T细胞免疫球蛋白粘蛋白3在骨肉瘤中的表达及作用研究

【摘要】：第一部分TIM-3在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义目的:检测TIM-3在骨肉瘤组织中的表达水平,并分析其表达水平与患者临床预后的相关性。方法:应用免疫组化技术检测38例骨肉瘤肿瘤组织及癌旁组织中TIM-3表达水平,并应用统计学模型处理数据,分析其表达水平与患者临床预后的相关性。结果:免疫组化结果显示TIM-3在骨肉瘤组织中呈现不同程度的高表达,在癌旁组织中呈现低表达。TIM-3的阳性表达水平与骨肉瘤患者性别、年龄、肿瘤病理分型、病变部位、Enneking分期等无明显相关性。Kaplan-Meier生存分析显示,TIM-3表达水平高的患者临床预后比表达水平低的患者差。结论:骨肉瘤肿瘤组织中TIM-3表达水平较高,癌旁组织中表达水平较低,TIM-3表达水平的高低与骨肉瘤患者临床预后呈负相关,提示TIM-3在骨肉瘤发生发展中可能起到重要作用。第二部分靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞生物学行为的影响目的:研究靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响,为TIM-3靶向治疗研究提供理论基础。方法:应用MTT、克隆形成实验检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞MG63、U-20S增殖的影响;应用划痕实验、Transwell实验检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响;应用流式细胞仪Annexin V-FITC染色法检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞凋亡的影响;应用Western-blot技术检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞侵袭相关蛋白的表达的影响。结果:MTT结果提示靶向抑制TIM-3能明显抑制骨肉瘤MG63、U-20S细胞增殖和克隆形成;划痕实验、Transwell实验均提示靶向抑制TIM-3能显著抑制MG63、U-20S迁移和侵袭;流式细胞仪Annexin V-FITC染色法结果提示靶向抑制TIM-3能促进MG63、U-20S凋亡;Western-blot结果提示靶向抑制TIM-3能显著降低侵袭相关蛋白的表达。结论:靶向抑制TIM-3能抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促进骨肉瘤细胞凋亡。第三部分靶向抑制TIM-3对骨肉瘤荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用目的:研究靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:将24只裸鼠随机分成实验组(TIM-3siRNA)和对照组,将人骨肉瘤细胞接种于右背部皮下建立荷瘤裸鼠模型,检测各组裸鼠体重变化,绘制肿瘤体积生长曲线,待第一只裸鼠正常死亡时处死所有裸鼠,检测肿瘤的重量和体积。应用免疫组化技术检测两组肿瘤组织中PCNA和HMGB1的表达水平。结果:TIM-3siRNA实验组较对照组相比,U-20S荷瘤裸鼠移植瘤肿瘤重量、体积显著降低,抑瘤率显著增高。TIM-3 siRNA实验组肿瘤中PCNA和HMGB1表达水平均显著低于对照组。结论:靶向抑制TIM-3能抑制骨肉瘤细胞荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长和侵袭能力。