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《华中科技大学》 2012年
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HMGB1的聚ADP-核糖基化修饰促进其乙酰化修饰

陈丽鹃  
【摘要】:目的:高迁移率族蛋白1(HMGB1)作为重要的晚期炎症介质在炎症(包括SAP)的发生发展中起到重要作用,HMGB1在翻译后修饰包括乙酰化、磷酸化、甲基化和ADP-核糖基化。HMGB1主动分泌过程中,乙酰化修饰扮演了很重要的角色,促进HMGB1向胞浆移位和细胞外分泌。近年的研究发现PARP-1参与了炎症过程的HMGB1核内定位和向细胞外分泌的过程,可能与HMGB1的ADP-核糖基化修饰有关。本研究旨在研究HMGB1的聚ADP-核糖基化修饰及其对乙酰化修饰的影响,探讨PARP-1调控HMGB1细胞内定位和细胞外分泌的可能机制,为PARP-1抑制剂在临床上用于抗HMGB1相关炎症的治疗提供更多的理论依据。 方法:以LPS(100ng/ml)、LPS+3-AB(10mmol/l)刺激RAW264.7细胞2h和4h,用RIPA裂解法提取出细胞全蛋白;用HMGB1抗体进行免疫沉淀富集HMGB1;用PAR抗体、乙酰化-赖氨酸抗体进行Western-blot检测HMGB1的聚ADP-核糖基化和乙酰化水平。体外构PARP-1以6-生物素-17-NAD为底物对HMGB1进行聚ADP-核糖基化,用HRP标记的链霉亲和素抗体进行免疫印迹检测生物素化-ADP核糖;体外CBP以乙酰辅酶A为底物对HMGB1进行进一步的的乙酰化,用乙酰化-赖氨酸抗体进行Western-blot检测蛋白的继续乙酰化水平。 结果:单用LPS刺激RAW264.7细胞活化PARP-1后,HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明显高于对照组(0h),乙酰化水平也明显高于对照组;同时以(PARP-1活性抑制剂)3-AB刺激以后,HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明显低于LPS组,乙酰化水平也明显低于LPS组,差异具有统计学意义(P0.05)。体外HMGB1在PARP-1作用下进行聚ADP-核糖基反应后,结果显示PARR-1组HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明显高于control组(PARR-1热灭活对照组),继续乙酰化水平也明显高于control组,差异具有统计学意义(P0.05)。 结论:HMGB1的聚ADP-核糖基化修饰促进其乙酰化修饰。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R3411

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【参考文献】
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【共引文献】
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