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《华中科技大学》 2012年
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斑马鱼Rictor基因的克隆、表达和功能研究

姜利军  
【摘要】:mTORC2隶属于PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路,尤其是mTOR信号通路的过度活化与肿瘤的发生、发展密切相关,是肿瘤治疗的一个重要靶点。近年来随着临床上这类小分子抑制剂的出现,使得人们对它的兴趣越来越大,对Rictor和mTORC2相关的报道越来越多。Rictor是作为mTORC2脚手架的一个蛋白出现,共同和其他的五个蛋白维持着mTORC2的稳定。mTORC2在许多重要的生理学过程中扮演重要角色,包括:细胞生存、代谢、增殖、细胞骨架的合成等,但是相对于mTORC1来说,mTORC2有更多未知的部分需要我们去探索,比如说mTORC2的上游信号通路有哪些,它们是如何激活mTORC2的,Rictor是否维持mTORC2的稳定?在mTORC2中扮演什么角色?目前这一部分尚属空白,查阅相关文献没有确凿证据,这些都是很有趣的话题。 运用斑马鱼模式生物研究Rictor的基因功能,首先我们应用生物信息学的方法,证明斑马鱼Rictor基因在进化上高度保守,为脊椎动物保守基因,为其后续在造血系统和造血微环境方面的研究提供了理论支持和铺垫。整胚胎原位杂交技术广泛运用于基因表达谱,是研究斑马鱼发育,探索相关基因的功能的重要手段。本研究根据斑马鱼rictor mRNA设计构建合成反义RNA探针,整胚胎原位杂交技术分析了rictor在斑马鱼早期发育过程中(时间和空间上)的表达情况,Zrictor在胚胎的单胞期就开始表达,24小时特异性的表达于脊索,48到72小时特异性的表达与神经管和肌节。通过反义吗啉代寡核苷酸MO(低表达)抑制Zrictor后,结果发现mo注射组斑马鱼胚胎出现很少量的心包积液和身体弯曲(主要在尾部),并且在发育早期呈现一定的发育滞后。显微注射前后斑马鱼时空表达的差异,在血液系统的marker和心脏marker里面没有出现明显的变化,但是Fli-1在节间血管有轻微变化,肌肉的表达(myod)有所减少;有心包积液的斑马鱼胚胎用o-staining检测循环形成后斑马鱼的血红蛋白的分布表达变化,显示血红蛋白的沉积减少。 在提倡小分子抑制剂只对肿瘤起效,而不影响正常组织功能的情况下,Rictor是否是合适的打靶对象?我们在体内验证了rictor被MO抑制后对正常组织和造血系统的影响,可能为临床血液病和肿瘤治疗的新靶点。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R-331

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【共引文献】
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