收藏本站
《华中科技大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

组织工程人工肌肉生物学特性的改善及PLG生物支架作为骨骼肌细胞载体的应用研究

王琳  
【摘要】: 第一部分组织工程人工肌肉的构建与评价及神经支配特性的改进 目的:体外构建组织工程人工肌肉,并分析组织工程人工肌肉中肌球蛋白重链亚型(MHC)表达情况。为进一步提高人工肌肉对神经递质的敏感性,我们尝试上调乙酰胆碱受体在人工肌肉表面的数目并诱导人工肌肉形成形态成熟的乙酰胆碱受体。 方法:将表达绿色荧光蛋白的C3H小鼠原代成肌细胞与120μl Fibrin水凝胶混合,体外构建人工肌肉。利用实时定量PCR对平面培养细胞和组织工程人工肌肉中的MHC亚型进行分析。利用Agrin蛋白上调乙酰胆碱受体在人工肌肉表面的数目。用Laminin蛋白在人工肌肉表面诱导形成形态成熟的乙酰胆碱受体。并用激光共聚焦显微镜计数乙酰胆碱受体数目,观察乙酰胆碱受体形态。 结果:未经过任何处理的组织工程人工肌肉的MHC亚型处于胚胎期和成熟期之间,相当于围周期(perinatal)的发育水平。平面培养的细胞中MHC亚型为胚胎期水平。Agrin蛋白诱导,增加了乙酰胆碱受体在人工肌肉表面的数目。Laminin蛋白处理,改善了乙酰胆碱受体的结构,形成形态成熟乙酰胆碱受体。 结论:从发育学意义上看,人工组织肌肉表达更加成熟的MHC亚型,更类似成熟肌肉组织。Agrin蛋白诱导成功增加乙酰胆碱受体数目。Laminin蛋白诱导,改善了乙酰胆碱受体的结构,使之变得更加成熟有利于更多神经突触的形成,进一步提高了人工组织肌肉在神经生物学上的结构优势,为在人工肌肉中引入神经分布奠定了基础。 第二部分VEGF改善组织工程人工肌肉周围血管网络分布的研究 目的:改善人工组织工程肌肉的生物特性,增加其周围血管生成,达到增强其与宿主循环系统营养与代谢交流的目的,使之在移植后更好与宿主整合,长期生存,在宿主体内发挥作用。 方法:逆转录病毒感染成肌细胞,使其分别表达VEGF和GFP。用分化培养液,体外融合表达VEGF和GFP的成肌细胞,以形成杂交人工肌肉。用共聚焦显微镜观察杂交人工肌肉组织形态和结构,以及移植前后细胞存活率。用免疫酶连反应检测VEGF含量。用伊文思蓝染色评价人工肌肉周围血管网络形成情况。 结果:表达VEGF的细胞可在分化条件下分化为成熟肌细胞,并形成肌纤维,肌细胞分化过程不受VEGF生长因子表达的抑制。用这种细胞在体外成功构建组织工程人工肌肉,结构形态与生理状态下的肌肉相似。VEGF的表达不影响杂交人工肌肉中肌细胞的存活率。调节杂交比例可调节VEGF的生成量。移植到小鼠皮下之后,表达VEGF的人工肌肉明显增加人工肌肉周围血管网络的生成,提高肌细胞的存活率。 结论:肌细胞分泌的VEGF可在移植区域强烈促进局部微血管生成,这种影响可持续几个月,为其移植后与宿主整合提供了生理基础,也有利于肌细胞所表达的治疗性蛋白尽可能多进入血液循环,在宿主体内发挥有效作用。 第三部分PLG生物支架作为骨骼肌细胞载体的研究及NK细胞移除对支架上肌细胞体内存活率的影响 目的:评价人工合成的可降解生物支架PLG作为成骨骼肌细胞载体的效果,以及去除裸鼠NK细胞对PLG支架上成熟肌细胞成活率的影响。方法:利用高压气泡法成功制备可降解的多孔PLG生物支架。将人类原代骨骼成肌细胞接种至PLG生物支架上,检测成肌细胞在PLG支架是否可体外分化为成熟肌细胞。将接种肌细胞的PLG生物支架移植至免疫缺陷型小鼠体内,观察肌细胞在体内存活率。利用抗NK细胞抗体去除裸鼠体内NK细胞,检测去除NK细胞后,PLG生物支架上肌细胞的存活率。 结果:成功制备PLG生物支架。成肌细胞可在PLG生物支架上分化为成熟肌细胞。与无张力组相比,PLG支架显著提供肌细胞在体存活率。PLG在移植四周后,PLG生物支架上的肌细胞密度降低了78%。去除裸鼠体内NK细胞的影响,在第4周,肌纤维中肌细胞的存活率达34.72%,远高于未去除NK细胞组的存活率22.72%。经过NK细胞抗体处理过的动物肌纤维绿色荧光强度比未经过处理组高2倍以上。 结论:PLG生物支架可作为成肌细胞的载体,为肌细胞提供张力,成肌细胞在其上可分化为成熟肌细胞,形成肌纤维,并长期存活。去除NK细胞可使肌细胞在移植之后存活率提高。该实验为肌细胞以及PLG生物支架用作基因疗法的载体提供了实验依据。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R318.1

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;长期憋尿坏处多[J];幸福(婚姻);2011年06期
2 於永爱;金仙玉;;子宫内膜异位症疼痛机制[J];中国妇产科临床杂志;2011年05期
3 任瑞颖;李志强;;不同麻醉方法用于直肠肛管手术的麻醉效果比较[J];医学信息(上旬刊);2011年06期
4 刘伟;郑伟;;吻合指腹静脉指尖离断再植18例报告[J];辽宁医学杂志;2011年04期
5 阿不力克木·米吉提;帕丽旦;;带状疱疹的健康教育及相关因素[J];新疆医学;2011年05期
6 严建军;;腕管综合征[J];世界高尔夫;2011年07期
7 马聪慧;王丽娅;李晶;;Ⅱ型糖尿病患者角膜的共聚焦显微镜观察[J];眼科;2011年03期
8 刘晓铭;仲远明;王茵萍;;耳廓望诊的意义及前景[J];长春中医药大学学报;2011年04期
9 王晓东;杨卫明;;综合疗法治疗带状疱疹后遗神经痛36例[J];中医研究;2011年07期
10 加米西·马木尔江;;均衡牵引配合温针治疗腰椎间盘突出症60例[J];中国社区医师(医学专业);2011年22期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴汉卿;;关于背部九大系统疾病相关诊治区划分及背部经穴线神经分布探讨[A];中国特种针法应用与针灸临床学术交流大会论文集[C];2000年
2 邵立健;陈林;邹江洪;朱清仙;;大鼠烫伤后肠壁CGRP能神经分布的变化[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
3 王荣;刘念;陈新山;王琳;;扩张型心肌病心脏交感神经分布的临床研究[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
4 赵泽驹;陆立;付逆;杨胜波;罗旭;;犬膀胱壁内神经分布[A];2007年贵州省医学会泌尿外科分会学术年会论文汇编[C];2007年
5 黄燎原;薛黔;徐荣明;;人股二头肌肌内外神经分布及临床意义[A];2004年浙江省骨科学术会议论文汇编[C];2004年
6 陈和木;;颈椎前软组织内交感神经分布的实验研究[A];第三届全国康复医学青年学术会议论文集[C];1999年
7 梁英;曹丽华;宋丽;李晓洁;;烧伤后瘢痕增生患者的康复护理[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
8 叶祥柏;夏来启;沈运彪;王锡华;李友良;;阴股沟皮瓣再造阴道的临床体会[A];第五届全国烧伤救治专题研讨会烧伤后脏器损害的临床救治论文汇编[C];2007年
9 刘美杉;;中西医结合治疗带状疱疹后遗神经痛23例[A];2011全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2011年
10 薛斯亮;李利;周敏惠;;面部除皱术中SAMS与面神经分布的解剖学要点[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;扼制打嗝方法[N];保健时报;2005年
2 韩国柱;切除包皮能否根治疱疹[N];农村医药报(汉);2006年
3 丁清桂;梳头浴面疗三叉神经痛[N];医药养生保健报;2006年
4 浙江中医药大学附属第三医院 朱祥成 教授;耳鸣可能是“心病”先兆[N];健康时报;2008年
5 王延兆;背脊疼痛是何因[N];解放日报;2000年
6 仇倩;带状疱疹别忽视护理[N];医药养生保健报;2006年
7 戴志明;打嗝不一定是小事[N];农村医药报(汉);2008年
8 辽宁中医药大学教授 杨元德;股外侧皮神经炎≠坐骨神经痛[N];卫生与生活报;2007年
9 沈施德(上海中医药大学文献所 教授);哪些疾病会引起耳鸣[N];上海中医药报;2002年
10 江西省心理康复中心 主任医师 张业祥;什么情况下需看心理医生[N];家庭医生报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王琳;组织工程人工肌肉生物学特性的改善及PLG生物支架作为骨骼肌细胞载体的应用研究[D];华中科技大学;2009年
2 李雅钗;乙状结肠阴道黏膜神经分布与性生活质量的关系及组织工程阴道动物模型构建的初步研究[D];河北医科大学;2011年
3 林雪群;内皮素-1及其受体在烫伤大鼠脑底动脉的表达及其意义[D];江西医学院;2005年
4 康辉;椎间盘纤维环交感神经分布特点与青少年特发性脊柱侧凸发病的相关研究[D];第二军医大学;2008年
5 滕莉荣;妊娠及阴道分娩后产妇盆底组织神经病理研究[D];中国协和医科大学;2007年
6 周海宇;颈源性头颈痛的神经机制研究[D];华中科技大学;2007年
7 陈金栋;腰交感神经解剖及腰椎间盘痛觉传导通路的相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
8 凌丽;正常人皮肤神经纤维定量和形态学标准化研究[D];吉林大学;2009年
9 李勤;鲜红斑痣激光疗效测评方法的建立及临床应用研究[D];第一军医大学;2007年
10 陈康寅;心脏交感神经与兴奋收缩耦联在压力超负荷左室肥厚和心力衰竭中的变化及其相互关系[D];天津医科大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘乾仁;TFCC神经分布的解剖和免疫荧光研究[D];吉林大学;2011年
2 李翔;乳头、乳晕区神经分布和乳房静脉应用解剖学研究[D];青岛大学;2001年
3 杨荣辰;女性尿道括约肌的神经分布:胎儿免疫组化研究[D];青岛大学;2007年
4 付文芹;腰椎小关节退变致腰腿痛机制的实验研究[D];东南大学;2006年
5 韩正锋;正常家兔颈椎椎间盘内神经分布的实验性研究[D];河北医科大学;2007年
6 宗益平;PGP9.5、CPON、NPY和VIP肽能神经在成人睾丸组织中的分布[D];南京医科大学;2008年
7 林红斌;颞下颌关节神经分布的研究[D];青岛大学;2002年
8 张大伟;过度运动对肱二头肌长头肌腱组织形态学和生物力学及其周围组织神经分布影响的实验研究[D];第四军医大学;2001年
9 杨帅平;PCNA与NPY在先天性肾积水肾盂输尿管连接部狭窄段的表达及意义[D];郑州大学;2007年
10 钟楚楠;等离子消融髓核后椎间盘SP阳性神经分布的研究[D];郑州大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026