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《华中科技大学》 2017年
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还原自组装法制备免疫分析用磁性微球

汪业红  
【摘要】:生物大分子包裹了的超顺磁性的氧化铁纳米粒(SPIO)非特异吸附性低、生物相容性好、且具有活性功能性基团,便于偶联生物活性分子,在外加磁场作用下容易进行分离和导向,广泛应用于免疫分析、靶向药物、细胞快速分离、酶固定等领域。本文首次用3PM作为还原剂,还原自组装法成功制备出生物大分子牛血清白蛋白(BSA)包裹的磁性微球,并将其应用于磁性免疫层析中。主要研究内容及结论包括:1)重现文献报导的还原自组装法制备白蛋白纳米粒的实验结果,首次使用3PM作为还原剂制备了BSA纳米粒。2)结合以上最优条件,还原自组装法制备BSA包裹热分解SPIO(SPIO@BSA~T)。收集的磁性微球,动态光散射(DLS)测得其粒径为223.1 nm,PDI为0.148;电镜下呈球形;TG表征磁含量约为61.53%;在pH 8.0的tris buffer、MBW、0.1%BSA溶液中粒径保持稳定,说明BSA不易从SPIO上解离下来;磁分离性较好;非特异性吸附低;经鉴定在制备的过程中加入IgG的一步法比EDC/NHS法偶联得到的免疫磁性微球的活性高。用该法偶联AFP单克隆抗体,双抗夹心磁性免疫层析检测AFP抗原,光学比色法检测IC_(50)为7.53 IU/mL。3)还原自组装法制备BSA包裹共沉淀SPIO(SPIO@BSA~C),均一的产物粒径在350~550 nm之间。反应15 min收集的磁性微球,DLS测得其粒径为543.1,PDI为0.128;电镜下呈球形,TG表征磁含量约为58.23%,偶联抗体后磁层析,虽证明其有活性,但由于磁性微球粒径较大,在NC膜底部有堵塞,不适合用于磁层析试验。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R446.6

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