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《华中科技大学》 2009年
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槐耳清膏在肝癌介入治疗中作用机制的实验研究

任建庄  
【摘要】: 目的 观察槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的影响;观察槐耳清膏联合经肝动脉化疗栓塞对兔VX2肝癌肝功能、VEGF、MVD、肿瘤生长及转移的影响。观察槐耳清膏联合经肝动脉化疗栓塞对兔VX2肝癌细胞凋亡及其相关蛋白P53、Bax和Bcl-2表达的影响。为槐耳清膏联合TACE治疗肝癌提供理论依据。 材料与方法 人肝癌细胞株Hep-G2采用DMEM培养基(含10%胎牛血清)培养。取对数生长期的肝癌Hep-G2细胞,分别与DMEM(含10%胎牛血清)和含槐耳清膏不同浓度(1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml,8mg/ml)的DMEM培养液(含10%胎牛血清)作用24小时、48小时、72小时后,应用MTT比色法检测肝癌细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡情况。 将VX2瘤粒直接种植于新西兰大白兔左肝内2周,将36只MRI证实已成功接种VX2的荷瘤兔随机分为3组,每组12只,开腹经肝动脉穿刺分别给予不同处理:A组为生理盐水对照组,经肝动脉注入0.2ml/kg体重生理盐水;B组为TACE组,经肝动脉注入超液态碘化油0.2ml/kg+丝裂霉素0.5mg/kg乳剂;C组为TACE+槐耳清膏灌服组,TACE方法同B组,同时术后每天灌服槐耳清膏500mg/kg。介入治疗前1天及治疗后3天、7天、14天抽血检测血清的ALT和AST。每天观察动物生长情况,术后二周处死动物,测量动物体重、肿瘤体积、肿瘤坏死区面积,计算肿瘤生长率、坏死率;观察肝、肺及腹腔淋巴结转移情况;用免疫组织化学方法检测各组肿瘤细胞Ⅷ因子、VEGF、P53、Bax和Bcl-2蛋白的表达情况,对Ⅷ因子染色阳性血管内皮细胞进行MVD计数;用TUNEL法检测各组肿瘤细胞的凋亡指数。 结果 MTT结果显示:在槐耳清膏浓度为1-8mg/ml,分别处理细胞24小时、48小时、72小时后,与对各自对照组相比(p<0.05),其能明显抑制Hep-G2细胞的增殖,随着槐耳清膏药物浓度的增加,细胞存活率降低,A值变小,IR值增大,呈量效关系。 流式细胞仪检测结果显示:槐耳清膏能明显诱导肝癌细胞凋亡,在槐耳清膏浓度为1-8mg/ml时,分别处理细胞24小时、48小时、72小时后,其诱导Hep-G2细胞的凋亡率与对照组相比均有显著性差异(p<0.05),随着槐耳清膏药物浓度的增加,时间延长,其诱导Hep-G2细胞的凋亡率逐步增加。 术前1天3组动物体重、肿瘤体积无显著性差异(P>0.05)。术后2周,B组动物体重下降明显,与A组、C组相比差异均有显著性(P<0.05);A组与C组相比差异无显著性(P>0.05)。 介入治疗前1d,3组动物ALT、AST水平差异无显著性;介入治疗后3、7d,3组动物ALT和AST水平相比差异有统计学意义(F=28.411,55.537 P<0.05;F=8.565,6.401 P<0.05),C组与B组相比差异有统计学意义(P<0.05)。 治疗后2周肿瘤体积、肿瘤生长率和肿瘤坏死率B组、C组与A组相比差异均具有显著性(P<0.01),B组与C组相比差异亦具有统计学意义(P<0.05)。 肝和肺的转移B组与A组相比差异无显著性(P>0.05),C组与B组、A组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);腹腔淋巴结转移3组相比差异无显著性(P>0.05)。 3组动物MVD值和VEGF的表达强度以C组最低,B组最高,3组相比差异有统计学意义(F=5.22,P=0.011;x~2=7.247,P=0.027 P<0.05),C组与B组相比差异有统计学意义(P<0.05)。 A组的肿瘤细胞凋亡指数最小(7.31±2.85%),C组的肿瘤细胞凋亡指数最高(15.73±2.89%);3组动物肿瘤细胞的凋亡指数相比差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组(12.83±3.51%)相比差异有统计学意义(P<0.05)。 3组动物肿瘤细胞的Bax蛋白表达阳性率A组(16.67%)最低,C组(83.33%)最高;P53和Bcl-2蛋白表达阳性率C组最低(25.00%,16.67%),A组最高(91.67%,83.33%);3组动物肿瘤细胞的P53、Bax和Bcl-2蛋白表达阳性率相比差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组相比相比差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 槐耳清膏体外能抑制Hep-G2细胞增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡;槐耳清膏改善动物TACE术后的生存质量;槐耳清膏改善动物TACE术后的肝功能;槐耳清膏抑制肿瘤生长,促进肿瘤坏死;槐耳清膏抑制肿瘤转移;槐耳清膏通过减少VEGF表达,抑制肿瘤血管生成;槐耳清膏通过促进肝癌细胞Bax蛋白表达增高,使P53和Bcl-2蛋白表达下降,导致肝癌细胞的凋亡增加;槐耳清膏对HCC有治疗作用。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R735.7

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