重组腺相关病毒介导的人C5L2基因治疗高脂饮食诱导的Wistar大鼠脂肪肝

【摘要】：【研究目的】近几年研究证明C5L2是促酰化蛋白（acylation-stimulatingproteinASP）的唯一功能受体，并且与糖脂代谢相关，ASP-C5L2通路激活增加二酰基甘油酰基转移酶（DGAT）活性，刺激葡萄糖的吸收，抑制激素敏感性脂肪酶（HSL）的活性，还具有刺激胰岛素分泌的功能，从而促进脂肪组织甘油三酯的合成并储存于脂肪组织。Nonalcoholicfattyliverdisease(NAFLD)是由于肝脏脂质沉积过多引起，是在肝脏中的表现的代谢紊乱综合征，与糖脂代谢紊乱和炎症有密切联系。越来越多的研究提示高表达C5L2基因可能会减少肝脏的脂肪沉积，从而改善肝脂肪变性。有研究表明当323位丝氨酸突变为异亮氨酸后即S323I-C5L2使基因C5L2失去功能。本研究设想高表达C5L2基因可以缓解脂肪变性治疗NAFLD，而S323I-C5L2突变对NAFLD没有作用。 【研究方法】用高脂饲料（脂肪提供60%能量）饲养八周龄的Wistar大鼠，12周后诱导NAFLD模型，重组腺相关病毒介导基因C5L2（rAVV-C5L2）及S323I-C5L2（rAVV-S323I-C5L2）经尾静脉注射入大鼠体内，从而在大鼠体内安全地表达C5L2及S323I-C5L2基因。治疗8周后，处死大鼠，检测血浆生化指标，用Westernblot检测C5L2蛋白在肝脏组织地表达情况，通过HE染色和肝脏甘油三酯含量评价肝脏脂肪变性，采用westernblot检测肝脏组织IκBα/NF-κB炎症通路各分子表达，Real-time方法检测肝脏组织炎症因子TNF-α和IL-6的mRNA水平。综合评价C5L2基因对高脂诱导的NAFLD的影响。 【研究结果】（1）重组腺相关病毒介导人C5L2基因可以在动物体内稳定的表达C5L2受体；（2）在高脂组，C5L2基因过表达显著降低血清甘油三酯（TG）、葡萄糖、FFA水平；明显降低肝脏甘油三酯含量，减轻由高脂引起的脂肪变性；（3）在高脂组，C5L2高表达降低了TNF-α和IL-6的mRNA水平并且抑制NF-κB炎症通路；（4）S323I-C5L2则没有以上作用。（5）在低脂组，C5L2和S323I-C5L2对以上检测指标都没有什么影响。

【关键词】：C5L2 NAFLD 基因治疗 脂肪肝 重组腺相关病毒
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R450;R575.5
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