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《华中科技大学》 2007年
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蛋白激酶CK2α特异性siRNA真核表达载体的构建及其对喉癌抑制作用的实验研究

王建亭  
【摘要】: 第一部分蛋白激酶CK2ɑ在喉癌细胞Hep-2及喉鳞状细胞癌组织中表达 实验一蛋白激酶CK2ɑ在喉癌细胞Hep-2中的表达 目的:研究蛋白激酶CK2ɑ(Protein kinase CK2ɑ)在人喉癌细胞Hep-2中的表达,探讨其与喉癌细胞之间的关系。 方法:体外培养Hep-2和Hacat细胞,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测蛋白激酶CK2ɑmRNA在Hep-2细胞和Hacat细胞中的表达;应用免疫细胞化学技术分别检测蛋白激酶CK2ɑ蛋白在Hep-2细胞和Hacat细胞中的表达。 结果:蛋白激酶CK2ɑmRNA在Hep-2细胞中高表达,在Hacat细胞中低表达,差异有统计学意义(P 0.01)。蛋白激酶CK2ɑ蛋白在Hep-2细胞中高表达,在Hacat细胞中低表达,差异有统计学意义(P 0.05)。 结论:蛋白激酶CK2ɑ过表达可能与喉癌的发生和发展有关。 实验二蛋白激酶CK2ɑ在喉鳞状细胞癌组织中的表达 目的:研究蛋白激酶CK2ɑ在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及临床意义。 方法:应用免疫组织化学SP法检测50例LSCC组织及10例正常喉黏膜组织中蛋白激酶CK2ɑ蛋白的表达情况,并采用图像分析系统对表达结果进行定量分析。 结果:蛋白激酶CK2ɑ蛋白在LSCC组织中阳性表达率为64.00%(32/50),在正常喉黏膜组织中阳性表达率为30.00%(3/10)。喉癌组和对照组之间蛋白激酶CK2ɑ阳性表达的平均吸光度值差异有统计学意义(P﹤0.01),喉癌组织中蛋白激酶CK2ɑ阳性表达的平均吸光度值与患者年龄、性别、临床分型(肿瘤部位)、临床TNM分期和淋巴结转移均无统计学意义,和病理分级(G1→G2+G3)有高度显著相关性(P﹤0.01)。 结论:蛋白激酶CK2ɑ过表达可能与LSCC的发生、发展有关,检测蛋白激酶CK2ɑ可作为判定LSCC恶性程度的潜在指标之一,抗蛋白激酶CK2ɑ可能为喉癌治疗提供一个新途径。 第二部分蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA真核表达载体的构建及其对喉癌细胞Hep-2生长及侵袭的抑制作用 目的:研究蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA对人喉癌细胞Hep-2增殖、凋亡和侵袭的影响。 方法:构建蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2及非特异性表达质粒psiRNA-hH1neo-cont,分别用脂质体转染法转染Hep-2细胞。采用逆转录聚合酶链反应、Western Blot技术检测转染后Hep-2细胞蛋白激酶CK2ɑmRNA和蛋白表达,采用MTT法检测转染后Hep-2细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测转染后对Hep-2细胞凋亡的影响,采用Boyden小室侵袭实验检测转染后Hep-2细胞侵袭力的变化。 结果:成功构建蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA真核表达载体。转染psiRNA-hH1neo-CK2载体后,Hep-2细胞蛋白激酶CK2ɑmRNA和蛋白表达均较非特异干扰组和空白组明显下降(P﹤0.05),并且生长缓慢,细胞周期出现明显亚二倍体峰,Hep-2细胞侵袭力明显减弱(P﹤0.01)。 结论:蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达载体可以抑制Hep-2细胞增殖和侵袭并诱导其凋亡。 第三部分蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA对人喉癌裸鼠移植瘤的抑制作用 目的:研究蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA对喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长和蛋白激酶CK2ɑ表达的影响 方法:裸鼠皮下种植人喉癌Hep-2细胞,肿瘤长到一定大小时,在肿瘤局部注射蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达质粒,观察肿瘤生长情况,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测蛋白激酶CK2ɑmRNA在肿瘤中的表达,应用免疫组织化学方法检测蛋白激酶CK2ɑ蛋白在肿瘤中的表达。 结果:转染蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达质粒后,裸鼠移植瘤生长缓慢(P﹤0.01),裸鼠移植瘤中蛋白激酶CK2ɑmRNA和蛋白表达均较非特异干扰组和空白组明显下降(P﹤0.05)。 结论:蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达载体可以下调裸鼠移植瘤中蛋白激酶CK2ɑ表达,抑制肿瘤生长。RNA干扰技术可能成为治疗喉癌的一种新途径。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R739.65

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【参考文献】
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