收藏本站
《华中科技大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Akt/mTOR信号通路在壬基酚诱导雄性生殖毒性中的作用

黄文婷  
【摘要】:第一部分壬基酚诱导睾丸支持细胞损伤及其Akt/mTOR信号调控机制目的:壬基酚(nonylphenol,NP)是一种环境内分泌干扰物,在各种环境介质中广泛存在,可诱导雄性生殖毒性。支持细胞(Sertoli cells,SCs)是曲细精管唯一体细胞,对生精细胞的增殖、分化和精子成熟有重要作用。本部分旨在研究NP对原代SCs的损伤作用及其信号调控机制。方法:原代培养睾丸SCs,使用FSHR抗体特异性标记后,利用激光共聚焦显微镜观察检测细胞纯度。根据NP暴露情况,将SCs分为对照组(0μM)和不同浓度NP染毒组(10、20、30μM);利用PI3K抑制剂wortmannin预处理1h,与NP联合干预SCs。染毒12h后,采用RT-PCR方法检测细胞Akt/mTOR信号通路、caspase-3、LC3、结构和功能蛋白基因表达情况,利用western blotting和免疫荧光检测细胞相应目标蛋白表达。结果:SCs纯度大于95%。中、高剂量组NP染毒可显著抑制SCs PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达水平,干扰该信号通路蛋白mRNA的表达;同时使p-AMPK蛋白表达增加。此外,pro-caspase-3 和 LC3B-Ⅰ 蛋白表达降低,cleaved-caspase-3、LC3B-Ⅱ蛋白表达增加,LC3B-Ⅱ/ⅠLC3B-比值升高。同时NP显著降低ABP、FSHR、N-cadherin、transferrin和vimentin蛋白表达,干扰除vimentin外的结构功能蛋白mRNA转录水平。使用Wortmannin预处理后,可减轻NP染毒SCs中PI3K和PTEN蛋白降低程度。结论:NP可诱导睾丸支持细胞凋亡和自噬发生,损伤睾丸支持细胞结构和分泌功能,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路。第二部分壬基酚对青春前期雄性大鼠的生殖毒性及机制研究目的:青春前期至性成熟期是机体生殖系统发育成熟的关键期。本文旨在研究NP暴露对此阶段SD雄性大鼠睾丸组织结构、功能,附睾精子质量的影响。方法:将42只青春前期(21天)SD雄性大鼠,随机分成六组:0、25、50、100mg/kg NP、NAC、NAC+100mg/kgNP组,每组7只。将NAC加入到大鼠饮水中,浓度为1g/l。每两天腹腔注射染毒一次,染毒15次,最后1次染毒48h后颈椎脱臼处死大鼠。采用ELESA法测定血清睾酮、FSH、LH水平,比色法检测血清SOD、MDA、GSII-PX水平,HE染色观察睾丸组织形态结构变化,TUNEL法测定睾丸组织凋亡发生,RT-PCR法检测睾丸组织目的基因表达,western blotting和免疫荧光法检测组织目的蛋白表达。结果:NP染毒降低各组血清睾酮水平,低、中、高剂量组依次降低15.58%、17.23%和13.38%。高剂量组NP可降低血清SOD水平(下降22.49%),增加MDA含量(上升 46.01%)。此外,NP 干扰 PI3K、PTEN、PDK1、p-Akt、p-mTOR、p70S6K、caspase-3、LC3B基因和或蛋白表达。NP诱导附睾精子形态异常,中、高剂量组精子畸形率分别是对照组的2.00和3.02倍;诱导睾丸组织凋亡,中、高剂量组凋亡率显著增加(分别是对照组的2.03和2.87倍)。NAC预处理后,可减少血清MDA含量,降低NP对附睾精子的损伤和睾丸凋亡水平。结论:青春前期至性成熟期NP暴露,可引起机体内分泌功能紊乱、氧化失衡,通过干扰PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导睾丸组织细胞凋亡和自噬,降低附睾精子质量。第三部分孕期暴露壬基酚对雄性子代生殖毒性及机制研究目的:孕期十分敏感,易受各种有害因素的影响,此时期暴露对于子代生殖系统发育成熟至关重要。孕期暴露可能造成个体成年期发生多种疾病。木文旨在研究NP孕期暴露对雄性子代青春前期、青春期和性成熟期睾丸组织结构和功能、附睾精子质量的影响。方法:将40只成年雌性SD大鼠,与雄性大鼠合笼后受孕,按照怀孕时间随机分成四组:对照组、10、50和200mg/kgNP组。于孕14~20天根据孕鼠体重每天进行灌胃染毒;分别在产后21天、35天和60天,在各组随机挑选6只雄性仔鼠(各时间点均24只)进行试验。颈椎脱臼处死仔鼠后,采用ELESA法测定血清睾酮、FSH、LH水平,HE染色观察睾丸组织形态结构变化,TUNEL法测定睾丸组织凋亡发生,透射电镜观察组织内各细胞超微结构改变,RT-PCR检测睾丸组织目的基因表达,western blotting和免疫荧光检测组织目的蛋白表达,计算机辅助精液分析系统分析60日龄大鼠附睾精子质量。结果:孕期NP暴露,60日龄雄性仔鼠低、高剂量组的体重和睾丸重量明显降低;35日龄仔鼠低剂量组睾丸重量减少;21日龄仔鼠低剂量组睾丸重量和脏器系数显著降低。NP孕期染毒可干扰不同发育阶段雄性仔鼠睾酮、FSH、LH水平;引起睾丸组织形态结构改变,诱导凋亡和自噬发生增加;同时NP抑制Akt/mTOR信号通路基因和蛋白水平表达,干扰组织中结构和分泌功能蛋白表达。此外,NP诱导附睾精子畸形率升高,降低精子密度和质量。35 日龄雄性仔鼠睾丸组织凋亡发生率明显高于其他时间段。结论:孕期NP暴露导致雄性子代内分泌功能紊乱,抑制Akt/mTOR信号通路,诱导睾丸组织细胞凋亡和自噬,破坏睾丸组织结构和功能,降低性成熟期附睾精子质量,造成生殖损伤;青春期雄性子代睾丸组织凋亡较明显。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R114

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐晓丽;王庆才;辛利;;AKT/mTOR在胃癌组织中的表达及意义[J];中华保健医学杂志;2013年05期
2 王运起;白进良;;肾透明细胞癌组织中AKT/mTOR的表达变化及意义[J];山东医药;2009年46期
3 曹珮;姜学军;席志军;;舒尼替尼通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬[J];北京大学学报(医学版);2016年04期
4 丁英钧;陈亮;王海蓉;王宏涛;;通心络超微粉联合津力达颗粒对糖尿病肾病大鼠Akt/mTOR信号转导通路的影响[J];中国实验方剂学杂志;2016年05期
5 刘文臣;郭书文;郑乘龙;王惠;张璐;吴佳妮;刘俊丽;黄小楼;李芳赫;谭晓波;蔡倩;;益气活血方对心肌缺血大鼠Akt/mTOR信号通路的影响[J];北京中医药大学学报;2017年05期
6 李奕;曾凡星;吴迎;廖静雯;;不同强度运动诱导Akt/mTOR信号对心肌肥大的作用研究[J];北京体育大学学报;2013年06期
7 王丹;孙刚;王瑶;;蒲黄总黄酮含药血清对巨噬细胞自体吞噬及Akt/mTOR信号通路的影响[J];实用医学杂志;2017年16期
8 李欣;;中等强度耐力训练对心脏Akt/mTOR信号通路表达的影响[J];北京体育大学学报;2014年08期
9 毕华强;刘辉;张曦;马宽生;张辉;;Akt/mTOR信号在转化生长因子-β诱导动脉内皮间质转化中的作用研究[J];中国普外基础与临床杂志;2017年07期
10 李欣;丁树哲;卢健;;耐力训练对衰老小鼠心肌Akt/mTOR信号通路的影响[J];中国运动医学杂志;2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李俊平;叶鸣;杨锐睿;张筱;;一次低氧暴露对骨骼肌Akt/mTOR信号通路的影响[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年
2 李丹丹;郭经锋;邓蓉;王琳琳;冯公侃;朱孝峰;;西米特酸抑制AKT/mTOR信号通路及其诱导肿瘤细胞自噬的研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
3 戴波;叶定伟;马春光;姚旭东;张世林;;Akt/mTOR信号传导通路在前列腺癌组织中的异常改变及其预后价值的研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
4 陈慧敏;文卫平;姜鸿彦;许庚;;Akt/mTOR信号途径与鼻咽癌生物学特性关系的研究[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(上)[C];2007年
5 纪超;何黎;毕志刚;;哌立福辛通过Akt/mTOR信号通路影响紫外线诱导的皮肤细胞凋亡的机制研究[A];2013全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编[C];2013年
6 廖静雯;石丽君;曾凡星;;运动经由Akt/mTOR通路调节高血压大鼠小动脉平滑肌功能[A];2015年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与心血管保护”学术研讨会论文摘要汇编[C];2015年
7 刘琼;周国民;;Akt/mTOR信号传导通路参与神经元程序性坏死的研究[A];华东六省一市第22届解剖与组织胚胎学学术年会暨山东解剖学会成立60周年纪念大会论文汇编[C];2013年
8 王威栋;徐艳;;晚期糖基化终末产物通过ERK1/2 MAPK、p38 MAPK和Akt/mTOR信号通路调节人牙周膜细胞自噬水平[A];第十次全国牙周病学学术会议论文摘要汇编[C];2014年
9 游红;卢伟;;SD大鼠脑缺血再灌注及丹参多酚酸盐干预后GOLPH3及Akt/mTOR信号通路表达变化的研究[A];中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编(下)[C];2014年
10 刘晓加;;ApoE4通过Akt/mTOR通路促进tau的磷酸化[A];中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编(下)[C];2015年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄文婷;Akt/mTOR信号通路在壬基酚诱导雄性生殖毒性中的作用[D];华中科技大学;2017年
2 马诗凝;针刀干预对膝骨关节炎模型兔股直肌Akt/mTOR通路相关基因、蛋白表达的影响[D];北京中医药大学;2018年
3 戴波;Akt/mTOR信号传导通路在前列腺癌中的异常改变及其意义[D];复旦大学;2008年
4 孙晓林;外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析[D];内蒙古农业大学;2017年
5 刘俊彪;曲古抑菌素A和他莫昔芬通过miR-204和ERα抑制AKT/mTOR通路而抑制乳腺癌细胞增生[D];武汉大学;2016年
6 全超;Akt/mTOR与线粒体信号通路在BPA诱导雄性大鼠生殖毒性中的作用[D];华中科技大学;2016年
7 易梅;RASSF1A基因通过调控细胞凋亡、细胞周期和AKT/mTOR信号通路抑制黑色素瘤A375细胞的机制研究[D];中南大学;2010年
8 段佳良;硫氧还蛋白相互作用蛋白在增殖性糖尿病视网膜病变中的作用及机制研究[D];河北医科大学;2017年
9 韩瑛光;Progranulin在股骨头坏死软骨退变及骨肉瘤中的作用及机制研究[D];山东大学;2017年
10 赵爽;关于CD147通过IGFBP2调控恶性黑色素瘤凋亡的体内外相关研究[D];中南大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 辛利;Akt/mTOR信号传导通路在胃癌组织中的表达及意义[D];泰山医学院;2012年
2 赵婧;胃肠胰神经内分泌肿瘤临床病理特征、Akt/mTOR通路及预后分析[D];复旦大学;2012年
3 王运起;肾透明细胞癌组织中AKT/mTOR信号通路的表达及意义[D];兰州大学;2010年
4 潘盼盼;黄芪甲苷联合川穹嗪对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及其基于Akt/mTOR的机制研究[D];浙江大学;2018年
5 陈亮;通心络联合津力达对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及其对Akt/mTOR信号转导通路的影响[D];河北医科大学;2013年
6 唐利花;姜黄素结合有氧运动对中老年大鼠骨骼肌Akt/mTOR信号通路的影响[D];湖南师范大学;2016年
7 王宇霆;乌司他丁通过Akt/mTOR通路保护受氧化应激的人脐静脉血管内皮细胞[D];浙江大学;2013年
8 刘倍贝;基于Akt/mTOR通路的白藜芦醇抗镉诱导神经细胞凋亡机理研究[D];南京师范大学;2017年
9 彭金珍;GOLPH3介导Akt/mTOR信号转导通路影响胃癌发生发展的机制研究[D];广西医科大学;2015年
10 陈海璇;干细胞因子SCF通过抑制AKT/mTOR信号通路促进脂肪干细胞的成骨分化[D];暨南大学;2016年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026