脂肪干细胞改善老龄大鼠勃起功能及其机制的研究

【摘要】：【目的】探讨大鼠脂肪干细胞（ADSCs）的体外培养方法、分化能力及免疫表型表达。 【方法】Ι型胶原酶消化后差速贴壁法培养ADSCs；CCK-8法测定ADSCs和骨髓干细胞（BMSCs）增殖率，并进行统计学分析；流式细胞技术（FCM）鉴定免疫表型的表达；特定条件下向多个方向诱导分化。 【结果】脂肪组织中含有具有多向分化能力的细胞，增殖速率明显优于BMSCs，表达CD29、CD90，弱表达CD106，不表达CD31，CD34，CD45，CD49，CD73，CD105。 【结论】ADSCs具有多向分化能力，易于分离培养，其增殖能力较BMSCs更快，并能长期稳定增殖。 【目的】探讨阴茎海绵体内注射脂肪干细胞（ADSCs）对老龄ED大鼠勃起功能的影响，以期寻找一种更理想的种子细胞来源。 【方法】筛选勃起功能正常的成年大鼠（5月龄）及老龄ED大鼠（25月龄），分为成年对照组、未治疗组、PBS组及ADSCs组，PBS组阴茎海绵体内注射PBS，ADSCs组注射等体积含1×106个ADSCs的细胞悬液，另两组不做任何处理。饲养2周后行海绵体测压，分析ADSCs对老龄ED大鼠勃起功能的影响。 【结果】 1.未治疗组及PBS组老龄大鼠MaxICP/MAP在2.5V、5V、7.5V三个电压刺激下均显著低于成年对照组（P0.01）； 2.未治疗组与PBS组相比MaxICP/MAP在三个电压刺激下无显著差异（P0.05）； 3. ADSCs组老龄大鼠MaxICP/MAP在三个电压刺激下均显著高于未治疗组及PBS组（P0.01），但也显著低于成年对照组（P0.01）。 【结论】ADSCs可显著改善老龄ED大鼠的勃起功能，可能成为未来组织工程学领域内治疗年龄相关性ED更为理想的种子细胞。 【目的】探讨ADSCs是否通过逆转阴茎海绵体结构重构改善老龄ED大鼠的勃起功能。 【方法】 1. CM-DiI标记ADSCs后检测细胞增殖率及14d内细胞荧光强度变化，FCM分析其不同时间点的标记率； 2.大鼠分组同第二部分，ADSCs组注射CM-DiI标记的ADSCs的细胞悬液。饲养2周后取阴茎海绵体组织，免疫荧光法检测vWF表达，Masson三色染色法定性平滑肌、胶原纤维，Image-Pro Plus6.0定量分析内皮细胞/总面积（VECs/gross area）及平滑肌/胶原纤维面积（SM/collagen），分析ADSCs对老龄ED大鼠内皮及平滑肌细胞的影响。 【结果】 1. CM-DiI标记后荧光强度随时间逐渐减弱，但至14d时仍清晰可见；1d、7d、14d标记率分别为：99.22%、97.61%、93.11%； 2. CM-DiI标记与未标记的ADSCs在各时间点的增殖能力无统计学差异（P0.05）； 3. ADSCs注射2周后，阴茎海绵体组织内仅观察到极少量标记后的细胞； 4. ADSCs治疗组vWF表达增加，VECs/gross area比例增大，虽显著低于成年对照组（P0.01），但也显著高于未治疗组和PBS组（P0.01）； 5. ADSCs治疗组海绵体平滑肌细胞数量明显增加，SM/collagen比例增大，显著低于成年对照组（P0.01），但也显著高于未治疗组和PBS组（P0.01）。 【结论】ADSCs海绵体内注射可有效促进老龄ED大鼠阴茎海绵体内皮、平滑肌细胞的再生，逆转阴茎海绵体结构重构。

【关键词】：脂肪干细胞 分化 免疫表型 组织工程 培养 脂肪干细胞 老龄 勃起功能障碍 海绵体内压 勃起功能障碍 脂肪干细胞 平滑肌细胞 血管内皮细胞 结构重构
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R698
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