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《华中科技大学》 2008年
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银屑病患者皮损和外周血中浆细胞样树突状细胞,TLR9、IRF-7、IFN-αmRNA表达研究

陈静  
【摘要】: 第一部分浆细胞样树突状细胞在银屑病患者皮损中募集 目的探讨浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid Dendritic Cell,pDC)在银屑病患者皮损和正常皮肤中的聚集及其意义。 方法收集本院皮肤科门诊或病房经临床与病理检查后诊断明确的寻常型进行期银屑病患者皮损22例,15例整形外科患者的皮肤做正常对照,液氮快速冷冻后-70℃保存备用。每例皮损做冰冻切片三张,采用免疫组织化学S-P法,检测pDC特异性抗原CD123,以胞膜或胞质出现棕黄色颗粒物质,且着色强度明显高于背景非特异性染色为准记数,取光学显微镜下每平方毫米视野(10×40)中的阳性细胞数,即在×10目镜×40物镜下,随机选择5个视野,其中每平方毫米内的平均阳性细胞数作为记数标准,以均数±标准差表示。 结果在22例银屑病皮损中,CD123+的pDC在真皮乳头、表皮基底层均有浸润,呈棕黄色颗粒,具体表达结果是10±2.1,15例正常对照皮肤中CD123没有出现或零星出现,具体结果是0.4±0.6,在统计学上差异有显著性(P0.01)。 结论CD123阳性的pDC在银屑病患者皮损中浸润明显增加,可能与银屑病的发病相关。 第二部分浆细胞样树突状细胞在银屑病患者外周血中的比例 目的探讨CD123+BDCA-2+浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell, pDC)在银屑病患者和正常人外周血中的比例及其意义。 方法收集本院皮肤科门诊或病房经临床与病理检查后诊断明确的22例寻常性进行期银屑病患者;正常人对照15例,均源自本院整形外科。取患者以及正常人对照组肘静脉血2ml,肝素抗凝(20μl/ml),置于5ml专用试管中。采用流式细胞分析术检测22例银屑病患者外周血CD123+BDCA-2+pDC的比例,15例整形外科手术病人的外周血作正常对照。 结果流式细胞术显示寻常型银屑病患者外周血中,CD123+BDCA-2+pDC占外周血单个核细胞的比例是(0.17±0.07)%,正常对照外周血中CD123+BDCA-2+pDC占外周血单个核细胞的比例是(0.33±0.20)%。同正常对照相比,pDC在银屑病患者外周血中下降,在统计学上差异有显著性(P0.01)。 结论CD123+BDCA-2+pDC在银屑病皮肤中聚集可能起因于pDC活化从血中进入皮肤重新分布。 第三部分TLR9及其mRNA在银屑病患者皮损中的表达 目的探讨TLR9及其mRNA在银屑病患者皮损和正常皮肤中的表达及其意义。 方法收集本院皮肤科门诊或病房经临床与病理检查后诊断明确的寻常型进行期银屑病患者皮损22例,15例整形外科患者的皮肤做正常对照,液氮快速冷冻后-70℃保存备用。免疫组织化学:组织甲醛固定后,石蜡包埋,每例皮损做石蜡切片三张,采用免疫组织化学S-P法,检测TLR9的表达,以胞膜或胞质出现棕黄色颗粒物质,且着色强度明显高于背景非特异性染色为准记数,取光学显微镜下每平方毫米视野(10×40)中的阳性细胞数,即在×10目镜×40物镜下,随机选择5个视野,其中每平方毫米内的平均阳性细胞数作为记数标准,以均数±标准差表示。RT-PCR:取皮肤标本50mg加1mlTrizol按说明书抽提RNA并逆转录。合成的cDNA于-20℃保存或直接行PCR扩增,扩增产物于于1.5%琼脂糖凝胶稳压电泳,紫外灯下观察结果并摄影。 结果在22例银屑病皮损中,TLR9阳性细胞在真皮上部表达,呈棕黄色颗粒,具体表达结果是14±2.2,15例正常对照皮肤中未检测到TLR9的阳性表达,在统计学上,差异有显著性(P0.01)。银屑病皮损及正常人皮肤中均有TLR9mRNA的表达。在银屑病皮损TLR9mRNA的表达水平为1.2818±0.0902,较正常人对照组(0.8681±0.0302)明显增高,在统计学上差异有显著性(P0.01)。 结论TLR9及其mRNA在银屑病患者皮损中的表达明显增加,可能与银屑病发病相关。 第四部分IRF-7mRNA、IFN-αmRNA在银屑病患者皮损中的表达 目的探讨银屑病患者皮损中干扰素调节因子7(Interferon regulate factor,IRF-7)、干扰素α(Interferon-a,IFN-α)mRNA的表达及其意义。 方法收集本院皮肤科门诊或病房经临床与病理检查后诊断明确的寻常型进行期银屑病患者皮损22例,15例整形外科患者的皮肤做正常对照,液氮快速冷冻后-70℃保存备用。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例银屑病患者皮损和15例正常对照中IRF-7、IFN-αmRNA的表达。 结果寻常型银屑病患者皮损中IRF-7mRNA的相对量为0.9817±0.0503,较正常人对照组(0.6343±0.0439)明显增高,在统计学上差异有显著性(P0.001)。寻常型银屑病患者皮损中IFN-αmRNA的相对量为0.8524±0.0465,正常人皮肤组织中为0.8324±0.0244,在统计学上差异无显著性(P0.05)。 结论在银屑病皮损中(而不是在正常皮肤),IRF-7mRNA表达明显增加,它是IFN-αmRNA的主要诱导基因。因为在缺乏有效水平的IFN-α细胞因子时IFN-α信号的出现,推测在银屑病损害形成的早期,IFN-α已经产生,并且是暂时表达。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R758.63

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