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《华中科技大学》 2007年
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高产谷胱甘肽(GSH)酵母菌种的选育及发酵条件研究

庞德钦  
【摘要】: 本研究对谷胱甘肽高产菌株的选育及培养条件进行了探索。 本文首先分析研究了还原型谷胱甘肽(Glutatione,GSH)的不同测定方法,并在前人研究的基础上对DTNB(5,5'-二硫代双-(2-硝基苯甲酸))法做了改进。改进后的DTNB法操作简单,精确度高,显色稳定,数据重现性好,并且不受半胱氨酸等含巯基物质的干扰。 使用改进的DTNB法测定24株不同种属的酵母菌的生物量及胞内GSH含量,并从中选择了谷胱甘肽总量和含量都较高的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-20作为诱变出发菌株。对出发菌株使用氯化锌和氯化汞作为抗性筛选物进行等离子体射线和紫外线诱变,采用平板快速筛选方法进行筛选,并研究其传代稳定性,得到谷胱甘肽含量和胞内含量都较高而且稳定的变异菌株DU-20。该菌株摇瓶发酵谷胱甘肽产量为75.48 mg/L,较出发株提高118.40%;每克干细胞含谷胱甘肽7.90 mg,较出发株提高78.33%。菌株经10次传代培养,谷胱甘肽产量仅下降5.36%,确定此菌株是一株性状较稳定可深入开发研究的优良菌株。 在摇瓶中对多培养基组成和培养条件进行了优化,以提高谷胱甘肽总量和胞内含量。研究了酵母对不同碳源和氮源的利用情况,确定合适的碳源为工业葡萄糖,有机氮源为酵母粉,无机氮源为乙酸铵,正交试验确定最佳浓度为葡萄糖2%,酵母粉0.6%,乙酸铵0.3%;考察了不同的无机盐的影响,正交实验确定最佳浓度为Na2HPO4 0.4%,KH2PO4 0.4%,MgSO4·7H2O 0.06%,CaC12·2H2O 0.02%;对摇瓶培养条件进行优化,确定培养基的pH自然,接种量为10%,摇瓶装液量为30 ml/250 ml,发酵时间为34 h。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q93

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【参考文献】
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