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《华中科技大学》 2006年
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Ⅰ. CDH1基因转录调控区基因多态性与膀胱移行细胞癌的关系研究 Ⅱ. 后腹腔镜包膜下肾切除术治疗感染性无功能肾的临床研究

马鑫  
【摘要】:目的:回顾性研究三种提取人全血基因组DNA方法(DNA提取试剂盒标准方法、酚—氯仿抽提法和Miller盐析法)可否用于检测基因多态性,同时比较三种方法提取DNA的总量、纯度、提取效率和实验费用的差异; 方法:分别用DNA提取试剂盒标准方法(n=42)、酚—氯仿抽提法(n=11)和Miller盐析法(n=14)从300μl外周静脉血提取人全血基因组DNA;比色法测定所获DNA的总量和纯度;记录每种方法所耗时间,计算提取效率;以提取的DNA为模板,做PCR预试验; 结果:DNA提取试剂盒标准方法、酚—氯仿抽提法和Miller盐析法从300μl外周静脉血中提取的人全血基因组DNA均可用于检测基因多态性;三种方法提取的DNA总量分别为5.1±0.9μg、6.8±1.6μg和2.3μg(Median,中位数);DNA提取试剂盒标准方法和酚—氯仿抽提法提取的DNA总量明显高于Miller盐析法,差异有统计学意义(DNA提取试剂盒标准方法与酚—氯仿抽提法,P>0.5;DNA提取试剂盒标准方法与Miller盐析法比较,P<0.01;酚—氯仿抽提法与Miller盐析法比较,P<0.01;)。三种方法提取的DNA纯度分别为1.68±0.25、1.54±0.38和1.63±0.19,组间差异无统计学意义(两两比较,P值均>0.5)。DNA提取试剂盒标准方法提取DNA时间明显短于其他二种方法(与其他二种方法比较,P值均<0.01,差异有统计学意义),而实验费用明显增多(与其他二种方法比较,P值均<0.01,差异有统计学意义)。 结论:三种方法提取的DNA纯度相似,均可用于检测基因多态性;其中DNA提取试剂盒标准方法操作较简单、提取效率高,但费用较高;酚—氯仿抽提法提取的DNA总量较Miller盐析法多。应根据实验经费额度和实验进度要求选用合适的方法。 目的 回顾性研究CDH1基因启动子近侧序列-160位点C/A SNP(rs16260)与膀胱移行细胞癌(Transitional Cell Carcinoma of Bladder,TCCB)的发生、临床分期和病理分级之间的关系。 方法 实验组膀胱移行细胞癌50例,为同济医院泌尿外科收治的住院患者;对照组50例,为同期收治的非肿瘤患者,包括泌尿系结石、损伤、非特异性感染、前列腺增生症和鞘膜积液等。采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析技术(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)分析每例样本CDH1基因启动子近侧序列-160处C/A SNP。 1.采集患者外周静脉血样本,标准方法从血液中提取人基因组DNA。 2.PCR获取包含CDH1基因启动子近侧序列-160位点的DNA片段。 3.分别用限制性内切酶HphⅠ和AflⅢ将PCR所得DNA片段酶切,酶切产物4%琼脂糖凝胶电泳,不同的电泳结果分别对应CDH1基因启动子近侧序列-160位点不同的基因型。 结果 肿瘤组CDH1基因启动子近侧序列-160处A等位基因频率高于对照组(P<0.01);肿瘤组中浸润性膀胱移性细胞癌A等位基因频率高于浅表性膀胱移性细胞癌(P<0.05);而病理分级不同的膀胱移性细胞癌样本间A等位基因频率差异无显著性意义(P>0.05)。与仅携带C等位基因者相比,A等位基因携带者患TCCB的危险较高(OR=4.16,95%CI1.74-9.93);与基因型为CC者相比,AC(OR=3.48,95%CI 1.26-9.63)和AA(OR=4.91,95%CI 1.79-13.45)基因型患TCCB的危险较高。 结论 上皮钙粘连素基因启动子近侧序列-160处A等位基因频率与膀胱移行细胞癌的发生及其侵袭能力密切相关。该SNP可能成为判断膀胱移性细胞癌预后的 指标。 目的:回顾性研究CDH1基因Intronl+234位点插入/缺失多态性(rs3833051)TCCB患病风险间的关系; 方法:实验组膀胱移行细胞癌130例,为同济医院泌尿外科收治的经病理检查确诊断TCCB患者;对照组60例,为包括健康志愿者和同期收治的非肿瘤患者。基因测序确定每例样本CDH1基因Intronl+234位点插入/缺失基因型。 1.采集患者外周静脉血样本,标准方法从血液中提取人基因组DNA; 2.PCR获取包含CDH1基因-160位点和Intronl+234位点的DNA片段; 3.基因测序确定每例样本CDH1基因-160位点SNP基因型和Intronl+234位点插入/缺失基因型; 4.SPSS软件计算CDH1基因Intronl+234位点插入/缺失基因型与TCCB发病率、临床分期和病理分级之间的统计学关联; 5.PHASE软件筛选CDH1基因-160—+234单体型并进行连锁不平衡分析;进行不同的单体型和TCCB发病率、临床分期和病理分级之间的遗传学关联分析。 结果:CDH1基因-160位点基因型和TCCB表型的关系与实验结果一致;基因测序结果显示Intronl+234位点插入片断碱基序列为5’-CCGTGCCCCAGCC-3’,其插入/缺失多态性基因型分为插入\插入纯合子(I/I)、缺失\缺失纯合子(D/D)和插入\重复插入杂合子(I/2I)三种;肿瘤组CDH1基因Intronl+234位点重复插入片段(2I)频率高于对照组(P<0.05);肿瘤组中浸润性和浅表性膀胱移性细胞癌组间重复插入片段(2I)频率差异无统计学意义(P>0.05);病理分级不同的膀胱移性细胞癌样本间重复插入片段(2I)频率差异无统计学意义(P>0.05)。 与 I/I基因型相比,I/2I基因型患TCCB的危险较高(OR=2.22,95%CI1.17-4.21)。 PHASE软件筛选单体型分布结果显示:肿瘤组中-160A/A-+234I/2I基因型频率明显高于对照组,差异有统计学意义(x~2=6.50,P<0.05);-160C/C-+234I/I基因型频率明显低于对照组,差异有统计学意义(x~2=7.09,P<0.01);-160A/C-+234I/I基因型频率明显低于对照组,差异有统计学意义(x~2=5.26,P<0.05);与-160C/C-+234I/I基因型相比,-160A/A-+234I/2I基因型携带者患TCCB风险较高(OR=6.61,95%CI=1.93~22.64);而与-160A/C-+234I/I基因型相比,-160A/A-+234I/2I基因型携带者患TCCB风险并不升高(OR=1.31,95%CI=1.93~3.99)。 结论 CDH1基因-160位点A等位基因频率与TCCB的发生及其侵袭能力密切相关;CDH1基因Intronl+234位点重复插入片段(2I)频率与TCCB的发病率密切相关;-160A/A-+234I/2I基因型携带者患TCCB风险较高,而-160C/C-+2341/I基因型携带者患TCCB风险较低。 目的:探讨后腹腔镜包膜下肾切除术的技术方法和临床应用价值。 资料与方法:12例患者,包括结核性脓肾5例,肾积脓行肾造瘘术后7例;其中男8例,女4例,年龄35~66岁,平均41.4±9.2岁,左侧7例,右侧5例。所有患者均行后腹腔镜包膜下。肾切除术。观察手术时间、术中出血量、术后肠功能恢复和术中、术后并发症及手术效果。本术式关键是处理肾蒂。紧靠肾门处用超声刀剪开肾包膜,分离肾窦脂肪组织,使肾蒂组织薄到足以用Endocut离断。 结果:12例手术均获成功,无中转开放。平均手术时间82.9±22.3min,术中出血量平均51.4±12.2ml,术后肠功能恢复时间24~48h,术后平均住院时间7.5天,术中及术后无明显并发症。随访1~15月,近期效果满意。 结论:该术式具有微创、出血少、恢复快、近期效果好等特点,较好地解决了感染性无功能肾脏与周围组织粘连严重时,后腹腔镜肾切除的难题。临床应用前景良好。但手术操作难度较大,术者需具备一定的腹腔镜手术经验。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R737.14;R699

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