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《华中科技大学》 2006年
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1,25(OH)_2D_3及其受体在川崎病发病中的作用及分子学机制研究

彭华  
【摘要】: 第一部分1,25(OH)2D3及受体在Jurkat细胞中的作用及其分子学机制研究 目的:研究1,25(OH)2D3与受体在Jurkat细胞中的表达和作用以及它们所介导的分子学机制。为进一步探讨1,25(OH)2D3对人外周血T细胞的作用提供理论基础。 方法:给予不同浓度1,25(OH)2D3干预培养Jurkat细胞,应用Western Blot技术检测1,25(OH)2D3受体(VDR)的表达以及介导其中的STAT3,ERK ,NF-ΚB,P53等4条信号通路的表达。 结果:1,25(OH)2D3浓度为10-1 mg/ml时为最大无毒剂量。VDR在Jurkat中有表达,但其表达不受1,25(OH)2D3浓度控制。ERK信号通路可以被1,25(OH)2D3抑制,而且浓度越高,作用越大。NF-ΚB在Jurkat细胞中呈持续活化状态,而这一现象与1,25(OH)2D3无关。1,25(OH)2D3可以启动P53通路,而且受其浓度调节。STAT3通路不受1,25(OH)2D3影响。 结论:1,25(OH)2D3对Jurkat细胞的生长有抑制作用。NF-ΚB,P53通路参与介导调控。 第二部分1,25(OH)2D3与受体在川崎病外周血T细胞中的作用及其分子学机制研究 目的:研究1,25(OH)2D3和受体在川崎病外周血T细胞中的作用以及它所介导的分子学机制。 方法:取30例川崎病患儿外周血,60例感染发热患儿和60例正常儿童外周血,分别采用T细胞分离柱分离外周血T细胞,植物血凝素刺激培养。应用Western Blot技术检测维生素D受体(VDR)的表达,以及与其相关的有介导作用的STAT3,ERK ,NF-ΚB,P53等4条信号通路的表达。并进一步探索1,25(OH)2D3对以上4条信号通路的调节作用。 结果:本实验成功的进行了体外原代培养T细胞。并检测到1,25(OH)2D3对外周血T细胞的最大无毒剂量为10-3 mg/ml。VDR在川崎病外周血T细胞中的表达明显高于感染发热患儿和正常儿童。STAT3只在川崎病外周血T细胞被活化,而且其特异性较强。P53蛋白不表达。在这一过程中,ERK通路被激活,NF-κB途径也被激活。1,25(OH)2D3对P53和ERK通路有一定的调节作用。体外给予1,25(OH)2D3干预培养时, ERK信号通路的活化被抑制,P53蛋白被激活。 结论:川崎病外周血T细胞中信号传递通路紊乱:细胞凋亡通路被抑制,增殖通路被过度激活,从而导致T细胞异常活化。 第三部分STAT3信号通路在川崎病发病中作用机制研究 目的:在第二部分实验中发现STAT3只在川崎病患儿外周血T细胞中被活化,其特异性较强,因此在此部分重点研究川崎病外周血T细胞中STAT3通路特异性活化的原因,以及STAT3-SOCS1在川崎病发病中作用,探索川崎病发病的分子学机制。 方法:利用通用载体T载体构建SOCS1-pMD18T质粒,再采用基因工程技术构建SOCS1- pEGFPC1质粒。将含绿色荧光的SOCS1报告基因转入外周血单个核细胞。应用Western Blot技术检测SOCS1,STAT3的表达。 结果:成功构建SOCS1-pMD18T质粒和SOCS1- pEGFPC1质粒并成功进行转染。转入细胞的SOCS1报告基因发挥其功能,抑制STAT3表达。 结论: SOCS1基因表达的上调可以使川崎病患儿外周血单个核细胞中SOCS1-STAT3达到平衡状态,为体内实验提供了可行的理论依据。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R725.4

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