAM-1的表达。 结论:白花丹醌可以促进胃癌细胞凋亡,使细胞阻滞在S-G2/M期而抑制细胞增殖;并且白花丹醌可以增加胃癌细胞对TNF-α、顺铂化疗敏感性;同时白花丹醌可以明显抑制胃癌细胞在体外迁移和侵袭能力;白花丹醌可抑制TNF-α诱导的胃癌细胞中NF-κB活化,抑制NF-κB下游调节蛋白Bcl-2、IAP1、XIAP、Bcl-xL、VEGF、TF、ICAM-1的表达。白花丹醌促进胃癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移、侵袭的机制之一可能是通过抑制NF-κB转录途径完成的。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R735.2;R285

手机知网App
【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 罗佳捷;金属硫蛋白对热应激奶牛外周血淋巴细胞周期和凋亡率的影响及机理[D];湖南农业大学;2013年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 ;Changes of NF-kB,p53,Bcl-2 and caspase in apoptosis induced by JTE-522 in human gastric adenocarcinoma cell line AGS cells:role of reactive oxygen species[J];World Journal of Gastroenterology;2002年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王蓉;王雯;张志坚;李达周;;核因子-κB、过氧化物酶体增殖活化物受体-γ在Barrett食管、食管腺癌中表达增高[J];福州总医院学报;2011年02期
2 顿爱社;张春菊;吕伯实;刘帅;侯海峰;王凡;;含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡并下调Bcl-2的表达[J];解剖科学进展;2011年01期
3 秦勇;张海涛;王娟;;6,8-二-三氟甲基-5-羟基-7-乙酰氧基白杨素的抗胃癌作用[J];肿瘤药学;2011年06期
4 杨洋;蔡雪婷;曹鹏;;肿瘤的化学预防治疗靶点——NF-κB[J];中南医学科学杂志;2012年05期
5 顾星;姚登福;;肝癌多药耐药发生机制与监测标志物[J];南通大学学报(医学版);2013年04期
6 邓晓杨;张小霞;彭聪;徐蕾;;宫颈癌组织中β-Catenin和NF-κB的表达及意义[J];海南医学院学报;2013年12期
7 洪良利;秦杰升;黄杰雄;邱前程;董恒;;NF-κB p65、CyclinD1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义[J];海南医学;2014年12期
8 张岱州;杨麟珂;曹冲;;NF-κB、VEGF蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义[J];山东医药;2010年35期
9 周永芹;韩莉;;NF-κB与肿瘤关系的研究进展[J];现代肿瘤医学;2008年05期
10 陈雨晗;张令强;贺福初;;去泛素化酶与基因表达调控[J];生物化学与生物物理进展;2014年02期
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 安青;补精解毒方组分对肺癌A549细胞核转录因子NF-KB、AP-1的影响[D];南京中医药大学;2011年
2 袁伟杰;EphA2基因沉默对胃癌SGC-7901细胞侵袭力的影响及相关机制研究[D];中南大学;2010年
3 王鸿雁;Wnt2B细胞信号传导通路与肿瘤发生发展的关系和机制的研究[D];华中科技大学;2012年
4 廖前进;LPLUNC1抑制NF-κB和Stat3信号通路的激活抵抗促炎因子IL-6促进的鼻咽癌发生发展[D];中南大学;2012年
5 陈赐慧;肺瘤平膏调控NF-κB相关炎性信号通路防止肺癌转移的分子机制研究[D];北京中医药大学;2013年
6 杨万广;ALDH1A2在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞生物学的作用[D];郑州大学;2013年
7 张洪菊;CUEDC2在慢性粒细胞白血病细胞伊马替尼耐药中的作用[D];北京协和医学院;2013年
8 顾建军;MiR-218下调Slit2-Robo1通路抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究[D];苏州大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 谌南岚;重楼皂甙Ⅱ对系膜细胞凋亡及细胞外基质的影响[D];中南大学;2011年
2 王璞;Pim-2、NF-κB在肝细胞癌中的表达和意义及两者相关性研究[D];中南大学;2011年
3 刘漫宇;蟛蜞菊抗肿瘤有效部位的分离及其作用机制的研究[D];广东药学院;2011年
4 刘庆;白花丹素联合多西他赛对前列腺癌细胞的增殖抑制及其机制研究[D];华中科技大学;2011年
5 王炜;缺血预处理对胆管上皮细胞凋亡及bcl-2/bag-1表达的影响[D];山西医科大学;2007年
6 姚红波;阿司匹林对胃癌细胞增殖和核因子κB表达的影响[D];江苏大学;2009年
7 王旭青;NF-κB、FAK和VEGF-C在胃癌中的表达及其临床意义[D];江苏大学;2009年
8 黄领领;桑橙异黄酮对肿瘤细胞增殖抑制作用的实验研究[D];郑州大学;2009年
9 刘慧;SNX-2112体内外抗肿瘤活性及诱导A-375细胞凋亡作用机制研究[D];暨南大学;2010年
10 苏帅;CDX2,COX-2,NF-κB在胃癌和癌前病变中的表达和意义[D];天津医科大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴晓华,徐小虎,沈忠英,祝家镇;细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4在食管癌中的表达及其意义[J];癌症;2000年01期
2 祝峙;p53基因网络的研究进展[J];癌症;2003年05期
3 蔡亚非,杜娟,张利军,李莲,刘庆华,周磊,杨媛媛,王根林;热应激奶牛外周血淋巴细胞凋亡相关基因表达及血液学分析[J];动物学报;2005年02期
4 杜娟;狄和双;郭亮;李忠浩;蔡亚非;王根林;;高温对乳腺上皮细胞生长及凋亡的影响[J];动物学报;2006年05期
5 李建国,桑润滋,张正珊,王铁征,朱慧中,安永福,曹玉凤,田英才,许增福;热应激对奶牛生理常值、血液生化指标、繁殖及泌乳性能的影响[J];河北农业大学学报;1998年04期
6 张彬;肖定福;李丽立;陈宇光;王莹;吴宗明;张复生;兰欣怡;;金属硫蛋白在奶牛公犊体内的代谢规律研究[J];草业学报;2008年06期
7 张彬;谭琼;肖兵南;李丽立;陈宇光;肖定福;刘海林;吴宗明;张复生;;外源性金属硫蛋白对奶牛泌乳性能和抗氧化状况的影响[J];草业学报;2009年06期
8 张彬;谭琼;李丽立;刘海林;肖定福;陈宇光;罗佳捷;毕小艳;;金属硫蛋白对奶牛血液抗氧化酶GSH-Px和CAT基因表达的影响[J];草业学报;2010年03期
9 吴力专;陈海燕;张彬;李丽立;陈宇光;肖定福;罗佳捷;吴宗明;;外源性金属硫蛋白对中国荷斯坦奶牛产能性能和内分泌的影响[J];草业学报;2011年01期
10 范京惠;左玉柱;李一经;;细胞凋亡的研究进展[J];东北农业大学学报;2005年06期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 张彦民;塔斯品碱抑制血管生成的作用及初步机制研究[D];西安交通大学;2008年
2 桂伶俐;核因子-κB亚基p50和p65对永生化神经前体细胞存活的影响及机制研究[D];华中科技大学;2007年
3 吴光哲;CREG通过p38/JNK丝裂原活化蛋白激酶信号通路调控血管平滑肌细胞凋亡[D];第四军医大学;2009年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜泽乡;韦国丽;朱明丽;罗朝晖;;白花丹花和果实中白花丹醌含量的分析[J];安徽农业科学;2013年07期
2 赵艳丽;陆道培;;白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应[J];中国实验血液学杂志;2006年02期
3 刘超;刘圆;邓放;孟庆艳;高泽文;;白花丹醌的提取分离鉴定[J];时珍国医国药;2006年06期
4 杜泽乡;;白花丹鲜茎与干茎中白花丹醌含量测定[J];安徽农业科学;2009年33期
5 杜泽乡;潘祖鑫;;白花丹鲜叶与干叶中白花丹醌含量测定[J];安徽农业科学;2010年22期
6 杜泽乡;谭宁昌;罗朝晖;;不同溶剂索氏提取的白花丹叶中白花丹醌的含量测定[J];安徽农业科学;2012年05期
7 戴先芝;李艳丹;黄艳菲;丁玲;张吉仲;任朝琴;刘圆;;不同栽培条件下白花丹根、茎、叶中白花丹醌的含量测定[J];中国药学杂志;2012年10期
8 王玖恒;李景强;彭岳;张园;谭乐诚;赵铁建;;白花丹醌的研究进展[J];中华中医药学刊;2012年07期
9 杜泽乡;;桂林产白花丹茎不同月份白花丹醌含量测定[J];广西植物;2012年03期
10 刘圆;钟熠;高泽文;刘超;;白花丹药材的研究进展[J];华西药学杂志;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 张园;王玖恒;李景强;彭岳;赵铁建;;HPLC测定广东大石镇不同部位白花丹中白花丹醌的含量[A];中南地区第八届生理学学术大会论文摘要汇编[C];2012年
2 徐同鹏;刘立根;蒋雪玮;罗婧;谢英华;赵莉敏;韩曦瑶;陆道培;;白花丹醌增强TRAIL诱导的Kasumi-1细胞凋亡及其机制[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
3 张友才;陈小维;张伟伟;陈金霞;陈永平;李骥;;白花丹醌对肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路的影响[A];中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2013年
4 徐凯红;;白花丹醌和亚砷酸对白血病荷瘤小鼠作用的比较[A];2012年浙江省血液病学年会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 韦燕飞;白花丹醌对人肝星状细胞作用的分子机制研究[D];广西医科大学;2011年
2 李静;白花丹醌抑制NF-κB对人胃癌细胞的作用及机制[D];华中科技大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 戴先芝;民族药白花丹野生变家种的栽培技术规范及质量评价研究[D];西南民族大学;2010年
2 徐同鹏;白花丹醌增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡及其机制研究[D];复旦大学;2011年
3 罗婧;白花丹醌增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡在NOD/SCID小鼠体内的研究[D];复旦大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026