收藏本站
《华中科技大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

真核细胞翻译起始因子4E在慢性粒细胞白血病中的作用研究

赵艳霞  
【摘要】: 第一部分EIF4E在白血病和淋巴瘤细胞系中的表达 目的探讨真核细胞翻译起始因子4E(EIF4E)在人白血病和淋巴瘤细胞系中的表达。 方法采用RT-PCR和western-blot方法研究了6株人白血病、淋巴瘤细胞系(人急性单核细胞白血病细胞系U937,人急性早幼粒细胞白血病系HL60,人慢性粒细胞白血病细胞系K562,人急性淋巴细胞白血病细胞系Molt-4,人Burkit淋巴瘤细胞系Raji和Daudi)和正常人外周血单个核细胞EIF4E的表达。 结果EIF4E在人白血病、淋巴瘤细胞系和正常人外周血单个核细胞中均有表达,正常人外周血单个核细胞EIF4E低度表达,而6株人白血病细胞系都在mRNA水平高表达EIF4E, K562、Molt-4、HL60、Raii、Daudi和U937细胞中,EIF4E表达的平均相对吸光度值分别为HL-60:(1.12±0.03)、Molt-4: (3.20±0.08)、K562: (4.11±0.03)、Raji: (4.92±0.03)、Daudi: (3.73±0.02)、U937:(2.06±0.03),而正常人EIF4E表达的平均相对吸光度值为0.30±0.02;同时,EIF4E蛋白在各株细胞系中均有强度不等的表达,在6个细胞系中,EIF4E表达的平均相对吸光度值分别为HL-60:(0.72±0.11)、Molt-4:(1.30±0.08)、K562:(1.86±0.03)、Raji: (3.42±0.23)、Daudi: (3.02±0.17)、U937: (1.39±0.03),而正常人EIF4E表达的平均相对吸光度值为0.39±0.06。可见RT-PCR检测mRNA表达高的细胞系,其蛋白表达水平也同样高,EIF4E蛋白水平的实验结果与RT-PCR结果一致。 结论EIF4E可能在白血病和淋巴瘤的发生发展中起一定作用。 第二部分正、反义EIF4E真核表达载体的构建及鉴定 目的构建正、反义人全长EIF4E基因真核表达质粒,为研究EIF4E基因功能提供工具。 方法根据EIF4E基因cDNA序列中编码序列,设计PCR引物,在上下游引物5'端分别添加ApaⅠ和KpnⅠ酶切位点,RT-PCR从K562细胞中获得760bp的DNA片断,然后将该片断正、反向插入真核表达载体pEGFP-C1的多克隆位点,构建正、反义EIF4E基因片断真核表达质粒,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。 结果PCR鉴定得到512bp特异条带,双酶切鉴定得到760bp片断和4.7kb载体片断,DNA测序说明插入片断序列是正确的。DNA测序说明插入片段序列与人EIF4E基因的cDNA序列完全相同,说明克隆至pEGFP-C1多克隆位点上的DNA片段序列是正确的。 结论通过基因克隆技术,成功构建了正、反义EIF4E基因真核表达质粒,为进一步研究EIF4E基因功能提供了实验工具。 第三部分EIF4E对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响 目的翻译控制在肿瘤细胞早期发展、分化和细胞周期过程中起着重要的作用。翻译起始因子是真核细胞翻译过程的限速因子,在CML患者白血病细胞和CML细胞系K562中高表达。本文旨在研究EIF4E对CML细胞增殖的影响。 方法正、反义重组EIF4E质粒电转染至K562细胞中,采用G418稳定筛选转染正义EIF4E质粒(pEIF4E)的稳定细胞系,流式细胞仪分选瞬时转染反义EIF4E质粒(pEIF4Eas)的细胞。通过流式细胞术和荧光显微镜观察确定细胞转染效率,RT-PCR,western-blot和免疫细胞化学检测EIF4E蛋白和mRNA水平的改变。体外观察EIF4E表达改变对K562细胞周期、增殖和cyclinDl表达的影响。 结果成功获得转染重组正义EIF4E质粒后的阳性细胞克隆(pEIF4E/K562),相对于转染空质粒和未转染的K562细胞,pEIF4E/K562细胞EIF4E的mRNA和蛋白表达明显增高且细胞生长加速。相反,通过流式细胞术分选pEIF4Eas/K562细胞,免疫细胞化学和激光共聚焦检测其EIF4E蛋白表达下调,同时出现了明显的G1期阻滞和G1期正调控基因cyclin D1表达下调。 结论EIF4E基因在慢性粒细胞白血病细胞系K562的细胞增殖中起重要作用,其表达增高促进K562细胞的增殖。第四部分EIF4E对慢性粒细胞白血病细胞分化的影响 目的研究表明,EIF4E不仅和肿瘤细胞的恶性增殖密切有关,还与某些肿瘤细胞的分化密切相关,多数情况下,EIF4E表达上调可阻滞肿瘤细胞的诱导分化。失分化和恶性增殖是白血病细胞的特征,为此,我们研究了EIF4E在诱导慢性粒细胞白血病细胞分化中的作用。 方法以pEIF4E/K562、pEGFP-C1/K562和K562细胞为研究对象,分别以Hu、TPA和HMBA为诱导剂诱导向红细胞系、巨核细胞系及单核巨噬系分化。采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞诱导前后形态改变,并采用联苯胺染色、CD41和CD14的表达率分别检测诱导后红系祖细胞、巨核细胞和单核细胞的表达率。 结果pEGFP-C1/K562和K562细胞在诱导后分别向红细胞祖细胞、巨核细胞及单核细胞的形态转变,而pEIF4E/K562在诱导前后形态转变不明显。pEGFP-C1/K562和K562细胞经Hu诱导后OD值明显上升,pEIF4E/K562细胞经Hu诱导后OD值无明显上升;pEGFP-C1/K562和K562细胞经TPA和HMBA诱导后,其CD41和CDl4的表达率上升,而pEIF4E/K562细胞的表达率无明显上升。 结论EIF4E的表达上调可阻滞K562细胞的分化,可能在慢性粒细胞白血病失分化的发病机制中起到了重要的作用。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R733.7

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王志强;吴自勍;黎相照;杨建芳;黄学平;李锋;周新华;赵彤;;3株弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系的鉴定与临床病理相关分析[J];热带医学杂志;2011年04期
2 王小梅;胡国艳;刘伟;郑淑华;吕晶;王红梅;徐军发;;血液系统恶性肿瘤患者血清可溶性B7-H4的检测及其临床意义[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年09期
3 吴汉新;敖忠芳;朱广荣;夏薇;;淋巴瘤、白血病患者ESOD活性测定[J];南京医科大学学报(自然科学版);1991年03期
4 刘小军;张济;余海仁;;7例骨髓坏死患者的实验室检查及临床分析[J];南华大学学报(医学版);2007年05期
5 赵彤,吴自勍,齐宗利;套细胞淋巴瘤与细胞周期调控基因[J];医学综述;2001年01期
6 贺抗;牛艳萍;;淋巴瘤与白血病患者血清铁蛋白、叶酸、VB_(12)值的临床意义[J];山西医科大学学报;1985年04期
7 姜明来;张开基;李辉;李青云;邹志;李万成;;丙戊酸对肺癌细胞系A549增殖和凋亡影响的研究[J];中华肿瘤防治杂志;2008年12期
8 范红;程远东;孙哲;吕晓东;;塞来昔布对人淋巴瘤细胞株Raji增殖、凋亡及存活素表达的影响[J];中国老年学杂志;2010年17期
9 承璐雅;黄伟;周剑锋;刘文励;;Plk1在急性白血病患者中的表达及其意义[J];中华血液学杂志;2006年08期
10 王锐;成诗银;催鹏程;张惠中;林芳;王希;;shRNA沉默eIF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响[J];中国药业;2008年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 余优成;张志愿;陈万涛;周晓健;潘红芽;张萍;徐骎;;erbB-3结合蛋白ebp1对舌鳞癌细胞系Tca8113抑制作用的实验研究[A];2004年口腔颌面肿瘤基础研究学术研讨会会议日程及论文集[C];2004年
2 高晓东;沈志祥;;NK细胞恶性疾病研究进展[A];第九次全国血液学学术会议继续医学教育资料汇编[C];2006年
3 熊竹娟;孔佩艳;刘红;;侵袭性NK/T细胞淋巴瘤/白血病的临床特征——2例报道并文献复习[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
4 江莲;白涛敏;赵孝先;金江;刘翠平;曲凡;朱秀丽;;西罗莫司对Raji细胞增殖、凋亡影响的研究[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
5 勇威本;;抗CD20单抗治疗B细胞淋巴瘤的现状和前景[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年
6 刘开彦;;异基因造血干细胞移植治疗淋巴瘤进展[A];第十次全国淋巴瘤学术会议论文汇编[C];2007年
7 殷莹;沈宇清;张建琼;窦非;陈爱琴;缪凤琴;谢维;;Presenilin/γ-Secretase对肝癌发生发展作用的初步研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
8 杨华;吕红波;王连有;;儿童非霍奇金淋巴瘤的免疫表型及BCL-2蛋白表达的临床意义[A];第十一届中国抗癌协会全国淋巴瘤学术大会教育论文集[C];2009年
9 施若非;赵肖庆;郑捷;;母细胞性NK细胞淋巴瘤——附二例报告[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
10 赵义;栗占国;向志光;张连峰;陈振军;;人类白细胞抗原-DR4(*0405)表达细胞系的建立[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 岳阳;原发性渗出性淋巴瘤的治疗研究取得进展[N];中国医药报;2009年
2 沈悌 谢海燕 北京协和医院血液科;注意防范淋巴瘤的袭击[N];上海中医药报;2009年
3 本报记者 李天舒;淋巴瘤:复杂的“单驼峰”发病曲线[N];健康报;2009年
4 主任医师 佟苪;预防淋巴瘤细节很重要[N];医药养生保健报;2009年
5 北京肿瘤医院 刘晨;淋巴瘤发现早期症状极关键[N];北京日报;2009年
6 孙理 张长鑫 本报记者 赵琳;恶性淋巴瘤到底有多“恶”[N];哈尔滨日报;2009年
7 健康时报特约记者 胡颜 赵迎 陈锦屏 张长鑫;防淋巴瘤多吃碱性食物[N];健康时报;2009年
8 本报记者 于娟;专家教您了解淋巴瘤[N];中国医药报;2009年
9 指导专家 上海第二医科大学附属瑞金医院血液科主任 沈志祥 教授;淋巴瘤康复期 莫小视复诊[N];医药导报;2009年
10 中国医学科学院肿瘤医院副院长 石远凯 浙江大学医学院二附院血液内科主任 张晓红 北京垂杨柳医院中医科主任 赵兰才 北京市肿瘤医院肿瘤康复科主任 章新奇 湖湘中医肿瘤医院放疗科主任 巫爱华;早发现,战胜夺命淋巴瘤[N];中国中医药报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵艳霞;真核细胞翻译起始因子4E在慢性粒细胞白血病中的作用研究[D];华中科技大学;2006年
2 王文清;棉酚对血液肿瘤细胞系的杀伤分化效应及机制研究[D];第四军医大学;2006年
3 梁小燕;抑癌基因LKB1调控细胞周期分子机制研究[D];重庆医科大学;2010年
4 蔡从利;以质粒为基础的RNA干扰方法的建立以及凋亡相关基因HSD11的功能研究[D];中国协和医科大学;2005年
5 秦洁;Par-4基因在急性白血病的表达及其促凋亡作用研究[D];山西医科大学;2009年
6 王洋;Midkine基因在急性白血病的表达及对白血病细胞增殖活性影响的研究[D];中国协和医科大学;2008年
7 蒋百春;DMP1 C末端突变小鼠模型的建立和表型分析[D];山东大学;2010年
8 丁学锋;Cpne5基因在脑发育中的功能初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
9 张永清;BCL-6与非霍奇金淋巴瘤的发生及白血病细胞K562分化和凋亡的关系[D];第四军医大学;2002年
10 孙懿;应用RNA干扰和蛋白质组学技术研究鼻咽癌细胞中p53的功能[D];中南大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘冬梅;利用组织芯片研究MALT型淋巴瘤中细胞周期与凋亡基因蛋白的表达及意义[D];山西医科大学;2003年
2 代婷婷;大鼠Foxo3a基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建[D];南方医科大学;2010年
3 黄莲芬;慢性粒细胞白血病细胞eIF4E表达及其调控初步研究[D];重庆医科大学;2008年
4 闫琛;两种CENP-E mRNA形式在不同肿瘤组织中的表达差异及其功能研究[D];重庆医科大学;2010年
5 张文皓;自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病14例临床研究[D];新疆医科大学;2007年
6 胡伶俐;牛杀菌—通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达[D];华中农业大学;2010年
7 邱志勇;C-kit受体在血液系统恶性肿瘤中的表达与意义的研究[D];昆明医学院;2005年
8 柳刚;淋巴瘤免疫组化和基因诊断标准化的初步研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
9 谭赛男;槲皮素对结肠癌细胞生长的影响及分子作用机制探讨[D];中国协和医科大学;2008年
10 童杰峰;ART抗白血病作用及其机理的初步研究[D];浙江大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026