收藏本站
《华中科技大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

反义缺氧诱导因子-1α治疗胰腺癌及其作用机制的实验研究

常青  
【摘要】: 胰腺癌是人体最常见的恶性肿瘤之一,其患病率在世界范围呈上升趋势。胰腺癌由于恶性程度高、手术切除率低、早期诊断困难,治疗的效果不尽人意。近年来各种手术方式的改进以及化疗、放疗方案等综合措施的引进,手术并发症和死亡率有所降低,但5年生存率仍提高不多。随着免疫和分子生物学在肿瘤的发生、发展和转移机制研究的不断深入,为胰腺癌的治疗提供了新的希望。 近年来发现,缺氧是影响化疗效果而且干扰了肿瘤对放疗的反应的一个重要因素。胰腺癌血供很差,在严重缺氧时还能继续增殖的原因可能在于持续缺氧的状态诱导了胰腺癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α的表达。研究表明,血管内皮生长因子(VEGF)和糖酵解过程中多种关键酶基因都是受HIF-1α调控的,HIF-1α通过促进肿瘤组织的血管生成和能量代谢加速肿瘤组织的生长,同时也促进了肿瘤的侵袭和转移。HIF-1α在胰腺癌中广泛表达,对胰腺癌的血管生成、发生发展起到了很大的作用。而已有实验表明,人类凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein,hIAP)家族成员之一survivin在胰腺癌中高表达,且与化疗敏感性有关;整合素家族中β_1-integrin在胰腺癌侵袭、转移过程中也起着重要的作用。 本研究旨在观察反义HIF-1α对胰腺癌生长、转移、化疗敏感性的影响及其与survivin、β_1-integrin的关系。本实验共分为以下四部分。 第一部分缺氧诱导因子-1α在胰腺癌中的表达和意义 目的 本研究旨在检测胰腺癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,探讨HIF-1α的表达与临床特征的关系,从而深入探讨其在胰腺癌发生发展中的作用。 材料和方法 运用免疫组织化学技术(streptavidin-peroxidase,SP)检测研究48例胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α的表达。 结果 1.48例胰腺癌标本中27例表达HIF-1α蛋白,而在癌旁组织未检测到HIF-1α的表达(P<0.01)。 2.HIF-1α蛋白的表达与胰腺癌患者的性别、年龄和肿瘤大小无关,与胰腺癌的分化程度及是否转移有关(P<0.05)。 结论 1.HIF-1α在胰腺癌中高度表达,在癌旁胰腺组织未见表达,可能与胰腺癌的发生发展或与治疗效果有关,但其具体作用及作用机制均有待进一步深入的研究。 2.HIF-1α与胰腺癌患者预后的密切相关。 第二部分重组表达质粒pcDNA3.1(+)/反义HIF-1α的构建及其在人胰腺癌细胞株BxPc-3中的稳定表达 目的 第一部分显示,胰腺癌高表达HIF-1α蛋白,本部分拟构建HIF-1α基因的反义表达核苷酸,经脂质体转染人胰腺癌细胞株BxPc-3,建立稳定表达反义HIF-1α基因的细胞模型,为反义封闭治疗奠定基础。 方法 1.采用PCR方法扩增pCR3.1-FLAG-HIF-1α质粒中反义HIF-1α基因功能片段。 2.定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上。 3.转染至BxPc-3细胞内,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1α反义基因的细胞株。 4.RT-PCR和Western blot分析HIF-1α的表达,建立稳定表达HIF-1α反义基因的细胞株。 结果 1.酶切鉴定,凝胶电泳分析,两条带大小分别为721bp和5.4kb,与预期结果符合。 2.脂质体包裹转染BxPc-3后,RT-PCR和Western blot分析证实实验组HIF-1αmRNA表达为0.2367±0.0094,蛋白表达为0.1798±0.0063,与对照组相比明显降低(P<0.05)。 结论 1.本研究成功构建了HIF-1α的反义核苷酸,与预期结果符合。 2.经脂质体途径转染BxPc-3细胞,该反义核苷酸能够抑制HIF-1α的表达。 3.该反义核苷酸的成功构建为下一步实验研究奠定了基础。 第三部分反义HIF-1α增加化疗药物敏感性的实验研究 目的 本研究拟利用构建的反义HIF-1α,转染BxPc-3细胞后,观察BxPc-3细胞对化疗药物敏感性的变化及其与survivin的关系。 方法 1.将HIF-1α反义核苷酸转染至BxPc-3细胞,经G418筛选后,建立稳定表达反义HIF-1α的BxPc-3细胞株,加入不同浓度的氟尿嘧啶,阿霉素,吉西他宾。 2.MTT检测各组的增殖活性。 3.运用流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数。 4.RT-PCR和Western blot分析各组survivin的表达。 结果 1.与对照组相比,实验组的生长抑制率、凋亡率与剂量成正比,高剂量引起高抑制(P<0.05)。 2.实验组survivin的mRNA表达为0.4601±0.0122,蛋白表达为0.3659±0.0117,与对照组相比明显降低(P<0.05)。 结论 转染反义HIF-1α基因可明显增强氟尿嘧啶,阿霉素,吉西他宾对胰腺癌细胞的杀伤力,并伴有survivin表达量的明显下调,这表明反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性,因此,阻断HIF-1α的表达可望成为胰腺癌基因治疗的新途径。 第四部分反义HIF-1α对胰腺癌生长、转移影响的实验研究 目的 本研究拟利用构建的反义HIF-1α,转染BxPc-3细胞后,观察其对胰腺癌生长、转移的影响及其与β_1-integrin的关系。 方法 1.将HIF-1α反义核苷酸转染至BxPc-3细胞,经G418筛选后,建立稳定表达反义HIF-1α的BxPc-3细胞株,Transwell侵袭室方法检测BxPc-3细胞侵袭能力。 2.RT-PCR和Western blot分析各组β_1-integrin的表达。 3.裸鼠皮下接种各组处理细胞8周后,观察其肿瘤生长情况。 结果 1.实验组迁移的细胞数为110.64±16.4,远少于对照组(P<0.05)。 2.实验组β_1-integrin的mRNA表达为0.2568±0.0115,蛋白表达为0.2962±0.0167,与对照组相比明显降低(P<0.05)。 3.实验组肿瘤的体积、重量、生长速度远低于对照组(P<0.05)。 结论 转染反义HIF-1α基因可明显抑制胰腺癌细胞的侵袭力,并伴有β_1-integrin表达量的明显下调且抑制了皮下移植瘤的生长,这表明反义HIF-1α可能通过阻断β_1-integrin的表达而抑制胰腺癌的生长和转移。因此,阻断HIF-1α的表达可望成为胰腺癌基因治疗的新途径。 本课题提出以下新见解: 1.HIF-1α在胰腺癌中高度表达,在癌旁胰腺组织未见表达,提示HIF-1α在胰腺癌的发生发展或或治疗效果中发生重要的作用。 2.本文探讨了HIF-1α的表达与胰腺癌患者临床特征的关系,结果显示HIF-1α蛋白的表达与胰腺癌患者的性别、年龄和肿瘤大小无关,而与胰腺癌的分化程度及是否转移有关,提示HIF-1α与胰腺癌患者预后的密切相关。 3.本研究成功构建了HIF-1α的反义核苷酸,与预期结果符合。经脂质体途径转染BxPc-3细胞,可在BxPc-3中稳定表达,该反义核苷酸能够抑制HIF-1α的mRNA和蛋白的表达。 4.缺氧状态下,反义HIF-1α基因可明显增强氟尿嘧啶,阿霉素,吉西他宾对胰腺癌细胞的杀伤力,并伴有survivin表达量的明显下调,这表明反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性。 5.缺氧状态下,反义HIF-1α基因可明显抑制胰腺癌细胞的侵袭力,并伴有β_1-integrin表达量的明显下调且抑制了皮下移植瘤的生长,这表明反义HIF-1α可能通过阻断β_1-integrin的表达而抑制胰腺癌的生长和转移。因此,阻断HIF-1α的表达可望成为胰腺癌基因治疗的新途径。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R735.9

【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭文佳;张丽萍;王洪江;李卉;庞作良;李惠武;;Survivin调控相关基因在新疆哈萨克族食管癌中的表达[J];癌变·畸变·突变;2011年04期
2 韦淑琴,毕胜,郑建华,张广美,隋丽华,潘尚哈;Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用[J];癌症;2004年08期
3 阮菲,解先宽,刘少阳;Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌耐药细胞COC_1/DDP抑制的实验研究[J];癌症;2004年08期
4 颜笑健;梁立治;曾宗渊;石智;符立梧;;Survivin shRNA增强人卵巢癌耐药细胞OVCAR3对泰素敏感性的研究[J];癌症;2006年04期
5 杨涛;张伶;严飞;仝爱平;刘新宇;刘涣义;黄灿华;;应用蛋白质组学技术研究反义Cyclin B1的抗肿瘤作用机制[J];癌症;2007年03期
6 ;EGFR inhibitors sensitize non-small cell lung cancer cells to TRAIL-induced apoptosis[J];癌症;2011年10期
7 陈余清;赵成岭;李伟;;非小细胞肺癌中survivin和HIF-1α的表达及其相关性研究[J];蚌埠医学院学报;2008年06期
8 张文梁;王举;王有德;;Survivin基因和蛋白的分子生物学研究进展[J];吉林大学学报(医学版);2006年05期
9 王建伟;;Survivin mRNA在肾透明细胞癌组织和外周血中表达的研究[J];滨州医学院学报;2008年03期
10 谷蕾;吕喜英;;厄洛替尼及Survivin siRNA与非小细胞肺癌[J];承德医学院学报;2010年03期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 焦健华;Opsin3基因与人肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性关系的研究[D];南京医科大学;2009年
2 侯进琳;临床病理因素及FREM1,GSTT1,ISG20L1,STARD5,15q25.3与卵巢上皮癌紫杉醇联合铂类化疗疗效的相关性研究[D];北京协和医学院;2010年
3 于慧美;多功能蛋白p62在人卵巢癌细胞耐药中的作用及其机制的研究[D];吉林大学;2011年
4 蔡华华;恶性黑素瘤中SOX4的表达及其对Wnt/β-catenin信号途径作用的研究[D];华中科技大学;2011年
5 郝骏;microRNA对胰腺癌DPC4/Smad4基因转录后调控及功能机制研究[D];第二军医大学;2011年
6 屈永涛;低氧微环境对体外培养hep-2头颈鳞癌细胞系CSC增殖与分化的影响[D];河北医科大学;2011年
7 张涛;融合蛋白介导抗H5N1禽流感病毒靶向制剂研究[D];北京协和医学院;2011年
8 王学东;Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌多药耐药中的作用及机制研究[D];中南大学;2011年
9 何年安;超声靶向微泡破坏促进基因转染与药物传送的实验研究[D];复旦大学;2011年
10 关玉娟;乳岩宁与三苯氧胺联合抗乳腺癌作用及其机制的研究[D];辽宁中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王玉瑾;STAT3和hTERT在视网膜母细胞瘤中的表达及临床病理意义[D];兰州大学;2010年
2 柳忠兴;CD147和Survivin在骨巨细胞瘤中的表达及其临床意义[D];泰山医学院;2010年
3 李筠;Survivin、Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变Leep治疗前后的表达及意义[D];泰山医学院;2007年
4 廖鹏飞;Survivin在膀胱癌中的研究[D];桂林医学院;2010年
5 银晶晶;小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响[D];山西医科大学;2011年
6 白佳辉;细胞粘附肽RGD(S)抑制人胃癌细胞系MKN-45的实验研究[D];吉林大学;2011年
7 赵震宇;Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究[D];昆明医学院;2011年
8 林青;白术内酯Ⅰ对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞存活素survivin表达的拮抗作用及促凋亡作用[D];成都中医药大学;2011年
9 张文婷;地高辛对人恶性淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制的研究[D];河北医科大学;2011年
10 王秋菊;Ezrin蛋白、CD44v6与子宫颈癌转移的相关性研究[D];河北医科大学;2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郁斯清;吴裕炘;唐振铎;徐家裕;;胰腺癌的诊断[J];国际消化病杂志;1981年04期
2 杨福钧;;胰腺癌的早期诊断[J];河北医科大学学报;1982年01期
3 孟济明,沈茜,张洪富,吴月琴,姚光弼;胰腺癌组织抗原提取及临床检测[J];第二军医大学学报;1988年03期
4 宫轲,伍福乐;胰腺癌早期诊断的进展[J];江苏医药;1988年06期
5 沈魁;;胰腺癌诊断和治疗的进展[J];腹部外科;1988年03期
6 傅德良;神经紧张素调节人体胰腺癌的生长[J];国际外科学杂志;1993年06期
7 胡先贵,唐岩,刘瑞,王本茂;提高胰腺癌的切除率[J];中华普通外科杂志;1994年06期
8 奚美芳,张启春,郑穗生,陈阿娜;31例胰腺癌的CT诊断分析[J];安徽医科大学学报;1994年04期
9 王沛,张耀圣;第6讲胰腺癌[J];中国临床医生;1994年10期
10 李增灿,陈频佳,侯朋,陈田,李杨,孟庆峰;超声引导下介入并中药治疗胰腺癌8例[J];医学理论与实践;1996年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 常青;秦仁义;;反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌生长、转移的影响[A];中华医学会第十一届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2006年
2 常青;秦仁义;;反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌化疗敏感性的影响[A];中华医学会第十一届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2006年
3 郭晓钟;陈江;刘峰;任丽楠;王迪;赵佳钧;邵晓冬;李宏宇;刘旭;;人胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞诱导特异性抗肿瘤免疫反应的体外实验研究[A];第九次全国消化系统疾病学术会议专题报告论文集[C];2009年
4 蔡建庭;马望前;陆新良;杜勤;钱可大;;内镜下逆行胰胆管造影术对胰腺癌诊断价值的研究[A];2005年浙江省消化系疾病学术会议论文汇编[C];2005年
5 汤永辉;高乃荣;石欣;;胰腺癌相关基因研究进展[A];中华医学会第十一届全国胰腺外科学术研讨会论文汇编[C];2006年
6 余中逊;;62例老年人胰腺癌临床分析[A];中国中西医结合学会第十三次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2001年
7 王绵;赵战胜;周红;张力辉;;胰腺癌伴发糖尿病15例分析[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年
8 高庆军;窦剑;王志通;曹经琳;邸恩昌;;术中应用射频消融治疗胰腺癌[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
9 吴艳辉;骆科美;刘靓;;超声检查在胰腺癌临床诊断的应用分析[A];第二十四届航天医学年会暨第七届航天护理年会论文汇编[C];2008年
10 周志刚;王振豫;王军委;;放射与5-Fu粒子联合植入治疗胰腺癌[A];中国(第七届)肿瘤微创治疗学术大会暨世界影像导引下肿瘤微创治疗学会成立筹备大会论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中国抗癌协会胰腺癌协会专业委员会副主任委员、复旦大学附属华山医院胰腺癌诊治中心常务副主任、外科教授 张群华;胰腺癌——有则治之 无则防之[N];文汇报;2009年
2 复旦大学中山医院胰腺癌诊治中心教授 倪泉兴 李娜整理;胰腺癌诊治注意什么[N];健康报;2009年
3 保健时报特约专家 郝纯毅;偷偷隐藏的胰腺癌[N];保健时报;2007年
4 上海中医药大学教授、博士生导师 何裕民;胰腺癌跃居“癌中之王”(二)[N];医药养生保健报;2006年
5 河北省中医院肿瘤内科主任、主任医师 刘经选;胰腺癌的发生与5种因素有关[N];河北农民报;2008年
6 武汉大学人民医院副研究员 罗照春;吸烟与胰腺癌的数据解析[N];健康报;2008年
7 天津肿瘤医院胰腺肿瘤科主任 郝继辉;早期胰腺癌酷似胃病[N];健康时报;2009年
8 报道员 周谷风;西蓝花有助抑制胰腺癌复发[N];新华每日电讯;2010年
9 李钦俦;警惕胰腺癌的早期“信号”[N];家庭医生报;2008年
10 特约记者 吴倪娜;有些症状应该高度怀疑“胰腺癌”[N];卫生与生活报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 常青;反义缺氧诱导因子-1α治疗胰腺癌及其作用机制的实验研究[D];华中科技大学;2006年
2 方薛泉;Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞株氟尿嘧啶化疗敏感性的影响研究[D];中国协和医科大学;2010年
3 段小辉;MICA在NK细胞杀伤胰腺癌中的作用以及吉西他滨对胰腺癌细胞MICA蛋白脱落的影响[D];中南大学;2010年
4 刘哲;胰腺癌患者肿瘤组织及外周血浆中癌基因和抑癌基因的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
5 张建军;TLR4受体及其信号通路在胰腺癌进展中的作用[D];华中科技大学;2010年
6 李军建;miR-181a—CARF靶向关系在胰腺癌中的研究[D];浙江大学;2011年
7 李志伟;胰腺癌外科治疗的临床研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
8 吕顺莉;PCDH8和LRRC55基因异常甲基化在胰腺癌发病中的作用研究[D];第二军医大学;2010年
9 朱世凯;缺氧微环境中HIF-1α诱导MT2-MMP表达及对胰腺癌侵袭和转移作用的机制研究[D];华中科技大学;2010年
10 蔡清萍;三联脆组基因在胰腺癌发生发展中的变化及对其增殖的影响和作用机制的初步探讨[D];第二军医大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨新焕;慢性胰腺炎和胰腺癌的磁共振PWI应用研究[D];昆明医学院;2010年
2 蒋志斌;DNA甲基转移酶1、3b与p16蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义[D];南昌大学;2010年
3 王卫卫;miR-223在胰腺癌发病中的作用研究[D];第二军医大学;2011年
4 董家刚;Trophinin基因在胰腺癌组织中的表达及其临床意义[D];重庆医科大学;2011年
5 宋芳;冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞的生长抑制作用及其机制研究[D];苏州大学;2010年
6 王莹;基于重复结构卡的胰腺癌放疗MCNP模拟[D];东北师范大学;2010年
7 余志良;胰腺癌临床特征的流行病学研究[D];第二军医大学;2002年
8 胡晓宇;不可手术胰腺癌~(125)Ⅰ植入治疗的系统评价[D];新疆医科大学;2010年
9 陶冶;多层螺旋CT血管造影对胰腺癌可切除性评估的临床研究[D];吉林大学;2010年
10 杨晓鹤;不同b值磁共振扩散加权成像在胰腺肿瘤的应用研究[D];昆明医学院;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026